正相键合相色谱与反相键合相色谱的区别
正相键合相色谱法
1. 氰基与氨基化学键合相
是正相键合色谱法较常用的固定相。流动相与以硅胶为固定相的吸附色谱法的流动相相似,也是烷烃(常用正已烷等)加适量极性调整剂而构成。氰基键合相的分离选择性与硅胶相似,但极性小于硅胶,即用相同的流动相及其它条件相同时,同一组分的保留时间将小于硅胶。许多需用硅胶柱分离的课题,可用氰基键合相柱完成。氨基键合相与硅胶的性质有较大差异,前者为碱性;后者为酸性。在作正相洗脱时,表现出不同的选择性。氨基键合相色谱柱是分析糖类最重要的色谱柱,也称为碳水化合物柱。
2. 分离机制
主要靠范德华作用力的定向作用力、诱导作用力或氢键作用力。例如,用氨基键合相分离极性化合物时,主要靠被分离组分的分子与键合相的氢键作用力的强弱差别而分离,如对糖类的分离等。若分离含有芳环等可诱导极化的非极性样品,则键合相与组分分子间的作用力,主要是诱导作用力。
3. 流动性的极性与容量因子的关系
在作正相洗脱时,流动相的极性增大,洗脱能力增加,K减小,t减小;反之k与t增大。分离结构相近的组分时,极性大的组分后出柱。
反相键合相色谱法
典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相,常用十八烷基(ODS或C)键合相;流动相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色谱系统,用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。
(1) 分离机制 反相键合相表面具有非极性烷基官能团,及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能,剩余硅醇基的多寡,视覆盖率而定。简要介绍疏溶剂理论。
疏溶剂理论:当一个非极性溶质或溶质分子中的非极性部分与极性溶剂相接触时,相互产生斥力,自由能(G)增加,熵减小,不稳定性增加。根据热力学第二定律,系统由不稳定到稳定是自发的,即熵增加是自发的。因此,为了弥补熵的损失,溶质分子中非极性部分结构的取向,将导致在极性溶剂中形成一个“容腔”,这种效应称为疏溶剂或疏水效应。该理论认为,在键合相反相色谱法中溶质的保留主要不是由于溶质分子与键合相间的色散力,而是溶质分子与极性溶剂分子间的排斥力,促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合,且缔合反应是可逆的。容量因子k与自由能变化△G的关系如下式:
lnk=lnV/V-△G/RT (8·5)
上式中的R为理想气体常数、T为热力学温度、V是色谱柱中键合相表面所键合的官能团的体积,V是色谱柱中流动相的体积。该式说明△G越大,被分离组分的k越小,保留时间越短。
(2)★★流动相的极性与容量因子的关系 流动相的极性增大,洗脱能力降低,溶质的k增大,t增大;反之,k与t减小。分离结构相近的组分时,极性大的组分先出柱。
(3) 特点 反相色谱法是应用最广的色谱法,主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物,因为键合相表面的官能团不流失,溶剂的极性可以在很大范围内调整,因此应用范围很宽。由它派生的反相离子对色谱法与离子抑制色谱法,可以分离有机酸、碱、盐等离子型化合物。用反相液相色谱法,可以解决80%左右的液相色谱课题。因此,必须给予反相色谱法足够的重视。对于结构异构体等难分离物质的分离,则应选用吸附色谱法。
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是正相键合色谱法较常用的固定相.流动相与以硅胶为固定相的吸附色谱法的流动相相似,也是烷烃(常用正已烷等)加适量极性调整剂而构成.氰基键合相的分离选择性与硅胶相似,但极性小于硅胶,即用相同的流动相及其它条件相同时,同一组分的保留时间将小于硅胶.许多需用硅胶柱分离的课题,可用氰基键合相柱完成.氨基键合相与硅胶的性质有较大差异,前者为碱性;后者为酸性.在作正相洗脱时,表现出不同的选择性.氨基键合相色谱柱是分析糖类最重要的色谱柱,也称为碳水化合物柱.
