人工老窖泥的菌种培养时应注意哪几个问题？

菌种的扩大培养时应该注意那些问题？~

一，菌种的菌龄。过于年轻的种子，前期生长缓慢，整个发酵周期延长；过老的种子则生产能力下降而菌丝过早自溶。一般接种龄以菌丝处于生命力极为旺盛的对数生长期，且培养液中菌体量尚未达到最大值。
二，接种量。接种量过多往往使菌丝体生长过快，培养液粘度增加，造成溶解氧供应不足而影响产物合成。
三，种子级罐数扩大培养。在这个培养过程中要严格取样检查有无杂菌，同时等待结果的过程中应低温处理防菌种老化。种子级罐数越少，越有利于工艺简化，减少染菌可能。
四，种子的选择。

制定菌种生产计划：菌种生产计划包括菌种生产日程、生产数量和质量检查等项内容。
（1）生产日程安排进行规模化香菇代料栽培，菌种用量较大，所需菌种应在料筒（料袋）生产之前培养好，菌龄60～90天为宜。菌龄太短或太长，接种后定植成活缓慢，不利于提高菌筒（菌袋）成品率。尤其是越夏菌种的成活率低，易感染杂菌，应杜绝使用。菌种生产的具体日期，应根据料筒生产日程确定。（2）菌种用量菌种用量主要由栽培规模和接种密度决定，以每袋接种4～6穴计，每千克菌种可接种70～80袋。菇农应根据栽培计划，提前向信誉好的菌种厂定购菌种，并提出主栽品种名称、菌种数量及质量要求。不宜临时到处求购，否则容易失败。
菌种生产必须遵守国家的有关法规。有条件的单位或者个人，可以参考以下方法进行香菇菌种生产。从事食用菌品种选育和菌种生产、经营、使用、管理等活动，应当遵守《食用菌菌种管理办法》和《食用菌菌种生产技术规程》（NY/T 528）要求。香菇菌种生产的工艺流程及其技术要点请参考有关资料，本书不作详细介绍。
香菇菌种生产与使用中应该注意的几个问题：（1）组织分离获得菌丝体纯培养物①选择种菇。用作组织分离或孢子分离的种菇，必须在抗逆性强的高产群体中挑选出菇早、菇形圆整、柄短、肉厚、大小适中、无病虫害，5～6分成熟（内菌膜部分破裂）的香菇作种菇。由于第一、第二批菇较能体现早熟性状，加上此时菌棒养分充足，所产香菇健壮，用其作孢子分离或组织分离，均易得到具有本品种（菌株）特征的菌丝体纯培养物（菌种）。所以提倡在第一、第二批菇中挑选种菇。这一原则适于香菇、蘑菇、草菇、平菇、白灵菇、杏鲍菇、杨树菇、姬菇、金针菇等多种食用菌。②组织分离。按上述标准挑选种菇，采收后装入无菌纸袋内（忌用塑料袋）。在无菌条件下，先用酒精棉球对菇体进行表面消毒，然后手持菌柄，将香菇撕成两半，取手术刀经火焰灭菌、冷却后，在菌盖、菌柄交界处挑取一小块（米粒般大小）菌肉，移植到PDA斜面上（事先配制并灭菌备用），即可转入培养观察阶段。③培养观察。上述组织分离物在25℃条件下，经过3～5天即可看到分离物表面长出白色绒毛状菌丝，呈星芒状在培养基上生长。培养期间，应每隔1～2天检查1次，随时淘汰霉菌或细菌污染的培养物。培养10～15天后，再作1次转管培养，即可得到香菇母种。进行栽培试验，确认其可以正常出菇后方可用于菌种生产和栽培。笔者发现，很多菌种生产者与个别菇农自己分离香菇菌种，根本不进行栽培试验，直接将香菇组织分离物用于栽培。生产实践表明，这是十分危险的，损失往往不期而遇。（2）菌种生产与使用食用菌菌种生产有严格的技术路线，只能循序渐进。在香菇菌种生产中，通常将采用子实体组织分离、孢子分离，或菇木基内菌丝体分离所得到的菌丝体纯培养物，及其转接的菌种称为母种，也称一级种。由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物称为原种（有的地方称为母种），也叫二级种。原种主要用来生产栽培种，也可直接用作栽培种。由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物称作栽培种，或称生产种，也叫三级种。栽培种直接用于栽培。
检查菌种质量：检查香菇菌种质量可以参照国家标准GB19170—2003 香菇菌种。检查原种、栽培种菌种质量可按以下步骤进行：（1）查阅制种记录查阅制种记录，核对是否名副其实，避免张冠李戴。（2）计算菌种成品率只有染杂率低的菌种才能作为菌种繁殖播种。制作菌种常有污染杂菌的现象发生。菌种培养期间，原种染杂率≤5%，或栽培种染杂率≤10%，均属正常现象，去杂后的菌种可按计划利用。如果原种染杂率＞10%，栽培种染杂率＞20%，则表示污染率过高。剩余菌种虽经认真检查没有发现杂菌，但很难肯定它们确实是无杂菌的纯培养物（菌种）。生产实践表明，原种污染率过高时，剩余未发现杂菌的菌种应改变用途，可作为栽培种直接用于生产。
