测DNA含量绘标准曲线时，怎么算DNA的浓度
NA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / m.
DNA能PCR出来条带的浓度应该在什么范围内
实时荧光定量PCR不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。但是如果你的产物单一，有相应的标准品，也是可以测浓度的，浓度的准确性和你的标准曲线相关。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
精确测定DNA浓度的方法：
DNA纯度和浓度的检测:分光光度(紫外吸收)法1.预热紫外分光光度计10-20分钟。2.取所需的比色杯（4ml），其中一只装入3 mlH2O溶液，作为空白液，用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。3. DNA纯度及浓度的测定：①取3微升的DNA样品加入比色杯，加dH2O至3000微升，混匀。②将比色杯置入分光光度计中，调入射光波长，分别用空白溶液调整零点（T为100，OD为0），测待测样品在260nm、280nm、230nm的OD值。③计算浓度：DNA浓度（ug/ml）=A260×50ug/ml×稀释倍数对于双链DNA 1.0 OD260=50 ug/ml对于单链RNA 1.0 OD260=40 ug/ml4. 纯的DNA溶液其OD260/OD280应为1.8，OD260/OD230应大于2.0。⑴ OD260/OD280大于1.9时，说明有RNA污染，小于1.6时表明有蛋白质或酚污染。
测DNA含量绘标准曲线时，算DNA的浓度的方法：
先把标准品的浓度和每个标准品的吸光度用Excel生成标准曲线,同时得到公式。
测量每个样本的吸光度。
把吸光度代入公式,计算出对应的浓度.如果样本有稀释,还要乘以稀释倍数。
DNA及RNA含量测定方法：
取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。
用lml水做空白。
把样品杯放在分光光度计比色槽上。
每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm处OD值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug／ul。
如果想要检测样品的纯度，那么还要再测一次280nm处OD值，计算二者的比率，若比率接近2，则说明样品中核酸比较纯。若比率小于1.6，则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，建议再用酚／氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。
如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处OD值。
之前做实验，朋友介绍了一款AAT Bioquest 的DNA浓度计算器，用着很方便 ，推荐给你
DNA浓度计算器
介绍：
通过分子量、消光系数、和λmax带入Beer-Lambert定律的派生形式，可以确定溶液中DNA的浓度。物质的入max是其经历最强吸光度时的波长。对于DNA，这个波长是260nm。
Nucleotide:核苷酸。可以选三种，dsDNA（单链DNA）、ssDNA（双链DNA）、自定义
Dilution factor (optional)：稀释倍数
Pathlength：路径长度
注意：
DNA应该溶解在溶液中，DNA沉淀将导致浓度计算不准确。
吸光度读数不应超过仪器的最大检测限。这可以通过吸收光谱中的平台来确定。如果吸收光谱平稳，稀释样品可以再尝试一次。
该计算器设定仪器的光程长度为1cm。用于分光光度计的标准比色皿（通常为1cm）。如果使用不同路径长度，则应在数据输入过程中更正数值。
使用说明：
选择核苷酸或选择自定义序列进入核苷酸序列
在λmax处输入吸光度。对于典型的核苷酸，λmax是260nm，但这个值可能会根据核苷酸而改变。请使用分光光度计读数所示的最大吸光度（即最高峰）
如果用稀释样品获得吸光度，请输入稀释因子以确定原始样品浓度
如果路径长度与1cm不同，请将更正后的数值输入λ光程文本框
按“计算”显示浓度
https://www.aatbio.com/tools/calculate-DNA
DNA浓度计算器
介绍：
通过分子量、消光系数、和λmax带入Beer-Lambert定律的派生形式，可以确定溶液中DNA的浓度。物质的入max是其经历最强吸光度时的波长。对于DNA，这个波长是260nm。
Nucleotide:核苷酸。可以选三种，dsDNA（单链DNA）、ssDNA（双链DNA）、自定义
Dilution factor (optional)：稀释倍数
Pathlength：路径长度
注意：
DNA应该溶解在溶液中，DNA沉淀将导致浓度计算不准确。
吸光度读数不应超过仪器的最大检测限。这可以通过吸收光谱中的平台来确定。如果吸收光谱平稳，稀释样品可以再尝试一次。
该计算器设定仪器的光程长度为1cm。用于分光光度计的标准比色皿（通常为1cm）。如果使用不同路径长度，则应在数据输入过程中更正数值。
使用说明：
选择核苷酸或选择自定义序列进入核苷酸序列
在λmax处输入吸光度。对于典型的核苷酸，λmax是260nm，但这个值可能会根据核苷酸而改变。请使用分光光度计读数所示的最大吸光度（即最高峰）
如果用稀释样品获得吸光度，请输入稀释因子以确定原始样品浓度
如果路径长度与1cm不同，请将更正后的数值输入λ光程文本框
按“计算”显示浓度
什么是分光光度法的标准曲线?绘制标准曲线的意义何在
利用分光光度法对物质进行定量测定，主要有以下几种方法：1、标准管法 将待测溶液与已知浓度的标准溶液在相同条件下分别测定A值，然后按下式求得待测溶液中物质的含量。CT=（AT\/AS）*CS 2、标准曲线法 先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测定出它们的A值，以A值为横坐标，浓度为纵坐标，...
