基因工程中为什么要建立基因文库?基因文库是如何建立的?
方便的获取所需的基因片段,这些片段被保存在一些细菌里
从基因文库中寻找所需基因片段的方法有两种:
1.已知目的基因的一小段序列.则可以用荧光等标记做成基因探针,与基因文库中的细菌放在一起,当细菌繁殖时就会与探针杂交,符合的片段就被筛选出来.
2.已知目的基因所编码的蛋白质.则可以用该蛋白质注射进别的生物中,产生抗原,提取含有抗原的动物血清,做放射性元素或荧光标记等,与基因文库中的细菌放在一起,由于在细菌中这些基因片段被整合在了能表达的DNA序列上,故菌落中就会有目的基因所编码的蛋白质,根据抗原和抗体的特异性结合,我们就能筛选出目的基因
当我们没有所需物种的基因文库时,常用鸟枪法获取目的基因,即提取出该物种的DNA后,与限制酶放在一起,限制酶会识别特定的核苷酸序列,把基因切成小段,之后我们就可以用上面的两种方法来获取目的基因了.
总而言之,构建基因文库就是别人替你做好了切割的工作,并把它导入到细菌中去了,这样就节省了大量的人力物力.
就像你去图书馆根据分类很容易找到你所需要的材料一样,比你漫无目的地找着一段话要快很多………………
就是这样的
基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题.所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因.常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选
直接获取
1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取.利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下:① 选用特定限制性内切酶,DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA.③ 经适当处理,将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组.④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒.⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌,形成大量噬菌斑,从而形成含有整个DNA的重组DNA群体,即文库.
2.cDNA文库法(即原教材中提到的逆转录法).cDNA文库,是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体.虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因,但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多,相关工作量同样大得多.更为重要的是,在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子,但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在,所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列,即不能表达真核生物DNA.而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列(已在拼接过程中被去除),所以可以以真核生物成熟mRNA为模板,逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达.因此,在基因工程中,cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法.
3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”.这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来.鸟枪法的具体做法是:用限制酶(即限制性内切酶)将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来.如许多抗虫,抗病毒的基因都可以用上述方法获得.
用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便,缺点是工作量大,具有一定的盲目性.
人工合成
1.(主要是序列已知的基因).主要是通过DNA自动合成仪,通过固相亚磷酸酰胺法合成,具体过程可以网上查询,反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列,一般适于分子较小而不易获得的基因.对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物,再利用引物获得目的基因.
2.聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定.过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成.PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑
他只是给目的基因的扩增
目的:当我们要对某一基因结构和功能进行研究时,首先要获得此基因,最简便的方法就是直接从基因文库中获取。
构建过程:将纯化的细胞基因组DNA用限制性内切酶消化,获得一定大小的DNA片段,将这些片段克隆到载体中,从而获得含有不同DNA片段的噬菌体,这就是基因组文库。
打个比方让你建图书馆,你就得把所有书分门别类放,以便于找。这么多书你一个人又搞不定,所以你的找一群人,一个人负责一部分,各自干各自的,然后最后一汇总就行了。
基因组相当于一个大楼,基因相当于板砖。建基因组文库相当于把大楼拆了,把每个板砖再放到质粒里,研究每个板砖的性质,或者保留这些板砖,用于其他的用处。
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红旗渠的修建具有以下几个重要原因:首先,红旗渠能够有效解决干旱地区的水资源短缺问题。当时,中国北方干旱的地区缺乏水源,严重制约了当地农业生产和人民生活。红旗渠通过引水和蓄水的方式,将水源从丰富的地区输送到干旱的地区,填补了这一短缺,改善了水资源供应状况。其次,红旗渠的修建能够提高农田灌溉条件...
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2.政治意义:中哈天然气管道工程的建成和运营,进一步加深了中国与哈萨克斯坦的政治互信和合作关系。这条管道见证了两国在能源领域的紧密合作,为双边关系的发展注入了新的活力。同时,管道工程也有助于提升中国在中亚地区的政治影响力,为地区稳定和繁荣做出贡献。3.能源安全:中哈天然气管道工程的建成,...
工程上的技改、基建、大修、土建是什么意思?它们之间的区别是什么?_百 ...