如果原种污染率超过15%，栽培种污染率超过25%，均不宜作为菌种应用于生产，可直接用其栽培出菇或出耳；或全部报废，将其灭菌后掏出培养料用于食用菌代料栽培。（3）调查菌种培养时间在适当培养条件下，菌种培养25天左右即可完全吃料。如果培养时间太长，超过45天仍未完全吃料，表示菌种已经老化，不宜用于生产。（4）再生试验为了避免购买或使用长势弱、退化菌种或老化菌种，选购或使用前应进行再生试验，检查菌种是否壮。具体做法是：在菌种中部取黄豆或蚕豆大小的一块菌种，移植到培养皿中，培养皿内先铺一张滤纸或数层卫生纸，加少许冷开水使纸湿润，在室温（25℃）条件下培养3～5天。若菌种块正常萌动，长出旺盛、整齐的菌丝，表示菌种壮，质量好。如果培养5～7天仍原样不动，说明菌种长势弱，再生能力差，不宜利用。
培养或贮运过程中，容器破损或已被老鼠、害虫光顾的菌种，也不能利用。（5）检查菌种的成熟情况在生产中，利用培养成熟的菌种可以提高接种成活率。判断菌种是否成熟或老化，一般可以从3个方面观察分析：
①观察菌种是否成块状。无论是锯木屑菌种，还是木块菌种的菌丝体，一部分进入培养基内部，一部分向空中伸展，即所谓气生菌丝体。健壮菌种的气生菌丝体非常旺盛，伸展到一定程度就互相连接，将培养基包成块状，成为相当坚韧的菌块，这是良好菌种的一个标志。
②观察菌种表面是否正常。香菇菌种培养太久，菌皮逐渐加厚而褐变，与菌盖表面的颜色相似。当菌种表面出现这种颜色时，表示菌种已经老化。老化菌种的再生力弱，且易感染杂菌。如果发现杂菌污染，就及时淘汰。木块菌种的老化现象是由于木材被菌丝体腐化过度，木栓组织因而软化，以致毫不费力就可以捏碎。这样的老化菌种与未成熟菌种一样，接种后菌丝体不易伸长到段木内部，定植成活率低，不宜利用。
③观察培养基变色是否均匀。香菇是白腐型木材腐朽菌，木材经过菌丝体利用后便腐朽成浅黄白色。培养基变色是否均匀，可以用来判断菌种是否成熟。检查锯木屑菌种时，可以随机取出几瓶，从每瓶菌种的中间部位掏出一块，观察锯木屑变色是否均匀、变色的浓淡程度如何、菌丝体是否只蔓延外层、是否局部无菌斑，然后通过样品判断整批菌种的成熟情况。如果尚未成熟，就应该继续培养。通过上述鉴定，将合格菌种做上标记，以备利用。若近期内暂不接种，必须将菌种转移到冷库内，或者存放在其他清洁、阴凉（低于15℃）、干燥、通风良好的地方，而且要避免与农药、肥料等一起堆放，以免影响菌丝体的活力。
菌种制作与使用过程中应该注意的其他问题：（1）菌种不宜多次转管食用菌的菌种是菌丝体的纯培养物。生产中不能直接使用母种播种，而必须将母种扩大培养成原种、栽培种或液体菌种，才能在生产上广泛使用。从科研单位购买的母种，多已转管2～3次，基层菌种厂转管1次比较稳妥。如果菌种厂转管次数过多，常会出现菌丝生长缓慢的现象，或出菇推迟、出菇少，或菇形小、质量差，甚至出现不出菇的绝收现象。以上均称为菌种退化现象。所以说，菌种不宜多次转管。
多次转管将导致菌种退化，是公认的事实。若究其原因，目前尚无定论。但比较一致的看法是：高温诱变和病毒寄生导致菌种退化。当然，多次转管并不是菌种退化的唯一原因，生产中双核菌丝脱单核化，或双核菌丝与孢子萌发的单核菌丝杂交，产生所谓布勒现象，也是导致菌种退化的原因之一。（2）优良菌种的标准各种食用菌菌种，既有特定的质量标准，也有共同的质量标准。这些共同的质量标准主要是纯、壮两条。
①第一是菌种的遗传种质优良。生产实践证明，用其栽培可以实现优质、高效的栽培目标。这样的菌种，就是遗传种质优良的香菇菌种，即所谓主栽品种。
②第二是菌种纯。除银耳菌种外，其余各种栽培食用菌均是一种菌丝体的纯培养物，不得混入杂菌或纯培养物以外的其他菌种。例如，香菇856菌种，只能是856菌株菌丝体的纯培养。第一，不得混入毛霉、根霉、曲霉、木霉等任何霉菌或细菌、病毒；第二，也不得混入平菇、金针菇等其他食用菌的菌丝体；第三，也不得混入香菇856菌株以外的任何一种香菇菌株，如武香1号、135-1、939等。
③第三是菌种壮。菌种长相正常，长势旺，接种（移植）后再生能力强，即所谓壮。菌种壮，接种后才能尽快吃料发菌，正常生长繁殖。如果菌种不壮，接种后迟迟不能萌动，即使超长时间培养不被污染，勉强用于生产，必然影响正常出菇。

