单增李斯特菌生物膜制备方法
1、将-80℃冻存的菌株接种于固体BHI培养基，置于37℃培养18h进行活化。挑取单菌落于5mL液体BHI培养基中，37℃、200r/min培养过夜。次日，按1:100的比例转移至1L新鲜液体BHI培养基中继续培养至OD600为1.0。
2、2.2超滤浓缩法提取膜囊泡当细菌培养至OD600为1.0时，4℃、6000r/min离心20min收集上清液，经0.45μm或0.22μm滤器过滤，除去细胞碎片等杂质后转移至截留相对分子质量100kD的超滤浓缩管中，4℃、4000r/min离心20min。取浓缩液，经4℃、31174r/min离心3h后弃上清，用10mL的磷酸缓冲液悬浮沉淀，重复离心一次后，将沉淀重悬于1mL磷酸缓冲液中，经0.22μm滤器过滤后进行无菌检验，鉴定其无菌后于-80℃保存，即为提取的膜囊泡。将所提取的EGDe、EGDeΔprfA和EGDeΔprfA+pERL3-prfA*的膜囊泡分别表示为EGDe-MVs、ΔprfA-MVs和prfA*-MVs。
3、Optiprep密度梯度离心法提取膜囊泡Optiprep梯度离心液用DMEM分别配制成浓度为25%、30%、35%、40%和45%。吸取经过超滤浓缩法(同1.2.2)提取的1mL产物转移至Beckman离心管中，再依次加入2mL的45%、40%、35%、30%和25%Optiprep，于4℃、31174r/min进行超速离心15h。离心完毕后，小心收集30%-35%的组分于Beckman离心管中，并加入10mL磷酸缓冲液，再次进行超速离心。重复离心3次后弃上清，将沉淀重悬于1mL磷酸缓冲液中，经0.22μm的滤器过滤后进行无菌检验，鉴定其无菌后于-80℃保存，即为提取的膜囊泡。
4、BCA法测定膜囊泡的蛋白浓度并计算膜囊泡的产率MVs蛋白浓度的具体测定方法参见BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书。利用稀释平板涂布法统计OD600为1.0时的菌落数，以每1013个CFU获得的蛋白量(μg)为膜囊泡的产率。
5、负染电镜观察膜囊泡的形态将铜网浸泡在MVs样品中吸附大约20min后取出，用滤纸与铜网垂直接触以除去多余液体。随后将铜网浸泡在PTA染液中染色5min，取出后于阴凉处自然干燥2-3d，即可用于电镜观察。
6、对细菌生物被膜形成的影响细菌生物被膜的培养及检测参照冯飞飞等[10]的方法。将3株细菌的MVs稀释至同一浓度(0.2mg/mL)后，按照1:1的比例分别取100μL相应的MVs加入到含100μL菌液(同种菌株或者不同种菌株)的96孔板中。另设置2组不含MVs的参照：一组加入等量菌液，另一组加入等量的磷酸缓冲液。待上述操作完毕后，将96孔板置于37℃分别培养24、48和72h。培养相应时间后，酶标仪测定其OD600值，以检测其生长情况；随后弃去各孔培养基，所生成的生物被膜经蒸馏水洗涤，室温干燥后，用1%乙二酸铵结晶紫染色，并测定其OD595的光吸收值。所获得的试验数据使用Origin8和SPSS22进行分析处理。结晶紫染色后的生物被膜直接置于倒置显微镜下观察，拍照记录。
7、膜囊泡的溶血活性检测溶血活性的测定参考于新惠等[12]的方法。将来源于不同菌株的MVs稀释至同一浓度(0.2mg/mL)后，分别取一定量的MVs加入含1mL红细胞悬液的离心管中，阴性对照组加入等量的磷酸缓冲液，阳性对照组加入等量的无菌水；另取等量的MVs加入1mL红细胞悬液后再添加2mmol/LDTT。将以上离心管置于37℃孵育3h后，室温、2600r/min离心5min，吸取800μL上清于一次性比色皿中测定OD543的值，即为MVs的溶血活性值。
8、膜囊泡对棉铃虫幼虫体重、存活率和化蛹率以及幼虫发育时间的影响选取生理状态基本一致的4龄棉铃虫幼虫置于冰上麻醉2h待用[13]。将来源于不同菌株的MVs稀释至同一浓度(0.2mg/mL)后，吸取5μLLm-MVs自幼虫第一腹足下注入，对照组注入等量磷酸缓冲液，每组18条幼虫。注射完成后每隔24h称取幼虫体重，并统计存活率、化蛹率及幼虫发育时间(自购买之日起至末龄)，数据的计算方法为：化蛹率=蛹数/试虫总数×100%；存活率=存活数/试虫总数×100%。
芝麻酱会有李斯特菌吗
芝麻酱中是可能含有李斯特菌的。李斯特菌是一种能在特定环境下生存的细菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、空气、水和生物体等表面，甚至在一些食品中也能发现李斯特菌的存在，包括未烹饪的蔬菜、肉类、加工奶制品和即食食品等。由于芝麻酱在制作过程中可能会接触到含有李斯特菌的环境或工具，因此可能存在...
