mtt法测脾淋巴细胞增殖实验中的培养基需要加双抗吗
不知楼主的问题解决了没有，我最近做脾细胞增殖实验，用2*10^6铺板，72小时培养，MTT作用4小时后加DMSO几乎没有颜色显示，看到楼主的帖子，才想到也有可能是细胞死亡的原因。不知楼主后来是怎么解决的，求教~
（1） 细胞数量减少，在文献和我们自己的实验中，常采用每孔细胞为1×105个。
（2） 我曾采用Sigma公司的产品，终浓度5ug/ml。
（3） 采用BALB/C鼠，因为BALB/C比较纯，得到的结果一致性也好。
（4） 接种细胞之前进行台盼兰染色计算活细胞数，从而心中有底。
（5） 不需要正交实验考查几个影响因素的最佳组合，因为MTT测定淋巴细胞增殖已是先人多次摸索实验得出的实验条件。
（6） yunnandali战友没有给出测定波长，一般实验中采用570nm作为测定波长，630nm作为参比波长。
（7） 还有你的药物本身是什么类型的，估计它本身与刀豆蛋白发生反应的可能性不是很大。
（8） 实验中，我建议能对细胞体系进行离心的话，还是尽量离心，因为淋巴细胞是悬浮的。我们的实验中，在加入MTT之前，首先离心一下，吸出一些上清（保持培养体系始终是相同体积），继续孵育4h后，再离心（甲簪完全沉到底部），然后轻轻将上清弃去（倒转96孔板，轻拍。不过我怕将甲簪拍出来，一般还是使用移液枪将上清全部吸出）。
（9） 我还是不能明白你的发帖题目的意思——“药物刺激小鼠脾淋巴细胞增值”（非增值，是增殖），我们的免疫药理学实验中一般是考虑药物对丝裂原刺激的淋巴细胞增殖的影响，如果你想考察药物本身对淋巴细胞增殖的刺激能力，应该使用ConA作阳性对照才是，但是你的实验不是这样。估计你还是想观察药物对ConA作用下淋巴细胞增殖能力的影响作用。
（10） 将你的实验再重复几次，看看结果是不是一直都是这样。
淋巴细胞都包括哪些细胞?
它们无须抗原刺激即可不断增殖淋巴细胞，成熟后将其转送至周围淋巴器官。后者包括脾、淋巴结等。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。T淋巴细胞（又名T细胞）和B淋巴细胞（又名B细胞）都起源于造血干细胞。T细胞随血循环到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，B细胞则到脾脏或腔上囊...
脾的功能
脾有丰富的血窦，可储存一定量（约200毫升）的血液，在机体剧烈运动或爬山或突然失血时，脾的平滑肌收缩，放出血液以补充机体的需要。脾中的淋巴细胞还能制造抗体。参考资料：<a href="http:\/\/baike.baidu.com\/view\/21944.html?wtp=tt" target="_blank" rel="nofollow noopener">http:\/\/baike...
血液全项检查,各项目都是什么意思
项目名称结果单位参考范围备注1、白细胞计数(WBC)2、中性粒细胞比例(N)3、淋巴细胞比例(L)4、红细胞(RBC)5、血红蛋白(HGB)6、红细胞压积(HCT)7、红细胞平均体积(MCV)8、红细胞平均... 项目名称 结果 单位 参考范围 备注 1、白细胞计数(WBC) 2、中性粒细胞比例(N) 3、淋巴细胞比例(L) 4、红细胞(RBC...
什么是麻风病?
（一）、临床表现 麻风病按五级分类法分为：结核样型麻风（TT）、界线类偏结核样型麻风（BT）、中间界线类麻风（BB）、界线类偏瘤型麻风（BL）、瘤型麻风（LL）。各类麻风病的早期阶段为未定类麻风（I）。1、结核样型麻风（TT）临床上本型较多见，损害常局限于外周神经和皮肤。皮损为红色斑疹、红...
巨细胞病毒(CMV-IgGII) 结果是142 IU\/ml 参考值<12
巨细胞病毒感染脾功能受影响,脾淋巴细胞增殖活性降低ConA刺激脾细胞产生IL-2显着减少。 <br免疫细胞巨细胞病毒感染引起的免疫抑制细胞内病毒的复制有关。 CMV复制,其特征在于,所述单核吞噬细胞与巨细胞病毒感染的细胞,最容易具有重要的调节功能和单核吞噬细胞,T细胞,B细胞和一些尚未确定的单核细胞中的淋巴细胞在...
免疫细胞表面分子有哪些及怎样发挥作用
许多疾病能引起单核吞噬细胞系统大量增生,表现为肝、脾淋巴结肿大。功能为吞噬清除体内病菌异物及衰老伤亡细胞;活化T.B.淋巴细胞免疫反应。在细菌或其他因子刺激下能分泌酸性水解酶、中性蛋白酶、溶菌酶和其他内源性热原等。 参考资料: http:\/\/baike.baidu.com\/view\/117022.html?wtp=tt 已赞过 已踩过< 你...
请问免疫防御机能包括哪些?
第二道防线是体液中的杀菌物质和吞噬细胞 这两道防线是人类在进化过程中逐渐建立起来的天然防御功能，特点是人人生来就有，不针对某一种特定的病原体，对多种病原体都有防御作用，因此叫做非特异性免疫（又称先天性免疫）第三道防线主要由免疫器官（胸腺、淋巴结和脾脏等）和免疫细胞（淋巴细胞）组成...