如何作QPCR的标准曲线
绝对定量的数据易于理解,但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。有许多商业性的标准品试剂盒供选购,可以解决这种困难。 相对定量的标准品容易在实验室里自己制备,但是数据处理比较麻烦,对实验数据的解释有一定难度。13.定量PCR基因表达的实验数据应该如何处理? 总的来说,有三个层次的校正是必须要做的。 首先...
(生物工程、基因工程)实时荧光定量PCR中用双标准曲线法来确定不同组织...
◆Real－time PCR技术的原理就是用一种标准对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量。◆这种标准对照就是参照物，在定量PCR中，用它来作为扩增系统的阳性对照，并作为未知样品定量的标准，同时通过竞争性作用校正扩增系统内管间的扩增效率，使其具有可比性。参照物按其性质不同可分为内参照和...
样品有颜色可以用DNA法测定还原糖吗?
除去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加饱和Na2SO4除去多余的铅离子。30min后取出冷却，定容至刻度，摇匀后过滤待测。3. 样品测定：吸取6ml待测液，加4ml斐林试剂，其它操作与标准曲线相同，在590nm波长下读取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在标准曲线上查出糖含量.
有丝分裂染色体,DNA,染色单体的变化规律标准曲线是什么
这个在这里不好画。间期、前期到中期，染色体不变，和原来一样，到了后期变成原来的两倍，末期和原来一样。间期的DNA是渐变的，前期中期还有后期DNA是原来的两倍，末期和原来一样。染色单体就没什么曲线可画的了。因为到了后期就没有染色单体。
双标准曲线是什么意思
在整个实验中样本的靶序列的量来自于标准曲线，最终必须除以参照物的量，即参照物是1*的样本，其它的样本为参照物量的n倍。在实验中为了标准化加入反应体系的RNA或DNA的量，往往在反应中同时扩增一内源控制物，如在基因表达研究中，内源控制物常为一些管家基因（如beta-actin,3-磷酸甘油醛脱氢酶GAPDH...
什么是分光光度法的标准曲线?
分光光度法的标准曲线定义：标准曲线是直接用标准溶液制作的曲线，是用来描述被测物质的浓度(或含量)在分析仪器响应信号值之间定量关系的曲线。绘制标准曲线意义：绘制标准曲线的实用意义就是只要测得其吸光度值即可在标准曲线上查出相应的浓度值。物质与光作用，具有选择吸收的特性。有色物质的颜色是该物质...
高效液相色谱法一定要作标准曲线的吗
这个时候是不是要进标准曲线就要看你的试验方法了。你说的是标准曲线法。不过除此之外，有的方法是外标法，也就是和你样品浓度一样的对照品，平行配制两个，进样分析。有的方法是内标法，就需要样品中添加内标物。还有的面积归一化，那就什么对照都不要进了。方法要看你的质量标准，上面应该有计算...
纳氏试剂测氨氮做标准曲线时要不要减试剂空白
要减.标准曲线的绘制：吸取 0 、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00和10.0mL铵标准使用液于50mL比色管中,加水至标线,加1.0mL酒石酸钾钠溶液,混匀.加1.5mL纳氏试剂,混匀.放置10min后,在波长420nm处,用光程10mm比色皿,以水为参比,测定吸光度.由测得的吸光度,减去零浓度空白管的吸光度后,...
ELISA双抗体夹心试验中最后绘制标准曲线的浓度梯度怎么设定啊?_百度...
对照的意思就是平行对照，也就是同一浓度的样品做两个孔 阳性就是已知浓度的阳性样本，比如检测指标是氯霉素，那阳性就是已知浓度的氯霉素标准液。阴性就是完全不含有阳性指标。浓度梯度一般是根据你的试剂盒检测范围和你预估的样品含量来稀释的。一般是完全不稀释的做一个，然后按从高到低，依次10倍稀释...