单核细胞增多性李斯特菌会在人类的细胞之间快速传递,使人患脑膜炎.原 ...
A、该菌通过抑制人类细胞中的Tuba蛋白的活性，使细胞膜变形并将细菌包起来而进入细胞，A正确；B、该菌使人类细胞更易变形，说明细胞膜具有一定流动性，B正确；C、InIC是该细菌合成的，而细菌是原核生物，没有内质网和高尔基体，C错误；D、由于该菌寄生在人体细胞中，抗体无法直接消灭该菌，所以主要依靠...
李斯特菌大概需要多少个体数量能让人体生病?
它能引起人、畜的李氏特菌病,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中,食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险,该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。关于在一系列不同生长条件下单核增生李斯特菌转录组(细胞中的全部mRNA转录体)的一项新的...
卤肉冬天常温放4个小时,会产生李斯特菌吗
卤肉在冬天常温下放置4个小时，可能会产生李斯特菌**。李斯特菌，又叫单核细胞增多性李斯特氏菌，是一种常见的食物污染病原体，在环境温度15℃-30℃时可以大量繁殖，同时它又是食源性危害较为严重的致病菌之一，可以引起人的脑膜炎、脓血症和心内膜炎等疾病。在卤肉的制作过程中，如果食材没有处理干净...
请问:水解细菌细胞壁用什么酶?
这些成分一般为疏水物质,能使细胞膜功能紊乱甚至使细胞膜破裂,最终导致微生物死亡。对苯甲酸、肉桂酸和苯甲醛等定量结构活性相关的研究中发现,由反相HPLC测的亲脂性参数与它们抗单核细胞增生李斯特菌性能有显著关系。Helander等测试香芹酚、麝香草酚、贡蒿萜酮和肉桂醛等对E.coliO157:H7的效果,他们指出麝香草酚和...
水碗里“滑溜溜”的东西是什么 生物膜这个坏东西了解一下
这些生物膜并非全然有害，有些研究认为，某些生物膜可能含有益生菌，对提高免疫力有所助益。但在家庭环境中，猫咪水碗更可能成为病菌的温床。猫咪口腔中的细菌、灰尘与水碗的结合，使得诸如李斯特菌、大肠杆菌等有害菌在此大量滋生，可能引发膀胱炎、尿道炎等疾病，甚至影响猫咪的饮水欲望。你是否曾注意到...
什么防腐剂最安全?
对羟基苯甲酸酯类也称尼泊金酯,其抑菌机理主要是使微生物细胞呼吸系统和电子传递酶系统的活动受阻,抑制了丝氨酸的吸收和三磷酸腺苷的产生,从而破坏微生物细胞膜的结构,起到防腐的作用。Ramos J L[4]等在对该类物质的定量结构活性的研究表明,由反相HPLC测的亲脂性参数与它们抗单核细胞增生李斯特菌性有显著关系。对...