请专业人士帮忙看看全血细胞分析报告单
嗜酸性粒细胞 E 0.005-0.05(0.5％-5％)嗜碱性粒细胞 B 0～0.01(0～1%)淋巴细胞 L 0.20-0.40(20％-40％)单核细胞 M 0.03-0.08(3％-8％)[临床意义]中性杆状核粒细胞增高见于急性化脓性感染、 大出血、严重组织损伤、慢性粒细胞膜性白血病及安眠药中毒等。中性分叶核粒细胞减少多...
巨细胞病毒抗体(CMV-IgG)和巨细胞病毒抗体IgM(CMV-IgM)的检测结果,望...
CMV感染具有显着影响的胸腺和脾细胞,单核吞噬细胞,NK细胞和CTL细胞的功能。 实验室的胸腺,脾脏急性CMV感染的新生豚鼠,抑制,胸腺,T细胞的数量减少成年小鼠巨细胞病毒感染,88%的胸腺巨细胞病毒的检测。 巨细胞病毒感染脾功能受影响,脾淋巴细胞增殖活性降低ConA刺激脾细胞产生IL-2显着减少。 <br免疫细胞巨细胞病毒...
问几个英文缩写……
病理性白细胞减少再生障碍性贫血、某些传染病、肝硬化、脾功能亢进、放疗化疗等。 4、白细胞分类计数(DC) [正常参考值] 中性秆状核粒细胞:0.01-0.05(1%-5%)。 中性分叶核粒细胞:0.50-0.70(50%-70%)。 嗜酸性粒细胞:0.005-0.05(0.5%-5%)。 淋巴细胞:0.20-0.40(20%-40%)。 单核细胞:0.03-...
邗叙通滞： 可以不加,有时候加了会有拮抗作用.1)24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验.细胞孵育过夜;(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);(3)细胞孵育...
阿鲁科尔沁旗13076992480： 什么是“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”?？
邗叙通滞： MTT法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法.MTT是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色.小鼠脾细胞受到ConA作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸—异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD值,测定波长570nm.根据OD值的大小计算反应体系中细胞增殖程度.
阿鲁科尔沁旗13076992480： 做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少? - ？
邗叙通滞： 博凌科为解答:我觉得细胞的浓度并不需要那么精确,关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平.比如我做MTT,起初用的细胞浓度为5000/ml,每孔100ul,培养3天观察,发现细胞数太少,各孔OD值反面难于比较.后来我换用 10000/ml...
阿鲁科尔沁旗13076992480： T淋巴细胞增殖功能的测定 - ？
邗叙通滞： 1.MTS 2.XTT比色法 3.3H-TdR掺入法 4.MTT法MTS检测法1.培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞(检测IL-2),或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞(检测IL-3)到对数生长期.2.取96孔细胞培养板,每孔加0.1ml含1*104~2*...
阿鲁科尔沁旗13076992480： 加mtt前要将96孔板中的完全培养液换成不完全培养液吗 - ？
邗叙通滞： 测一周不换液细胞还能活吗?——MTT加进去之后只要4小时孵育时间就可加DMSO,之前的时间是刺激时间,应按实验要求自己掌握换液频率. 加DMSO之前的弃液:孔板离心机上先离心,然后快速扣板于滤纸上(贴壁细胞或者孔数多时)或者逐孔吸出(孔数少时.
阿鲁科尔沁旗13076992480： 请问大神MTT测细胞增殖实验时,如果测一周时间,中间需要换液吗?具体怎么操作?加DMSO时,培养液是怎么移出来?用枪头洗出来?还是倒出来?还是... - ？
邗叙通滞：[答案] 测一周不换液细胞还能活吗?——MTT加进去之后只要4小时孵育时间就可加DMSO,之前的时间是刺激时间,应按实验要求自己掌握换液频率.加DMSO之前的弃液:孔板离心机上先离心,然后快速扣板于滤纸上(贴壁细胞或者孔数多时...
阿鲁科尔沁旗13076992480： 请教MTT法做淋巴细胞转化试验的问题 - ？
邗叙通滞： 博凌科为生物科技-为你解答:只要分离到了淋巴细胞心脏血和静脉血基本上都没问题,但是采集淋巴细胞时会有困难,还有,在分离时会有一点影响,具体的差异没有统计比较.淋巴细胞 用多克隆刺激剂在44个小时或是68个小时加MTT都可以,用特异性的刺激物时间要长一些.时间太短增值不够,检不出结果,时间太长,很多细胞会发生调亡,也会影响结果.你要摸索一下,找最大的结果.淋巴细胞有成团,那是增值的小团块,没有问题.在加样品时就要设培养基对照(只有培养基,没细胞),阴性对照(只有细胞,不加刺激物).后面的跟实验组一样处理.
阿鲁科尔沁旗13076992480： Cyps是什么意思 - ？
邗叙通滞： Cyp[sip] abbr. 塞浦路斯人(Cypriot) 网络释义专业释义 山药多糖...毒感染细胞才能的影响为了评估4种多糖的抗病毒作用跟机理,将黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARPS)跟山药多糖(CYPS)与新城疫病毒以3种次序...
阿鲁科尔沁旗13076992480： MTT分析细胞增殖实验的原理是什么?怎么来做? - ？
邗叙通滞： 原理: 为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臢,用酶标仪测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强.怎么做的话可以问问中洪博元的技术人员,比较专业
阿鲁科尔沁旗13076992480： 怎么对药物与细胞作用实验中mtt结果进行统计学分析 - ？
邗叙通滞： ⒈选择适当的细胞接种浓度.一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞.但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确...
