一抗二抗免疫组化中，一抗、二抗的制备方法
免疫组化实验中，一抗和二抗的制备方法是ELISA技术的基础。ELISA是结合免疫学反应和酶的高效催化，通过固相载体（如聚苯乙烯板）进行，以确保结果的特异性和稳定性。常用的方法包括检测抗体的间接法和检测抗原的双抗体夹心法。
检测未知抗原的双抗体夹心法步骤如下：
- 包被：将抗体稀释在碳酸盐缓冲液（1～10μg/ml）中，每孔0.1ml，4℃过夜，次日洗涤。
- 加样：待测样本加入反应孔，37℃孵育1小时，洗涤后加酶标抗体。
- 酶标抗体孵育后，加TMB底物显色，再用硫酸终止反应，结果根据颜色深浅判断。
检测未知抗体的间接法则是类似，只是顺序不同，先包被已知抗原，再加待测抗体和酶标二抗。
实验中所需的试剂包括各种缓冲液、稀释液、终止液、底物液以及抗原、抗体和酶标记抗体。实验器材包括酶标板、检测仪器、加样器等。
注意事项包括控制实验条件，使用阳性对照和阴性对照，选择合适的固相载体、抗体浓度和酶标记抗体浓度，以及谨慎选择和使用酶的底物。
免疫组化实验中如果二抗是山羊来源的,需要使用聚合物辅助剂,但是我不明...
聚合物辅助剂估计是某个厂家自己取的名字，就我的猜测，应该是一个放大系统，一个二抗（比如羊抗小鼠或者兔IgG），上面带一个长链的聚合物，聚合物上再连有很多的酶（HRP），这样就达到一个广大的效果，想对于ABC的方法，这个步骤少一步。一个二抗上配有不只一个酶，而是几个到十几个或者更多。如...
如何选择二抗
哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用Biotin\/...
为什么一抗可以回收二抗不能
二抗可以回收。一抗回收原因；免疫组化操作中多余一抗的回收利用，能迅速通过高热效应和高分子运动破坏甲醛固定之后产生的交联，暴露抗原决定簇。二抗可以回收利用，但最好不要太多次，否则信号就没了，而且二抗也很便宜的，完全没有必要回收。一抗二抗是指非抗体性抗原和能和抗体结合，即抗体的抗体。全称...
【求助】WESTERN 的抗体可以用于免疫组化吗
一般来说两种方法中一抗可以通用，但二抗就不可以，在用在WB的二抗一般是HRP标记的,而免疫组化用的最多的是BIOTIN标记的.还有要注意一抗的使用浓度的问题,免疫组化用的一抗浓度一般是wenstern用的浓度的5倍或以上。 具体的情况还是要看说明书的!songtao0463 wrote:谢谢，我今天看了说明书，好像不...
假如免疫组织学化学染色正常怎么办
免疫组化染色呈阴性结果的解决方案 1、首先，排除组织切片内的抗原有无丢失及其含量多少。免疫组化中两个zui重要的因素是抗原和抗体。（1）抗原有无丢失主要看组织切片的新鲜程度，一般切片室温保存超过3-6个月，可能切片内的抗原丢失很严重（有文献支持），此时可以通过重新用石蜡块切片来进一步验证（蜡...
免疫组化p16+, ki-67是什么意思?
2. 免疫酶细胞化学技术 是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。3. 免疫胶体金技术 就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能...
(大鼠实验)做免疫组化时,如何选择一抗和二抗,请举例说明!谢谢!_百度知...
一抗选A抗大鼠的，二抗选B抗A的，种属要选好
免疫印迹和免疫组化有什么区别
免疫印迹就是western ，免疫组化就是一抗二抗染片子。
免疫组化(IHC)实验从入门要高阶一篇搞定
深入探索免疫组化（IHC）：从入门到精通 免疫组化，作为分子生物学领域不可或缺的技术，通过免疫亲和标记揭示组织切片中大分子物质的定位和含量。它的核心原理包括酶标记、荧光和胶体金等，而有效应对常见问题，如无染色、高背景和非特异性染色，关键在于试剂匹配、孵育条件的精细控制以及预处理工艺的优化。
SP免疫组化中什么是一抗?谢谢!
