将金黄色葡萄球菌以1%接种量接种于两管培养基中培养10h后加入青霉素和溶菌酶,继续培养的生长曲线?

作者&投稿:伏胃 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白.分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量金黄色葡萄球~

(1)抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨含有蛋白质等有机物,因此主要为细菌生长提供氮源和碳源.对培养基要先调节pH,后进行灭菌处理.因此蛋白质易受高温影响,失去活性,所以抗菌蛋白需要在灭菌之后加入.(2)对新配制的培养基灭菌时所用的设备是高压蒸汽灭菌锅.实验前需对超净工作台进行消毒处理.(3)根据实验目的,该实验接种金黄色葡萄球菌的方法是应为稀释涂布平析法,从而可以观察菌落生长情况.(4)实验中的自变量抗菌蛋白的有无,因变量是菌落数量.(5)即抗菌蛋白具有极强的抗菌能力,无需灭菌处理或需要无菌操作,防止其他杂菌产生的物质抑制金黄色葡萄球菌的繁殖,而影响了实验的结果.故答案为:(1)碳源和氮源(1分) 先调pH,后灭菌 后(2)高压蒸汽灭菌锅 消毒(3)稀释涂布平板法(4)抗菌蛋白、菌落数量(5)需要无菌操作,因为有些杂菌可能会产生抗生素,抑制金黄色葡萄球菌的繁殖,影响实验结果

在形态及表征上直接鉴定:该菌是革兰氏阳性球菌,细胞排列呈葡萄状,无芽孢,无荚膜。
进一步:
首先把挑取菌落于甘露醇生化管,37度,过夜,观察结果,变色为阳性,进一步做凝固酶试验,可以分为两种方法,一个是玻璃片法,一个是试管法该菌是兼性厌氧.鉴定很简单,随便一本微生物检验的书都有.

下面是参考。

金黄色葡萄球菌在形态及表征上直接鉴定就可以了,有一些材料,希望对楼主有帮助,
首先,该菌是革兰氏阳性球菌,细胞排列呈葡萄状,无芽孢,无荚膜。
其次,在肉汤培养基中金黄色葡萄球菌呈混浊生长,在胰酪胨大豆肉汤培养基中有时液体澄清,当菌量多时则呈混浊生长。在血平板菌落上生长时呈金黄色,也有时呈白色,菌落大而突起、圆形、不透明、表面光滑,周围有溶血圈。
再次,该菌在Baird-Parker平板上生长时菌落为圆形、光滑凸起、湿润、直径2-3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明圈。
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些,外观可能粗糙并干燥。(这一点希望能对楼主的鉴定工作有帮助)

Baird-Parker氏培养基.doc (24.0k)

还有一些生理生化的指标,比如血浆凝固酶试验。
挑取菌落接种于肉浸液肉汤,在37度温箱培养24小时后进行血浆凝固酶试验。 该实验的大致步骤是:吸取新鲜兔血浆(1:4),放入小试管中,再加入培养24小时的金黄色葡萄球菌菌液,振荡摇匀,放在36度水浴内,每半小时观察一次,观察6小时,如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块者)被认为是阳性结果,结合上面的形态等特征,即可以初步断定你的菌是不是金黄色葡萄球菌。
更为详细的实验步骤请楼主查阅有关书籍,比如实验时样品和试剂的加量等细节。

如果你做的是微生物限度方面的,参考《中华人民共和国药典》2005年版二部附录XI J。
金黄色葡萄球菌:取供试液10ml(相当于供试品1g、1ml、10cm2),直接或处理后接种至适量(不少于100ml)的亚碲酸钠(钾)肉汤(或营养肉汤)培养基中,培养18—24小时,必要时可延长至48小时。取上述培养物,划线接种于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上,培养24—72小时。若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表5所列特征,判供试品未检出金黄色葡萄球菌。
若平板上生长的菌落与表5所列的菌落特征相符或疑似,应挑选2—3个菌落,分别接种于营养琼脂培养基斜面上,培养18—24小时。取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色,并
接种于营养肉汤培养基中,培养18—24小时,作血浆凝固酶试验。
表5 金黄色葡萄球菌
培养基 菌落形态
甘露醇氯化钠琼脂 金黄色,圆形凸起,边缘整齐,外围有黄色环,菌落直径0.7—1mm
卵黄氯化钠琼脂 金黄色,圆形凸起,边缘整齐,外围有卵磷脂分解的乳浊圈,菌落直径1—2mm
血浆凝固酶试验:取灭菌小试管3支,各加入血浆和无菌水混合液(1:1)0.5ml,再分别加入可疑菌株的营养肉汤培养物(或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液)0.5ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤培养物(或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液)0.5ml,即为试验管、阳性对照管和阴性对照管。将3管同时培养,3小时后开始观察直至24小时。阴性对照管的血浆应流动自如,阳性对照管血浆应凝固,若试验管血浆凝固者为血浆凝固酶试验阳性,否则为阴性。如阳性对照管或阴性对照管不符合规定时,应加制备血浆,重新试验。
若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性,判供试品未检出金黄色葡萄球菌。

我也正在做金黄色葡萄球菌的鉴定,因为我的样品比较多,所以我只检测两项指标.
首先把挑取菌落于甘露醇生化管,37度,过夜,观察结果,变色为阳性,进一步做凝固酶试验,可以分为两种方法,一个是玻璃片法,一个是试管法,楼上几位都有说过具体的方法了,我就不在罗嗦了,希望对你有帮助.

非常谢谢上面的大侠指点,获益匪浅啊!
另外,我想问问如果金葡菌在BHI琼脂平板上并以专性厌氧的环境下生长,能生长吗?其表明形态特征是否有所不同?
谢谢!!!

典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。甲基红反应阳性,P反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。
染色观察:从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜,直径0.5-1μm。

血浆凝固酶试验:吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。同时做阴阳性对照。

耐热核酸酶试验:将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
希望这些对你有一些帮助。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌代表,为一种常见的食源性致病微生物。该菌最适宜生长温度为37℃,pH为7.4,耐高盐,可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中,空气、污水等环境中也无处不在


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