怎样在荧光定量pcr仪上判读纯合还是杂合
实荧光定量PCR即 Real time PCR(称实定量PCR) 定量PCR已经基于凝胶低通量析发展高通量荧光析技术即实定量PCR实荧光定量PCR技术于1996由美Applied Biosystems公司推由于该技术仅实现PCR定性定量飞跃且与规PCR相比具特异性更强、效解决PCR污染问题、自化程度高等特点实定量PCR (real-time quantitative PCR)指PCR指数扩增期间通连续监测荧光信号强弱变化即测定特异性产物量并据推断目基初始量需要取PCR产物进行离目前实定量PCR作极效实验已广泛应用于物研究各领域 实荧光定量PCR 技术主要应用： 1. DNA 或RNA 绝定量析：包括病原微物或病毒含量检测,转基植物转基拷贝数检测RNAi 基失率检测等 2. 基表达差异析：例比较经同处理本间特定基表达差异(药物处理、物理处理、化处理等 )特定基同相表达差异及cDNA 芯片或差显结确证 3. 基型：例SNP 检测甲基化检测等 Realtime PCR 用两种别：Sybr green（荧光染料掺入） Taqman probe （探针） SYBR green PCR反应体系加入量SYBR荧光染料SYBR荧光染料特异性掺入DNA双链发射荧光信号掺入链SYBR染料发射任何荧光信号保证荧光信号增加与PCR产物增加完全同步 适用： 1、灵敏度高：使用SYBR使荧光效增强1000倍 2、通用性,需要设计探针,简便,省,价格低廉 3、通用型内外科研普遍使用 4、高通量规模定量PCR检测 5、专性要求高定量PCR检测 Taqman Probe PCR扩增加入引物同加入特异性荧光探针该探针寡核苷酸两端别标记报告荧光基团淬灭荧光基团探针完整报告基团发射荧光信号淬灭基团吸收；PCR扩增Taq酶5’-3’外切酶性探针酶切降解使报告荧光基团淬灭荧光基团离荧光监测系统接收荧光信号即每扩增条DNA链荧光形实现荧光信号累积与PCR产物形完全同步 适用： 1、具高适应性靠性实验结稳定重复性特异性更高 2、适用于扩增序列专体系检测 3、品靶基含量低定量PCR检测 4、靶基特异序列较短论优化引物设计条件都能解决 5、存与靶基同源序列PCR容易现非特异性扩增特异性要求较高定量 6、广泛用于类传染病诊断病原定量,物病原体基检测,畜禽产品检验检疫,物制品鉴定 参考资料： 百度百科
最好都有。普通的基因扩增仪（PCR仪）只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多，而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果，还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病，品种分子标记筛选，甚至亲自鉴定等都可以由普通PCR仪完成。但是，某些需要定量的实验就必须用到实时定量PCR了。比如检测某些病原物的数量（血液乙肝病毒复制程度），特定基因的表达量（比如结合反转录做的RNA定量分析），某些基因在染色体组中拷贝数（以前往往使用southernblot技术）等等。荧光定量PRC一般不需要对扩增产物进行电泳分析，操作相对简单些，但是耗材实在是贵。简单来说，看有没有用普通PCR仪，看有多少用荧光定量PCR
对各个基因型采用不同颜色的探针，最后的结果类似于下图
这个实验基因型有两种，纯合子1型显示为蓝色，纯合子2型显示为红色，杂合子显示为绿色。
实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗
实时荧光定量pcr就是qpcr吗 实时荧光定量PCR（qPCR）用什么试剂盒比较好 加入荧游标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光讯号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每回圈一次就收集一个数据 实时荧光定量pcr与荧光定量pcr一样么?这里的实时...
做荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别?半定量的PCR退火温度和荧光定量...
但是如果要发表比较高档次的论文的话，某些变态的老外审稿并不认可单一的荧光定量PCR的结果，他们会同时需要作者做一个半定量RT-PCR来作为辅助证明。半定量RT-PCR的引物和荧光定量PCR的引物设计原则并不是一样的，换而言之，二者的引物并不是可以通用的。所以退火温度自然是不同的，具体怎么不同，要根据...
做荧光定量PCR时,它的计算公式是什么
△△Ct = △Ct(试验样品) — △Ct(基准样品)△Ct(试验样品) = Ct（试验样品,目的基因） — Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品) = Ct（基准样品,目的基因） — Ct（基准样品,内参基因）2 －△△Ct =2 －（－1.2）= 2.30
求解荧光定量PCR检测报告 检验项目 ct ct 值:∝ ct值标准:≥40 根据标 ...
荧光定量PCR检测的是样本中核酸含量，CT值反映的是样本中的核酸含量的浓度。1. 检测样本Ct值小于等于30.0，且曲线有明显的指数增长期，测定结果有效，可直接报告样本阳性；2. 检测样本Ct值大于30.0且小于40时，重复一次，如果Ct值仍小于40，且曲线有明显的指数增长期，可报告样本阳性，否则报告样本阴性...