在合成培养基中，酯酸钠和乙醇是必不可少的基质，否则，己酸就不能合成。用其它的醋酸盐代替醋酸钠也可以。
酵母膏含一定量的生物素，能促进己酸的合成。酵母膏的量不足或质量低劣，都会影响己酸的合成，而其它无机盐影响不大。
用酒糟浸出液作配料用水，可以取代酵母膏和无机盐。
己酸菌（或窖泥）培养液有时会变黑，有的出现黑色沉淀，有的出现黑色膜状物。出现这种情况有可能是以下几种原因：
（1）强氧化作用
采用高锰酸钾作消毒剂，与铁罐起强氧化作用，产生FeO（黑色）、FeO3（红色或黑色）、Fe3O4（黑色）。但是，这种变黑没有H2S恶臭，黑色成片状或块状，静置后，可沉淀下来。
（2）氨细菌感染
培养液中有酵母膏（或酵母自溶物），而且在不断地传代过程中，还有部分细菌残体，氨细菌可利用这些作为它的营养，开始繁殖。分解蛋白质的结果，产生H2S气体，而H2S又与Fe离子结合，产生FeS（黑色）。也就是说，污染是变黑的原因，使用铁罐是变黑的条件。
（3）培养基pH值的影响
己酸菌属于变形杆菌，是梭状芽孢杆菌。它除了有己酸合成一套酶系外，还有另一套酶系。在环境条件正常时，它可以通过乙酰辅酶A的作用，形成丁酰辅酶A，进而再形成己酸。
但在环境改变、不适于己酸菌合成己酸时，即pH值过高时，就会使另一套酶系产生作用。
在肽酶的作用下，蛋白质进行分解。首先脱掉氨基酸分子上的氨基，进一步产生H2S，由此产生恶臭，并造成培养液变黑。当菌液变黑时，培养基的pH值在8以上，甚至更高。
浓香型曲酒窖泥中的己酸菌等菌株，因长期生活的特定环境与合成培养基截然不同，所以，用合成培养基进行菌种分离和种子培养，虽然己酸菌能正常生长繁殖，但接种到酒糟、窖泥培养基中，在窖内即使能起作用，也会有一个较长时间的环境适应过程。因此，最好用酒糟浸液作培养基，作种子的筛选、纯化和各级种子的培养。
根据大多数浓香型白酒厂的情况，出窖糟和黄水的pH值大致为3.4－4.0，若培养液采用pH在6.0以上的环境中培养，后又接种到窖内，使菌种又要有一个适应过程。因此，菌种培养时，最好采用pH4.5－5.5。
窖泥微生物在浓香型大曲酒的香味生成上，具有重要作用。只有在多种微生物的作用下，酶系复杂，酒的香味才丰满细腻。纯种微生物的酶系因单纯，往往会造成酒的香味单调。而采用泥种培养窖泥，若泥种质量较差，窖泥功能菌种类和数量不足，生产出来的酒也会香味单调。为了相互取长补短，充分发挥各自的优势，可以采用泥种与“纯种”相结合的方式，即以老窖为基础，加入人工分离的种子，予以强化，效果会更加显著。

---

蓬溪县17136447847： 佳成生物的人工老窖泥的菌种培养时应注意哪几个问题?？
迟亲妇炎： 在合成培养基中,酯酸钠和乙醇是必不可少的基质,否则,己酸就不能合成.用其它的醋酸盐代替醋酸钠也可以. 己酸菌(或窖泥)培养液有时会变黑,有的出现黑色沉淀,有的出现黑色膜状物.出现这种情况有可能是以下几种原因: (1)强...

