PCR技术(聚合酶链式反应)可以使目的基因扩增，获得大量DNA克隆分子。(过程如下图，图中黑色长方形是引物)
DNA的复制需要RNA引物，这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的。DNA聚合酶不能从头合成DNA（需要引物DNA or RNA），因为DNA聚合酶具有高保真系统，这个系统要求，在新链的延伸过程中，只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸，否则延伸终止，启动切除修复机制，直至添加正确的碱基，也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA-DNA）才能继续下游DNA的合成，这是它的忠实性和高保真系统决定的。而RNA聚合酶可以从头合成RNA，合成的RNA游离在模板外，不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成。两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物。
PCR反应中所用到的DNA引物，是用化学法人工合成的，与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸；而在体内，由于DNA聚合酶的忠实性，不能从头合成DNA，因此只能采用RNA引物来延伸了。
你看，你分别获得了1-1200 nt以及1000-1400 nt这两段序列，那么中间有200 bp长度的序列是重叠的，对吧？也就是说你已经从序列信息上获得了这个CD区所有的序列信息。如果你只是需要序列信息的话，已经足够了，但是如果你需要扩增得到这完整的1400 bp用于后续的实验，那么你需要继续扩增完整的CD区。
如果这样的话，我有个小窍门，你可以把1-1200 nt以及1000-1400 nt这两个片段混合和作为模板，然后利用引物A和D进行扩增，很容易就能得到完整的1400 bp产物，不过前提是你第一步变性退火的时候，时间适当的长一些，让这两个大片段能够混合退火，即让两个片段重叠的200 bp部分能够退火，便于你扩增。
| (1)DNA的半保留复制；模板DNA双链解旋形成单链 (2)2；230 (3)31000 |
FCD和MRD基因有什么不同?
采用灵敏度高、特异性强及稳定可靠的实验方法对白血病患者进行定期MRD检测，对于评估疾病状态、判断疗效、预测复发、指导治疗具有重要临床意义。常用的检测方法包括：染色体核型分析、荧光原位杂交（ FISH）、流式细胞仪（FCM）、聚合酶链反应技术（PCR）、细胞培养技术，免疫荧光等。相关研究表明，适合于急性...
我好像得了幽门螺杆菌,要怎样才可以知道得了幽门螺杆菌?
胃镜下采样后还可采用聚合酶链反应严CR)检测，这种方法灵敏度较高，结果也比较可靠;也可做快速尿素酶检测，该方法简便快速，但由于观察时间过短或某些因素的影响导致结果不够可靠。胃镜采样还存在下列问题：患者需要经受插镜之苦，若幽门螺杆菌呈灶性分布易导致漏诊(漏诊率达10%左右)。但凭借医生丰富的...
中国胃肠间质瘤诊断治疗共识
3、基因检测:应该在符合资质的实验室进行基因检测,推荐采用聚合酶链式反应(PCR)扩增-直接测序的方法,以确保检测结果的准确性和一致性。基因突变检测十分重要,有助于一些疑难病例的诊断、预测分子靶向治疗药物的疗效和指导临床治疗。 专家委员会推荐存在以下情况时,应该进行基因学分析: (1)对疑难病例应进行c-kit或PDGF...
TCR基因修饰的细胞毒性T淋巴细胞构建
利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)、反转录PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆上述TCRα、β链全长基因。利用基因扫描技术对TCR CDR3区域进行分析,了解其可能存在的亚家族。 Meyerhuber等运用此方法从HER2(369-377)特异性CTL中成功克隆了TCR基因。 目前在TCR基因转染过程中报道较多的...
传染性单核细胞增多症知多少
5、EB病毒DNA的检测采用聚合酶链反应(Polymesasechainreaction,PCR)进行检测时,可发现患儿血清中含有高浓度EB病毒DNA,提示存在病毒血症。 (三)诊断标准: 1)临床症状:至少3项以上阳性 ①发热 ②咽炎、扁桃体炎 ③颈部淋巴结肿大(1cm以上) ④肝脏肿大(4岁以下:2cm以上;4岁以上:可触及) ⑤脾脏肿大(可触及) 2)血...
pcr上岗证每年什么时联系
_cr上岗证就是核酸检测的资格证明。国家规定只有具备了pcr上岗证的人才能够做核酸检测工作，要不然就是属于违规操作。pcr其实就是聚合酶链式反应，这是一种能够放大扩增特定DNA片段的高级分子生物学技术。_cr上岗证就是具备这种检验测试的资格认证，只有具备了pcr上岗证之后才能够从事很多基因类检测工作。大...
跪求请问谁知道大肠杆菌在保健食品中的标准值是多少?我可以向那里咨询...