荧光实时定量PCR要购买哪些试剂和材料
如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器 1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水 2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop 3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。4.荧光定量PCR试剂：通常有用...
实时荧光定量pcr内参是什么东西
实时荧光定量pcr内参是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别
2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度 二、原理不同 1、普通pcr引物设计：为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。2、荧光定量pcr引物设计：在PCR反应体系中...
荧光定量PCR是否需重复,结果怎样选取
当然要做重复。不过一般都是在96孔PCR板上点3~5个孔做重复就可以了。结果直接取个空计算的平均值即可。
一文知晓PCR,定量PCR,数字PCR方法选择
在图3中，3个反应孔含有相同量的 DNA模板，但到达平台期后产生的荧光信号却不同，说明扩增产物的量存在不同（反应动力学变化所致）。这也表明了传统PCR平台期测量时结果存在变异，产出的DNA量不一定能反映最初情况，所以无法进行定量。荧光定量 PCR 同样在图3中，发现在指数期内，3个反应孔的扩增曲线...
实时荧光定量pcr实验中扩增曲线末尾起跳的原因分析包括?
末尾起跳原因：（1）阴参曲线末尾起跳，通常表示存在污染；（2）复检样本，排除非特异性扩增的可能性；（3）正常样本也可存在曲线末尾起跳，表示样本浓度低或者加样量不准确。解决方法：排除是否存在污染；复检样本，如果复检后曲线为阴性直线则说明之前的末尾起跳为非特异性扩增，如果复检后曲线仍与之前一致...
叔初美常： 这是选修3专题的知识,不要求掌握,因为我也高2.但是可以了解哈,大概是这样的, 从转基因植物体细胞中,取出样本核酸. 在pcr中用来鉴定的核酸用荧光蛋白,或者同位素标记.然后将样本放入pcr中,进行扩增.注意哦,pcr里面的标记好的核酸,都有唯一对应的碱基对,这碱基对,是我们理论上的,所以肯定知道的.如果转基因成功了,那么pcr扩增就会进行的很顺利,且产物越来越多,荧光素浓度越来越大,这样避免了假阳性,很准的.如果失败了,荧光素浓度基本不变.肯定没戏啦.不懂问我,我高2.就了解这些吧,考点不在这哦!
长宁区15398522856： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
叔初美常： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
长宁区15398522856： 如何判定荧光定量结果的真实性 - ？
叔初美常： 如何判定荧光定量结果的真实性 荧光定量PCR(Real-time PCR)是目前基因表达定量分析的重要检测手段,已经为越来越多的研究者所采用.“好的开始是成功的一半”,Perrez-Novo等(Perrez- Novoet al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续...
长宁区15398522856： miRNA荧光定量PCR结果怎么看 - ？
叔初美常： 荧光定量我用罗氏的反应速度算是相当快的,在样本处理(提出核酸)后,放在荧光定量PCR仪器上一般需要30分钟~1小时左右.但是如果你的样本比如支原体的含量非常高,可能在没有运行结束已经可以看出结果了,但是如果说5分钟就出结果了,确实太快了点.如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值. 其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对. 具体情况具体分析.
长宁区15398522856： 怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确 - ？
叔初美常：[答案] 看标准曲线是否反映出了标准物质的真实浓度
长宁区15398522856： 实时荧光定量PCR,溶解曲线怎么判断是否为目的产物 - ？
叔初美常： 根据曲线初步判断,整个实验设计还可以!你做相对定量吗,将样品结果与对照看看基因表达量分析就可以了! 如果绝对定量,需要进一步实验吧!
长宁区15398522856： 荧光定量pcr仪是怎样测试dna,rna的 - ？
叔初美常： 荧光定量pcr仪是怎样测试dna,rna的 普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段.但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多.不过不能直接得到扩增结果,还需要做电泳检测.实际中检测遗传疾病,品种分子标记筛选...
长宁区15398522856： 如何分析荧光定量pcr实验结果? - ？
叔初美常： 如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值.其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对.具体情况具体分析.
长宁区15398522856： 实时定量PCR的结果是怎样分析的?？
叔初美常： PCR是聚合酶链式反应,通过反复的变性退火延伸,达到将微量DNA扩增检测的目的.目前实验室里多采用的是实时荧光定量检测,一起可以读取每次循环的荧光强度,并记录达到设定的阈值的循环次数.原始标本含有的DNA量愈多,达到阈值循环数愈小.通过已知浓度的标准品为对照,定量分析样本所含的目的DNA量.
长宁区15398522856： 怎么看荧光定量PCR的试剂盒好不好 - ？
叔初美常： 如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做.4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦.5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多.