正相键合色谱法在正相色谱中,一般采用极性键合固定相,硅胶表面键合的是极性的有机基团,键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂,如烃类溶剂,或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等),以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配比K值,随其极性的增加而增大,但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时,极性键合相的极性越大,组分的保留值越大。
该法主要用于分离异构体,极性不同的化合物,特别是用来分离不同类型的化合物。
反相键合相色谱法
在反相色谱中,一般采用非极性键合固定相,如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等,用强极性的溶剂为流动相,如甲醇/水,乙腈/水,水和无机盐的缓冲液等。
目前,对于反相色谱的保留机制还没有一致的看法,大致有两种观点:一种认为属于分配色谱,另一种认为属于吸附色谱。
分配色谱的作用机制是假设混合溶剂(水+有机溶剂)中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面,组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。吸附色谱的作用机制是把非极性的烷基键合相,看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的“分子毛”,这种“分子毛”有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时,一方面,非极性组分分子或组分分子的非极性部分,由于疏溶剂的作用,将会从水中被“挤”出来,与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用。另一方面,被分离物的极性部分受到极性流动相的作用,使它离开固定相,减少保留值,此即解缔过程。显然,这两种作用力之差,决定了分子在色谱中的保留行为。.
一般地,固定相的烷基配合基或分离分子中非极性部分的表面积越大,或者流动相表面张力及介电常数越大,则缔合作用越强,分配比也越大,保留值越大。在反相键合相色谱中,极性大的组分先流出,极性小的组分后流出。
什么叫反相色谱?试比较正相色谱与反相色谱的区别。
【答案】:流动相的极性比固定相的极性强的色谱体系叫反相色谱。以十八烷基硅胶键合相(ODS)为固定相,以甲醇\/水为流动相,就是典型的反相色谱。正相色谱与反相色谱这两种操作模式的主要区别如下。(1) 固定相:正相色谱的固定相是极性的,反相色谱的固定相是非(弱)极性的。(2) 流动相:正相色谱的...
正相色谱法与反相色谱法比较
【答案】:(1)定义:正(反)相色谱法是流动相极性小(大)于固定相极性的液相色谱法。(2)固定相:正相色谱法使用极性固定相,如氰基、氨基键合相;反相色谱法使用非极性固定相,如C18、C8、苯基、二醇基键合相,或使用极性大的流动相,使用氰基、氨基键合相。(3)流动相:正相色谱法的流动相为烷基加...
反相键合相色谱是指
固定相的极性远小于流动相的极性。反相色谱法流动相极性大于固定相极性,适合分离非极性化合物,可以用于氨基酸、肽、蛋白质、生物碱、农药、脂质、类脂等物质的分离分析,反相键合相色谱是指固定相的极性远小于流动相的极性。
反相键合相色谱是指
主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物。在反相键合相色谱法中,固定相是由非极性的反相介质构成,极性有机溶剂的水溶液,而流动相则是极性有机溶剂,甲醇、乙腈等。反相键合相色谱的工作原理是利用非极性的反相介质为固定相,极性有机溶剂的水溶液为流动相,根据溶质极性的差别进行溶质分离与...
正相,反相色谱中固定相,流动相极性有何特点
同时,极性键合相的极性越大,组分的保留值越大。该法主要用于分离异构体,极性不同的化合物,特别是用来分离不同类型的化合物。反相键合相色谱法 在反相色谱中,一般采用非极性键合固定相,如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等,用强极性的溶剂为流动相,如甲醇\/水,乙腈\/水,水和无机盐的...
什么是正相色谱什么是反相色谱
正相色谱适用于极性物质的分离,如糖类、氨基酸等。2. 反相色谱:与正相色谱相反,反相色谱的固定相通常是非极性或弱极性的,例如C18、C8等烷基键合硅胶。流动相则选用极性较强的水溶液或含有一定比例有机溶剂的水溶液。在反相色谱中,极性较弱的组分更容易被非极性固定相吸附,而非极性较弱的组分则更...
什么是反相色谱柱
根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况,称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛,现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。
如何选择反相键合相色谱法的分离条件
针对特定的应用需求,可以考虑使用某些特定的检测方式、如荧光检测、紫外检测或质谱检测等,以满足不同样品对灵敏度和选择性、定量能力等方面的要求。最后,还要进行一定的质量控制和验证,以确保得到准确和可靠的分析结果。总之,选择反相键合相色谱法的分离条件需要考虑多种因素,包括样品性质、溶剂体系、柱...