另一种诠释:基本建设指的是实现固定资产再生产的一种经济活动,它包括固定资产的建造和安装、固定资产的购置以及与此相联系的其他工作(如:征地、设计、科学实验、培训、建设单位管理工作等)。 三、大修工程的范围 凡需要牵动或拆换部分主体构件,但不需全部拆除的工程为大修工程. 大修工程主要适用于严重损坏房屋. ...
宋缪尼尔:[答案] 基因文库技术分离目的基因 所谓文库(1ibrary)是指一种全体的集合.基因文库(gene library)则是指某一生物类型全部基因的集合.这种集合是以重组体形式出现.某生物DNA片段群体与载体分子重组,重组后转化宿主细胞,转化细胞在选择培养基...
文水县18026597915: 基因工程中为什么要建立基因文库?基因文库是如何建立的? - ?
宋缪尼尔: 基因文库是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体. 目的:当我们要对某一基因结构和功能进行研究时,首先要获得此基因,最简便的方法就是直接从基因文库中获取. 构建过程:将纯化的细胞基因组DNA用限制性内切酶消化,获得一定大小的DNA片段,将这些片段克隆到载体中,从而获得含有不同DNA片段的噬菌体,这就是基因组文库. 打个比方让你建图书馆,你就得把所有书分门别类放,以便于找.这么多书你一个人又搞不定,所以你的找一群人,一个人负责一部分,各自干各自的,然后最后一汇总就行了.
文水县18026597915: 为什么要构建基因文库? - ?
宋缪尼尔: 因为这样当我们要研究某基因时可以减少不必要的过程,同时我们还可以通过在基因文库查基因图谱来治疗疾病
文水县18026597915: 为什么构建基因文库 - ?
宋缪尼尔: (1). 质粒文库 质粒是最早用于基因克隆的载体.现已有各种适用于不同工作的如克隆、表达、测序等专用商品质粒.但在构建基因文库上,由于质粒相对较小并只能容纳比自身更小的片段,因此它不能用于构建核基因组文库,通常只用来构建短...
文水县18026597915: 为什么要构建基因文库 直接从含有目的基因的生物中提取不行吗 - ?
宋缪尼尔: 基因文库可以构建所需的目的基因,并且不含有其他基因.一般母目的基因都很小,直接提取的话会含有很多其他片段的基因,难以将他们分离开来
文水县18026597915: 为什么要构建基因文库而不是直接从含目的基因的生物体内提取 - ?
宋缪尼尔: 确定要提取哪种基因,且序列有足够的特异性,就可以直接从生物体提取.文库只相当于有序排列的仓库,便于查找.另外如果原生物材料稀少,文库可以有效保存和扩增.
文水县18026597915: 构建基因文库有何优点 - ?
宋缪尼尔:[答案] 构建基因文库的不只是使生物的遗传信息以稳定的重组体形式贮存起来,更重要的是它是分离克隆目的基因的主要途径.对于复杂的染色体DNA分子来说,单个基因所占比例十分微小,要想从庞大的基因组中将其分离出来,一般需要先进行扩增,所...
文水县18026597915: 为什么要构建基因文库直接从含有目的基因的生物中提 - ?
宋缪尼尔: 理论麻烦;首先取目基扩增转入受体细胞等操作都需要载体目基片段直接其细胞内表达;问题
文水县18026597915: 基因文库是怎么回事? - ?
宋缪尼尔: 基因文库简单说就是将细胞中的所有DNA用酶切成小片段,并将每一段利用载体转入宿主细胞中,这样经过培养后,每一个菌株都含有一小段DNA,再利用特殊方法将要检查的目的基因挑选出来菌株,提取DNA后进行测序, 之所以用基因文库是因为,直接测基因组DNA,太大了,测不准,而利用载体进入宿主细胞之后,DNA片段可以随宿主细胞一起复制,可以得到很多相同的拷贝,方便检查
文水县18026597915: 构建基因(DNA)文库的文库有什么用 - ?
宋缪尼尔: 做了文库就可以测序,测序过了别人就可以通过网络和计算机获得这些序列,就可以“纸上谈兵”,用不着自己去再去测序. 另外文库还可以用作物种基因的保存方法.像我国三峡建设的时候就抢救性地做了库区植物的文库,因为这些植物在库区建立后就会消失,以后再也没有了.