蓬溪县17136447847： 菌种的培养与鉴定注意事项有哪些 - ？
迟亲妇炎： 菌种培养需要注意合理配制培养基.严格消毒灭菌处理.使用优质菌种.控制适宜的温度,湿度.至于鉴定注意事项应该是根据所鉴定的内容仔细观察分辨.精益求精.

蓬溪县17136447847： 白酒的制作技术 - ？
迟亲妇炎： 玉米是酿酒的好原料之一,除单产较高外,本身所含的各种成分较适中,又富含植酸,有利于发扬酒的回甜风味.玉米蒸熟后,也比较疏松适度,不粘糊,有利于发酵. 工艺流程 固体斜面原菌→二重皿→扩大培养→曲种→麸曲 制作方法1.玉...

蓬溪县17136447847： 求:窖泥的最基本的制作方法,我想用大曲酿造高粮酒,那位高人指点迷津,谢谢. - ？
迟亲妇炎： 浓香白酒使用窖泥做窖池进行发酵,为了提高质量、产量,人工老窖泥重要性特别突出. 邹恒刚写的窖泥培养丛书比较深入浅出分析老窖泥的来龙去脉,随着时代发展、技术进步,现在在人工老窖泥方面引进了黄酒发酵的部分菌种等,在浓香白酒中应用,新建的浓香白酒窖池,己酸乙酯一年就可以达到200mg/100ml左右.方法: 黏土+营养盐+己酸菌+豆粕+曲粉+生香酵母菌+酒精(酒尾)+黄水+红曲.夏季密封培养40~60天,即可建窖使用.

蓬溪县17136447847： 浓香型白酒养窖养糟怎么做 - ？
迟亲妇炎： 浓香型白酒养窖:有句话说以窖养糟,以糟养窖.就是发酵正常的窖中酒糟可以养护窖泥,反过来优质窖泥也可以培养好的酒糟. 原则是:按工艺操作,发酵情况良好,才能有利于微生物正常生长. 一般养护:清蒸原辅料,合理配醅,低温入池发酵,调整发酵周期,使出池酒醅酸度降低;注意窖池卫生,避免感染杂菌;平时用培养的己酸菌、甲烷菌等多菌种培养液或窖底水、优质曲粉泼洒窖壁.

蓬溪县17136447847： 在进行菌种收藏管理时有哪些注意事项 - ？
迟亲妇炎： 3、注意事项3⑴、菌种活化前,请将安瓿瓶保存在5⑴0℃的环境下.3⑵、厌氧菌的培养... 不你问哪一种的活化方法? 菌种收藏的目的、原理及经常使用的方法有哪些? 生产柠檬酸... 有的菌就没这么强

蓬溪县17136447847： 酵母在扩大培养中应注意哪些问题? ？
迟亲妇炎： 酵母扩大培养的目的在于培养大量酵母细胞.为达此目的,同 时确保生产正常进行,在酵母扩大培养过程中必须注意以下事项.①选好出发菌种,选用活力强、性能优良的...

蓬溪县17136447847： 直接培养法培养颗料污泥有哪些注意事项? - ？
迟亲妇炎： 直接培养颗粒污泥时通常使用非颗粒性的污泥,虽然厌氧处理工艺的大多数菌种要求严格的厌氧条件,但在培养启动时不必追求严格的厌氧.因此直接培养时既可以使用非颗粒性的纯厌氧污泥,也可以命名用经过陈化的好氧剩余污泥,如果有搅...

蓬溪县17136447847： 食用菌种植要注意哪些问题 - ？
迟亲妇炎： 食用菌的种植首先要掌握栽培技术,做好市场调查.根据市场需求选择适宜的品种.根据选择品种的生物特性来配制合理的培养基,选择优质菌种,这是能否高产优质的关键之一.栽培的各个环节严格无菌操作程序.稍有疏忽就会带来不可估量的损失.最后就是协调好温度,湿度,空气,光照四个环景条件. 香菇市场前景各地是不一样的.大规模产区处于饱和状态.应该有限度发展.而对于非香菇产区,消费群体比较大的地区.香菇的市场前景还是很好的.因此应该做好市场调查.根据当地市场确定香菇的发展趋势.

蓬溪县17136447847： 发酵的工艺过程怎样的? ？
迟亲妇炎： 发酵的工艺过程 (1)菌种活化与扩大培养菌种在使用之前,往往采用斜面冰箱保藏 法、沙土管保藏法、石蜡油封存法、真空冷冻干燥保藏法等方法保藏,此时处 于休眠...