在HPLC中正相键合色谱法用于何种物质分离?反相呢?
正相主要用来分离一些极性小的物质,如:菊酯类。反相用来分离极性大的物质,这就很多了~~
正相键合色谱法和反相色谱法哪个应用更广泛
反相色谱的应用更为广泛,建议你上“色谱世界”网站问问看吧。非常专业的一个色谱网站,会对你有很大帮助的。
滕任津彤:[答案] 正相键合相色谱法1.氰基与氨基化学键合相是正相键合色谱法较常用的固定相.流动相与以硅胶为固定相的吸附色谱法的流动相相似,也是烷烃(常用正已烷等)加适量极性调整剂而构成.氰基键合相的分离选择性与...
遂宁市13167926132: 正相键合色谱和反相键合色谱区别 - ?
滕任津彤: 正相键合相色谱法1. 氰基与氨基化学键合相是正相键合色谱法较常用的固定相.流动相与以硅胶为固定相的吸附色谱法的流动相相似,也是烷烃(常用正已烷等)加适量极性调整剂而构成.氰基键合相的分离选择性与硅胶相似,但极性小于硅...
遂宁市13167926132: 什么是正相键合相色谱法?什么是反相键合相色谱法 - ?
滕任津彤: 正相和反相是流动相与柱填料极性有关!一般认为流动相极性大于固定相极性认为是反相色谱,反之为正相色谱!
遂宁市13167926132: 何为正相色谱及反相色谱?在应用上有何特点? - ?
滕任津彤: 正相色谱基本上可以看作液固吸附色谱.其柱填料为吸附剂,表面有活性吸附点.溶剂和溶质分子可以吸附在活性中心.反相色谱是流动相极性大于固定相极性的色谱. 反相色谱的应用特点:反相介质性能稳定.分离效率高,它能分离蛋白质、...
遂宁市13167926132: 在液一液分配色谱中,为什么可分为正相色谱及反相色谱 - ?
滕任津彤: 在正相色谱中,一般采用极性键合固定相,硅胶表面键合的是极性的有机基团,键合相的名称由键合上去的基团而定.最常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相.流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶...
遂宁市13167926132: 什么是正相色谱,什么是反相色谱 - ?
滕任津彤: 什么是正相色谱,什么是反相色谱? 液相色谱有正相和反相之分.正相色谱和反相色谱还有吸附色谱和极性化学键键合色谱之分. 如果采用固定相的极性大于流动相的极性,就称为正相色谱; 如果固定相的极性小于流动相的极性,则称为反相色谱.
遂宁市13167926132: 反相高效液相色谱法与高效液相色谱法有什么不同? - ?
滕任津彤: 高效液相色谱法包括正相高效液相色谱法和反相高效液相色谱法.正相高效液相色谱法中流动相的极性小于固定相的极性,也就是以及性键合相为固定相(常以氨基、氰基键合相等作为固定相).反相高效液相色谱法中流动相的极性大于固定相的极性,也就是以非极性键合相为固定相(常以十八硅烷C18、辛烷C8、甲基C1、苯基等作为固定相).不知道这样说你是否明白
遂宁市13167926132: 正向高效液相色谱原理?反相高效液相色谱,正相分配色谱,反相分配色谱之间的关系,区别? - ?
滕任津彤: 这问题问的,太不具体了!原理一句两句说不清,简单的说: 正相:固定相极性大于流动相的极性,比如固定相是硅胶柱,流动相是正己烷;反相正好相反,固定相极性小于流动相的极性,比如固定相是C18柱,流动相是甲醇;原理就是不同物质在流动相和固定相的化学作用力不同保留情况不同,因此把不同物质分开;
遂宁市13167926132: 何谓正相色谱和反相色谱?在应用上有什么特点 - ?
滕任津彤: 正相色谱基本上可以被看做是液固吸附色谱,其柱填料是吸附剂,其表面上分布有活性吸附位点,溶剂和溶质分子均能被吸附于活性位点上.由于相互作用力有大有小,溶剂分子与溶质分子、溶质分子相互之间又存在竞争吸附,从而造成了在柱...
遂宁市13167926132: 反相与正相色谱法有何区别 - ?
滕任津彤: 正相色谱:固定相极性大于流动相极性 反相色谱:固定相极性小于流动相极性