蛋白质糖基化后,分子量会增加多少
一、分析糖基化位点的方法:
1.实验方法:
质谱分析:质谱(MS)是确定蛋白质糖基化位点的黄金标准。通过对特定肽段的MS/MS分析,可以鉴定出糖基化的特定位点。
免疫印迹:使用特定于糖基化位点的抗体进行检测。
2.生物信息学预测:
预测软件和数据库:如NetNGlyc(预测N-糖基化位点),NetOGlyc(预测O-糖基化位点),GlycoEP等。
使用这些工具的步骤通常包括:输入目标蛋白质的氨基酸序列;选择糖基化类型(N-或O-糖基化);运行预测,得到潜在的糖基化位点;评估预测结果,通常这些工具会给出一个置信度得分。
二、糖基化后分子量的预测:
1.理论计算:
知道了糖基化位点及其类型后,可以根据添加的糖链的类型和数量估算分子量的变化。
2.质谱测定:
糖基化蛋白质的整体分子量可以通过质谱直接测定。糖基化引起的质量变化可以通过分析糖基化和未糖基化形式的峰值差异来确定。
有些蛋白有同源异构体被抗体识别,分子量可以增加很多倍。有一些结构比较单一的蛋白分子量也并没有太多变化。
要分析蛋白质的糖基化位点以及糖基化后的分子量
首先需要知道该蛋白质的氨基酸序列
expasy是一个很不错的可以用来分析蛋白糖基化位点以及糖基化后的分子量的网站
只需要提交蛋白序列,就可以分析出该蛋白质的糖基化位点以及糖基化后的分子量
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(2)分泌蛋白在内质网进行修饰、加工及转运。①修饰、加工:包括蛋白质糖基化、二硫键的形成、蛋白质折叠和多亚基蛋白的装配、特异性的蛋白质水解切割及酰基化等。其中蛋白质糖基化分为两种形式:N-连接的糖基化和0-连接的糖基化(主要发生在高尔基体中)。②转运:贺白质经修饰、加工后形成了正确的...
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秦莘及克: ①溶解度.糖基化往往使蛋白质在水中的溶解度增大.但是,若糖链增长到一定程度,由于相对分子质量增大和形成高级结构,亦会出现憎水性增加的现象.②电荷.氨基糖解离后,应带正电荷.但是,天然存在的氨基糖的氨基都被N-乙酰基取代,实际上相当于中性糖.许多糖链上有唾液酸,或糖醛酸,解离后带负电荷.所以,糖基化可能使蛋白质增加许多负电荷.生物资源,生物114,生物考研,更多信息,尽在生物114
长岭县17522115934: 为什么western blot band条带的大小和预测的分子量大小不同? - ?
秦莘及克: 但即使是这样,Western Blot得到的条带大小依然会和预计的分子量大小有出入.大部分常见的原因如下:1.翻译后修饰—比如蛋白的磷酸化,糖基化等,这些都会增加蛋白的分子量大小.2.翻译后剪切—比如很多蛋白首先被合成为前体形式,然后通过剪切获得生物学活性,比如pro-caspases.3.剪接变异体—相同的基因,经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白.4.相对电荷—氨基酸的组成 (带点 vs 不带电) 5.多聚体—比如蛋白二聚体.
长岭县17522115934: 蛋白质糖基化生物学意义是什么 - ?
秦莘及克: 蛋白质的糖基化是指在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质,和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键的过程.糖基化是对蛋白的重要的修饰作用,有调节蛋白质功能作用.具体过程: N-连接的糖链合成起始于内质网,完成与高尔基体.在内质网...
长岭县17522115934: 组成蛋白质的基本构件只是20种氨基酸.为什么蛋白质却具有如此广泛的功能??
秦莘及克: :①溶解度.糖基化往往使蛋白质在水中的溶解度增大.但是,若糖链增长到一定程度,由于相对分子质量增大和形成高级结构,亦会出现憎水性增加的现象.②电荷.氨基糖解离后,应带正电荷.但是,天然存在的氨基糖的氨基都被N-乙酰基取代,实际上相当于中性糖.许多糖链上有唾液酸,或糖醛酸,解离后带负电荷.所以,糖基化可能使蛋白质增加许多负电荷.
长岭县17522115934: 蛋白质糖基化的基本类型,特征及生物学意义是什么? - ?
秦莘及克: 一,类型:N-连接,O-连接 二,特征:在蛋白质合成的同时或合成后,在酶的催化下寡糖链被连接在肽链特定的糖基化位点,形成糖蛋白. 三,意义 1,使蛋白质能够抵抗消化酶的作用. 2,赋予蛋白质传导信号的作用. 3,某些蛋白只有在糖基化以后才能正确折叠.
长岭县17522115934: 什么是糖化作用? - ?
秦莘及克: 什么是糖化作用 糖分子(主要是葡萄糖,也包括其糖类,如果糖、半乳糖等),可以与蛋白质、脂肪甚至核酸分子发生化学反应,与他们结合起来.其反应是不可逆的、连锁进行的.有开始的少数较小的糖化蛋白,再连接到其他蛋白质、脂质、...
长岭县17522115934: 高尔基复合体 - ?
秦莘及克: 高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、分类、与包装,然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外.1、蛋白质的糖基化N-连接的糖链合成起始于内质网,完成与高尔基体.在内质网形成的糖蛋白具有相似的糖链,由...
长岭县17522115934: 为什么western blot结果中,蛋白质检测分子量会与计算大小不同 - ?
秦莘及克: Western blot检测的结果与理论计算值有差异是非常正常的事情 Western blot检测最重要的意义在于目的蛋白在某细胞或组织中表达情况的定性.而目的蛋白检测的大小取决于目的蛋白在SDS-PAGE的结果,也就是说如果目的蛋白在SDS-PAGE上检测结果是偏大的,那么在Western blot转膜后也会是偏大的,这和目的蛋白的结构(糖基化修饰),,组成等等都有关系.所以只是一个相对的分子量的结果. 要精确检测目的蛋白的分子量结果需要做()检测
长岭县17522115934: 包涵体 - 什么是包涵体,怎样避免包涵体的产?什么是包涵体,怎样避免包涵体的 ?
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长岭县17522115934: 什么是糖基化 - ?
秦莘及克: 糖基化是在酶的控制下,蛋白质或脂质附加上糖类的过程.此过程发生于内质网.蛋白质经过糖基化作用之后,可形成糖蛋白.