大肠杆菌与大肠菌群检测方法

大肠菌群检测方法~

GB 4789.3-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》中的规定操作步骤：
1、乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
3、证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
SN0169-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》规定操作：
1、推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。

扩展资料：大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。

参考资料来源：百度百科-大肠菌群

大肠杆菌检测方法分为三种：
1、细菌分离鉴定法
分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液先经肉汤增菌，然后转种血琼脂平板。其他标本同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。
37℃孵育18～24小时后，观察菌落涂片染色镜检。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要的时候检定肠霉毒素。
2、卫生细菌学检查法
大肠杆菌会不断随粪便排出体外，污染周围环境水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，则表示样品被粪便污染的越严重，表明样品中存在肠道致病菌的可能性也就越大。
大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群，瓶装汽水和果汁中每100ml大肠菌群不能超过5个。
3、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测法
全自动微生物定量分析（TEMPO）仪大肠杆菌群计数检测有TEMPOTC和TEMPOCC两种方法。
TEMPOTC的开发是为获得NF ISO4832标准相当性能水平。
TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群方法。

扩展资料：

大肠杆菌在生物技术中的应用
这些菌株由于失去了细胞壁等重要组分，所以在自然条件下已无法生长。甚至普通的清洁剂都可以轻易地杀灭这类菌株。即便由于操作不慎导致活菌从实验室流出，也不易导致生化危机。
生物工程用的菌株基因组都被优化过，使之带有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用于分子克隆实验。
真核基因在大肠杆菌中表达，必须有合适的表达载体(Vector),常用载体：pBV220,pET系统。
目的基因在大肠杆菌中表达的情况：
大肠杆菌更适合原核基因的表达，外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的，外源基因拷贝数和表达 产物产量之间存在动态平衡，单个细胞的产量又与外源基因拷贝数，基因表达效率，表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。
参考资料：百度百科-大肠杆菌

GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中的规定操作步骤：

1、乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

2、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。

3、证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》规定操作：

1、推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

2、证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。

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扩展资料：

大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。

粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。

参考资料来源：/baike.baidu.com/item/%E5%A4%A7%E8%82%A0%E8%8F%8C%E7%BE%A4/7324866?fr=aladdin#4"target="_blank"title="只支持选中一个链接时生效">百度百科-大肠菌群

进入无菌室步骤
1． 进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。
2． 关灯后0•5小时后放可进入。
3． 进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套
实验步骤
1， 进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）
2， 准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3， 直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）
4， 再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）
5， 再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
6， 再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液
7， 更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）
8， 再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
9， 再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。）
10， 把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）
11， 梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成
－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成
－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样
12， 如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）
13， 取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中 ，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14， 再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准）
15， 只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。
16， 清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。

检测方法都是基于发酵乳糖。最可能数值法(MPN)是一种统计学方法,包括近似确证和完全验证。在检测过程中,样品要进行系列稀释。实验操作要记录发酵乳糖产气的阳性管数,然后进行另外两步实验,利用阳性结果查统计表(见附录2),估计细菌的数量,仅前两步用于检测大肠菌群和粪大肠菌群,所有三步用于检测大肠杆菌。3管
MPN法用于检测大部分食品,5管 MPN法用于检测水,贝类和贝类养殖水。10管
MPN法用于检测瓶装水或估计本样品为受到严重污染.
另外还有一种固体平板计数法,使用VRBA培养,其含有中性红作指示剂,当发酵乳糖时产生红色菌落。还有一种膜过滤法检测大肠菌群和粪大肠菌群,主要根据发酵乳糖产酸形成不同的菌落颜色。本章节也介绍荧光法检测大肠杆菌；检测贝类的特殊方法；一种简单的瓶装水检测方法；和一种与HACCP法规中相关的检测柑桔类水果汁中大肠杆菌的方法.
大肠杆菌和大肠菌群计数方法详细方法请见：http://www.hopebiol.com/standard/bzfdadcgj.html

我知道的只有尹红美兰检验法
这有一个比较专业的解释，你可以去看一下
以上

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繁昌县18658401248： 如何检测大肠杆菌 - ？
夷爬排毒：[答案] 大肠菌群测定的操作细则(***研究所测试中心) 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌.该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能. ...

繁昌县18658401248： 大肠杆菌群计数检测方法有哪些? ？
夷爬排毒： 全自动微生物定量分析(TEMPO)仪的大肠杆菌群计数检测有TC和CC两种方法.TEMPO TC的开发是为了获得NF ISO4832标准相当性能水平.TEMPO CC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群的方法.该法是为了获得和AOAC官方方法966.24及美国公共健康联合会检测乳制品检测方发(SMEDP)一致的效果.TEMPO系统根据阳性空的大小和数目来推算出原始样本中大肠杆菌群数目.

繁昌县18658401248： 大肠菌群怎么测 - ？
夷爬排毒： 这是为了保证在接种完水样之后,其浓度接近于单料的浓度.而单料的浓度是最适宜大肠菌群生长的. 例如:100ml水样 50ml三倍浓缩料,最后体积是150ml,三料被稀释了3倍,最后的浓度恰好是单倍料. 10ml可以加5ml单料也可以加10ml双料 1ml对浓度影响不打,就直接加单倍料里了.

繁昌县18658401248： 菌落记数 分析 - ？
夷爬排毒：[答案] 一、菌落总数的测定菌落总数:食品和药品经过处理,所得 1mL(或 1g)检样在一定条件下培养,检测到的细菌菌落的总数.菌落总数可以用为判断食品及药品被污染程度的标志,同时为被检样品提供卫生学标准.细菌菌落一般都采用平板记数法来测...

繁昌县18658401248： 大肠菌群平板计数法怎么做 - ？
夷爬排毒： 1、制备样品稀释液,吸取1mL加入到平板中,倾注55度左右的已灭菌的VRBA琼脂15-20mL,凝固后36度24小时培养,计数紫红色菌落 2、再将合适稀释度的VRBA平板上的紫红色菌落转接10支BGLB,统计阳性率 3、再将计数的VRBA结果X阳...

繁昌县18658401248： 大肠菌群怎么判定? - ？
夷爬排毒： 大肠菌群检验方法: 由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,即:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌.因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行. 目前国内采用的进出口食品...

繁昌县18658401248： 为什么选择大肠杆菌作为检测水的指标 - ？
夷爬排毒：[答案] 大肠杆菌的检测指标和方法 大肠杆菌的检测原理: 大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,该菌主要来源于人畜粪便,因此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可...

繁昌县18658401248： 大肠杆菌和霉菌的检测方法 - ？
夷爬排毒： 请参照; GB4789-2003《食品微生物检验方法》中大肠菌群和霉菌检验.

繁昌县18658401248： 怎么检验饮料中的大肠杆菌?? - ？
夷爬排毒： 样品制备:以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1~2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替).稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成...

繁昌县18658401248： 如何检验生活用品上的大肠杆菌? - ？
夷爬排毒： 操作步骤 3.1 检样稀释 3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液.固体检样最好用均质器,以8 000-...