PCR技术扩增体系的基本成分 引物: PCR产物的特异性主要取决于引物链的特异性。由于存在同源序列,随意设计的引物链,其PCR产物在电泳分析时可能出现多条链,因此在设计引物链时应充分考虑引物特异性。引物长度一般为15-30个碱基,G+C含量为40- 60%,浓度0.1-1umol\/L 。 TaqDNA聚合酶:浓度为1-4ul\/100ul。TaqDNA...
怎么判断自己有幽门螺杆菌
判断自己是否感染幽门螺杆菌，可以根据两种途径。1、可根据幽门螺杆菌的症状：胃痛及胃部适。胀气、腹泻、便秘 过度打嗝 恶心、呕吐、食欲不振、厌食、体重减轻、血便、黑便、极度疲劳，最为明显的是口臭。2、直接去医院消化科检测，目前C13或C14尿素呼气检测，快速方便、无创伤、准确率高达90%，特别是...
请问分子病理学的地位和应用?
我们正在试验用real-time PCR(实时监测聚合酶链反应)来检测HER2\/ neu基因过表达。这项方法是分析mRNA扩增的水平,基于实时检测PCR 扩增的产物,不需要一般的PCR 的产物处理,因而避免了因为操作所产生的各种问题[9]。能够动态监测整个PCR 过程,具有定量性和实用性。需要特别强调的是只有对上述检测方法进行统一规范化,...
肺癌是“头号癌症杀手”,怎么抗争?
上海市胸科医院对于接受靶向治疗的病人，就会在治疗前、治疗一个月以及临床发现疾病进展几个时间点通过ddPCR(微滴式数字聚合酶链式反应)技术检测患者的耐药变化情况。但耐药之后进行再活检的最大困难就是组织标本难以获得，此时液体活检能发挥很大作用，可作为T790M 突变的常规筛检手段，而液体活检之后，组织...
并呼耳聋：[答案](1)DNA解旋 解旋 氢(2)999000(3)①A ②不一定 如果是异卵双生(或多生)的双(或多)胞胎,其遗传物质不一定相同 ③B
会同县19683623657： 在进行DNA亲子鉴定时,需大量的DNA.PCR技术(聚合酶链式反应)可以使样品DNA扩增,获得大量DNA克隆分子.该技术的原理是利用DNA的半保留... - ？
并呼耳聋：[答案] (1)模板DNA双链解旋形成单链 在DNA聚合酶的作用下,把原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链 (2)2 2 解旋酶 (3)31000
会同县19683623657： 什么是聚合酶链式反应 - ？
并呼耳聋： 聚合酶链反应(PCR)是在试管中,能在较短的时间内使极微量的特定核酸扩增百万倍(106~109),故又称基因扩增技术,其敏感性远远超过包括放射免疫在内的所有血清学检验方法.其是目前世界上研究感染性疾病、遗传性疾病的早期诊断和癌细胞基因检测、基因突变的先进技术.只要患者体内极微量的乙肝病毒和丙肝、庚肝病毒存在就能被检测出来.但也因其太敏感了,也容易因标本的污染等原因出现假阳性.
会同县19683623657： PCR技术的优点 - ？
并呼耳聋：[答案] 聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点.特异性...
会同县19683623657： 聚合酶链反应的基本原理神经疾病诊断和研究中的应用是怎样的? ？
并呼耳聋： 聚合酶链反应( polymerase chain reaction, PCR) 是在试管内进彳了的DNA扩增,它推动了分子生物学、基础和临床医学的进展.( 1 ) 基本原理是在模板DNA、引物和4 ...
会同县19683623657： PCR是聚合酶链式反应的缩写,利用PCR技术可对目的基因进行扩增.请根据下面PCR反应原理示意图回答有关问题:(1)PCR的原理是___.(2)PCR技术... - ？
并呼耳聋：[答案] (1)PCR的原理是DNA双链复制. (2)PCR技术通过高温加热使DNA解链,DNA的这种解链现象在一定的条件下是可逆的,即降低温度后能复性. (3)DNA解链后冷却的目的是让引物与互补DNA链相结合,形成局部双链. (4)当温度加热至70~75℃...
会同县19683623657： pcr在基因工程的用途？
并呼耳聋： 亲,很高兴为你解答:在基因工程中目的基因是需要用PCR技术来进行扩增的.聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加.因此可见pcr在基因工程的用途取得了很大的用途.
会同县19683623657： 什么是PCR? - ？
并呼耳聋： 聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction),是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段.
会同县19683623657： 关于生物PCR技术 - ？
并呼耳聋： 首先pcr比较快,人体的dna从解旋到复制再到形成双联的dna分子是很复杂的,其次人体在复制dna的时候不排除有突变的可能,而pcr技术采用的是人工的将基因片段剪切和拼接,使用的是各种dna的酶,比如dna聚合酶就是最重要的一个,酶又是高效的催化剂,所以可以降低反应的时间和突变的可能而pcr技术采用的是人工的将基因片段剪切和拼接