~~~你确定一抗主要有三点：一是特异性识别你所要检测的蛋白质，二是经生产商测试适用于免疫组化实验 三是如果你已经买好了二抗，确实你的一抗能够被二抗所识别 顺便说下，做血细胞的话用免疫组化有些怪，难道你用的是淋巴组织切片么？如果是单个细胞的话用流式细胞仪看免疫荧光比较好。参考资料：...
潜盲利肝： 二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品.检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也...
九寨沟县19129687862： 免疫组化为什么要用一抗又要用二抗啊 - ？
潜盲利肝： 一抗特异性结合组织中你要检测的物质,而二抗则能和一抗结合,并带有放射性、生物素或者地高辛标记,使得你可以观察到.
九寨沟县19129687862： sp法中一抗、二抗指的是什么?？
潜盲利肝： 一抗、二抗 一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体.即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体. 第一抗体就是平常所说的抗体,即能和抗原特异性结合. 第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体.主要用于检测抗体的存在. e.g.利...
九寨沟县19129687862： 如何选择二抗 - ？
潜盲利肝： 首先确定你所选的检测蛋白的状态,比如有无标签,如6*HIS等.选择一抗就根据检测蛋白的状态来选,如果有蛋白带标签,就选针对标签的抗体. 如果没有标签,那么就要自己制备一抗. 二抗的选择则主要根据一抗的来源来选择,如果一抗是鼠源的,二抗一般就选用羊抗鼠的就可以了.
九寨沟县19129687862： western blot为什么要两次免疫反应 - ？
潜盲利肝： 第一次免疫反应是为了让一抗结合目的蛋白,也可以说是让一抗特异性的识别出目的蛋白.达到检测的目的 第二次免疫反应时为了让二抗结合一抗,二抗上面有辣根过氧化物标记,结合一抗后就可以用ECL试剂反应,达到显影的效果经过两次免疫反应后最终检测出目的蛋白
九寨沟县19129687862： 生物科研一抗及二抗都可以做些什么实验?具体点, - ？
潜盲利肝：[答案] 多了.用一抗标记目的蛋白,再用荧光或酶标的二抗标记一抗,通过检测二抗来检测、定量目的蛋白.符合这个原理的实验都可以. 比如:Elisa、流式、Elispot、western、免疫组化等
九寨沟县19129687862： (大鼠实验)做免疫组化时,如何选择一抗和二抗,请举例说明!谢谢! - ？
潜盲利肝： 一抗选A抗大鼠的,二抗选B抗A的,种属要选好
九寨沟县19129687862： blot 和 免疫组化 的一抗和二抗可以通用吗 - ？
潜盲利肝： 一抗不一定,取决于这个一抗是否在IHC和WB中都验证过,如果都做过就可以,如果没有,可能不太能用.二抗确认两个问题,二抗标记物是不是都一样(例如HRP),还有二抗浓度(例如是1mg/ml还是稀释好的),这两者确认以后,标记物相同,浓度也符合WB使用标准的话,就可以通用.
九寨沟县19129687862： 制备二抗的宿主,为什么应选择另外一种不同的动物 - ？
潜盲利肝： 二抗选择 (1)种属来源.主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可). (2)标记物的选择.有HRP、Biotin、荧光素等标记物.免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等.
九寨沟县19129687862： 求助:免疫组化两步法的介绍与详细步骤 - ？
潜盲利肝： 免疫组化实验程序目前比较常用的有两个:三步法和二步法.前者在较长时间内一直是免疫组化的标准程序,目前该法仍在使用.后者是近年来(1995年)推出的灵敏度比较高的方法,操作较三步法便捷,但价格也高于前者.其原理是将传统三步法中的二抗和附有酶的三抗由二步法中的二抗和酶的结合物所代替.即:抗原~一抗~二抗*酶复合物 其特点是灵敏度高、背景干净、简便快捷、可以省去三步法中血清封闭的步骤、具有更高的信号放大系统.至于详细步骤就要看你使用的试剂盒了.下面以多聚辣根过氧化物酶免疫组化检测试剂盒说明其特点和原理.
