如何把细胞铺的更均匀

如何把六孔板细胞铺的均匀~

6孔板，采用将第一个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔一次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多，而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好，所以我放弃改用浸润孔底的方法。

2、细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。

3、如果实验室有平板振荡器的话，我建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。

4、细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有转移到六孔板后，是要晃得！晃的时候最好不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀！

1、一般96孔板,每孔是加100微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入，加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下再，继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。

6孔板12孔板或24孔板，均采用将第一个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔一次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多，而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好，所以我放弃改用浸润孔底的方法。

2、细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。

3、如果实验室有平板振荡器的话，我建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。

4、细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有转移到六孔板后，是要晃得！晃的时候最好不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀！

5、一瓶细胞长满后，正常处理，在培养瓶里吹匀，然后铺6孔板，每孔2毫升，铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭，然后放到培养箱里，轻微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。

6、计算好所需要的全部液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横8字型晃，显微镜下观察，如果不均匀，按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子，瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。

7、放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向5到6次，但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中，不要再做过多的运动，例如放到镜下去看，否则很容易就又聚到中间去了。

做细胞生物学实验，细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀： 要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。现分享我的实验技巧。

一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入。加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下，再继续加剩余的半边板子。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘。

注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约 5 分钟，放入 37 度培养箱。

6 孔板、12 孔板或 24 孔 板，我均采用将第一个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底。然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底。其它孔一次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底。

加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多，而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有 96 孔板好掌握，效果没有 96 孔板好，所以我放弃改用浸润孔底的方法。

细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。

如果实验室有平板振荡器的话，我建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。

细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有转移到六孔板后，是要晃得。晃的时候最好不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀。

一瓶细胞长满后，正常处理，在培养瓶里吹匀。然后铺 6 孔板，每孔 2 毫升，铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭。然后放到培养箱里，轻微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。基本上 24 小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。

计算好所需要的全部液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横 8 字型晃。显微镜下观察，如果不均匀，按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子，瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。

放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向5到6次，但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中，不要再做过多的运动，例如放到镜下去看，否则很容易就又聚到中间去了。

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丹巴县13612964462： 如何把细胞铺的更均匀 - ？
枞容帕歌： 做细胞生物学实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验了.但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶.现分享我的实验技巧.一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入...

丹巴县13612964462： 如何把六孔板细胞铺的均匀 - ？
枞容帕歌： 6孔板,采用将第一个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,...

丹巴县13612964462： 细胞铺板有什么技巧吗?力求均匀 - ？
枞容帕歌： 细胞铺板重在均匀.细胞铺板时,要每孔分布的细胞数量一致,就是从瓶中吸取细胞悬液的时候,每次吸取都要混匀后吸取,尽量做到平均分配.其次,铺板后用手拍打板壁,动作轻柔些.

丹巴县13612964462： 怎样使细胞长得均匀我们在T - 225cm2 flask中培养细胞时,总是在远离瓶口的底端细胞长得密一些,调整了孵箱、放细胞前均匀摇晃、调整不同方位放置,都... - ？
枞容帕歌：[答案] 如果是底面积较大的孔或培养皿,建议在接种完细胞之后,直接用吸管进行每个孔多个点吸——吹的办法,让其均匀后,小心轻放置培养箱静置一段时间. 如果想要种的更为均匀,最好的办法还是,先将细胞悬液配至自己需要的浓度后直接种入,小...

丹巴县13612964462： 细胞实验中,怎么才能更好的混匀细胞? - ？
枞容帕歌： 一般用移液枪进行适当吹打,注意手法要轻,避免造成细胞损伤以及挂壁残留等等,还要注意预防污染,更好的选择是用iVLK离心混匀仪.

丹巴县13612964462： 为什么我的细胞总是铺不匀呢?？
枞容帕歌： 如果您从96孔传到24孔板上现在96孔板上把细胞吹开,用枪移至到24孔中帖着孔周围来回吹打然后再靠近孔中央来回吹几次这样细胞不会只长在中间拉.

丹巴县13612964462： 怎样可以让细胞更好的贴壁 - ？
枞容帕歌： 大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h,细胞不贴壁有好多种原因的:1、如果你用玻璃培养瓶培养的话,有可能你的瓶子没处理好;建议你用一次性培养瓶,进口的都可以.2、一般做原代细胞贴壁...

丹巴县13612964462： 细胞铺在96孔板或者6孔板的细胞不能生长是什么原因 - ？
枞容帕歌： 6孔板相对还是挺容易把细胞铺匀的,弄不好的话细胞主要在边上. 所以,你加2ml混匀的细胞悬液,加在中间位置,让他自动往两边扩散,当然新板子有时候它扩散不了.你就稍微动一下就行.铺完板子后,要趁细胞没有沉底的时候,马上把板子拿起来然后慢慢倾斜,对称着倾斜,也就是你把一侧抬高,让培养液到板子另一侧,然后再反过来,最好四个方向都做一下,反复几次,然后看一下细胞如果比较均匀悬浮没有聚一堆,就把板子放平在培养箱中,基本就比较均匀了.

丹巴县13612964462： 96孔板如何让其细胞均匀 - ？
枞容帕歌： 博凌科为解答:我做96孔板时,把细胞消化下来后,加好培养基,先接种一个孔,看细胞浓度是否合适,合适的话,在接下面的孔.不过要注意,每接几个孔,就将培养瓶适当的晃晃,以求尽量使细胞均匀分布,在取.不要从头接到尾,手里培养瓶一动不动,细胞会下沉的.希望这些对你有所帮助

丹巴县13612964462： 细胞传代在培养瓶分布不均匀有什么好方法解决 - ？
枞容帕歌： 细胞传代在培养瓶分布不均匀有什么好方法解决 1.观察培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代.观察时拧紧盖子. 2.加热PBS、versene、培养基,(提前做好) 瓶子不要倒着放,不要让液体接触到瓶塞. 3.打开超净台...