无梦生乳：[答案] 1.先把标准品的浓度和每个标准品的吸光度用Excel生成标准曲线,同时得到公式. 2.测量每个样本的吸光度. 3.把吸光度代入公式,计算出对应的浓度.如果样本有稀释,还要乘以稀释倍数
浮山县13699914869： 用紫外吸收法测定DNA含量,如何根据光吸收值求DNA的含量? - ？
无梦生乳： 您好! ① 1个OD260相当于50ug/ml DNA. ② 紫外吸收法测定DNA含量,OD260/OD280=1.8-2.0之间时,DNA纯度较好;2.0说明有RNA污染,此时测定的OD260值不能用来定量. 百度教育团队【海纳百川团】为您解答.感谢您的采纳 O(∩_∩)O .如有疑问,欢迎追问.
浮山县13699914869： 如何用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样品浓度 - ？
无梦生乳： 在ELISA实验结束后,我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的OD值.其中,标准品的浓度已知,我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度,以 OD值为横坐标,浓度为纵坐标,做一条标准曲线,并用公式表示出来.这样,我们把...
浮山县13699914869： 通过A260和A280的od值怎么计算DNA的含?通过A260和 ？
无梦生乳： 比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响.A230表示样品中存... 5,那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留,而是蛋白残留.扩展资料测DNA或RNA...
浮山县13699914869： 分析化学中,做标准曲线时,怎么确定上限和下限呢?既然先做标准曲线,后做样品的含量测定,怎么确定后面样品含量测定的值正好落在前面做的样品标准... - ？
无梦生乳：[答案] “标准曲线法”是上世纪五六十年代苏联老大哥传授过来的方法,不尽科学:没有考虑每次所作环境情况千差万别所造成的测定值波动,这样算怎么回事儿?一样还是不一样?合格还是不合格?建议每次测定时用“标准样品法”,根据需要可带一个...
浮山县13699914869： 怎么通过excel绘制的标准曲线计算样品浓度 - ？
无梦生乳： 绘图时最好用XY散点图.生成图表后,选择生成的曲线,之后在曲线上点击右键,选择“添加趋势线”,在“类型”中,选择最接近的曲线形式.比如你的曲线接近线性,则选择“线性”,若接近乘幂的形式,则选择“乘幂”,如果比较难判断,则选择“多项式”,并调整其阶数.之后切换到“选项”标签页,选择“显示公式”,确定.此时,就会在图表中出现一个公式,即浓度对吸光度的关系. 在单元格中输入该公式(其中的X值用具体的单元格引用代替),即可根据该公式计算出样品的浓度.
浮山县13699914869： excel 标准曲线做好后怎么计算 - ？
无梦生乳： 利用做出的标准曲线的公式进行计算相应的浓度. 假如表格如下,由吸光度和浓度的关系绘制标准曲线,由此求算任意吸光度所对应的浓度. ①插入带线的散点图 ②选中图表上的所有点,右键单击,选择“添加趋势线” ③在弹出的对话框中勾选“显示公式” ④此时,图表的线上出现计算公式,这个公式就是经过拟合的浓度与吸光度的关系,选择这个公式,Ctrl+C复制 ⑤将这个公式复制到空白单元格中,根据公式,设置excel计算公式,本例中浓度=吸光度*0.5 ⑥此时在A9单元格输入测得的习惯度值,B9中便会显示相应的浓度.
浮山县13699914869： 原子吸收 标准曲线是怎么计算的 - ？
无梦生乳： 原子吸收好比是天平,而标准样品就是砝码了,而由于光电系统的特性,随着时间的进行,系统的光电特性是变化的,所以每次都要重新测试标准曲线,形成新的标准曲线
浮山县13699914869： 生化标准曲线如何求待测样品浓度 - ？
无梦生乳： 把标准曲线的方程求出来,再把样品吸光度代入方程,求出样品浓度.
浮山县13699914869： 怎样获得DNA扩增效率标准曲线 - ？
无梦生乳： 是实时定量吗?相对定量delta delta Ct法的话,即比较内参与目的基因扩增效率是否相同,用Ct值为纵轴,模板cDNA稀释倍数为横轴做拟合曲线,比较目的与内参这两条拟合曲线之间R平方值是否符合要求(一般要大于0.99)及斜率是否相同,才能进行下一步的定量试验.