家里长期保存食物和水,可以网购食品防腐剂自己加吗?安全吗?需要注意什 ...
我认为网购的防腐剂不安全，尤其是自己添加更是不安全了。防腐剂有很多种，化学成分的还有酸性成分的等，如果自己在家使用不当会影响我们的身体健康。
中药药粉怎么除霉菌
GMP车间如何除菌降菌及灭菌；十万级车间空气灭菌臭氧消毒机的选择 为了保证制药车间，药片的质量、GMP车间环境洁净度、无菌标准，制药原水的灭菌处理，中央水循环处理，作业车间应该对生产环境中的病原微生物进行控制与检测，检测项目包括李斯特菌，沙门氏菌，霉菌，悬浮物等病原体微生物，化验室应该按照一定...
铝钛箔做的保鲜膜安全吗?保鲜效果怎么样?
但对于铝钛箔而言，完全不用担心厌氧菌的增殖，可以让超高阻隔效率的优势发挥到最大。为什么呢？这就不得不提铝钛箔的另一个优点。2.2 铝和钛金属本身的超强抗菌功能 很多金属具有天然的抗菌性，铝就是其中之一，它对细菌生物膜的生长和定植有抑制作用，这在科学研究中已经得到了充分证实[3][4][5...
锻例岑连： 李斯特氏菌显色培养基用于分离和初步鉴别单增李斯特氏菌和其它李斯特菌.单增李斯特氏菌显色培养基使用方法:1.称取单增李斯特显色培养基干粉47.3g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,充分溶解,121...
新林区13883403993： 单增李斯特氏菌显色培养基 - ？
锻例岑连： 一般买了都有说明,贴一个环凯官网的资料,请叫我搬运工,单增李斯特氏菌显色培养基使用方法:1.称取单增李斯特显色培养基干粉47.3g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,充分溶解,121℃高压灭菌15min...
新林区13883403993： 单增李斯特氏菌显色培养基哪个品牌的质量好? - ？
锻例岑连： 我是药厂实验室的员工,这个培养基每天都要用到,牌子是广东环凯的,一直用这个品牌,质量很稳定,其实买过好几家的这种培养基了,经过比对,还是觉得广东环凯的好用
新林区13883403993： SN0184 - 93 - ？
锻例岑连： SN 0184-93 出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法 Method for the examination of Listeria monocytogenes in food for export 样品:冷冻样品,2-5℃解冻,不超过18h 若不能及时检验,应置于-15 ℃保存. 非冷冻易腐样品应尽可能及时检...
新林区13883403993： 单核细胞增生李斯特菌在显微镜下有哪些特征? ？
锻例岑连： 单核细胞增生李斯特菌为不分支的革兰阳性短小杆菌,菌体细胞大小为0. 5 pm xl ~2 ,呈球杆菌、杆菌、双杆菌或短链.在血清葡萄糖蛋白胨水中可形成黏多糖荚膜.脑脊液等标本直接标本涂片镜检时,因其两极着色,.有时成双排列,应与肺炎 链球菌相区别.由于本菌可呈多形性,部分菌株有一端膨大的趋势,常呈V字排列,有 时会被误认为是棒杆菌.在脱色过度时(尤其是陈旧培养物)也会被误认为是嗜血杆菌.
新林区13883403993： 单增李斯特菌对氯化钠的最大耐受度是多少 即加氯化钠的培养基与不加相比 菌数降低一个数量级？
锻例岑连： 单增李斯特菌在6.5% NaCl 肉汤中生长良好,,NaCl浓度在 0~2%之间 ,单增李斯特菌生长情况较好 .NaC1浓度 在 3% ~6%之间,单增李斯特菌数的对数呈直线下降趋势,到10%的时候还有生长,但是生长已经很弱了.
新林区13883403993： 什么是增菌培养???? - ？
锻例岑连： 增菌培养 取回的样品应在4℃下处理,存放和运送,如果是冷冻样品,则在检验前要保持冷冻状态.取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤(EB)的均质杯中进行均质,然后转入三角瓶中,30℃培养4h,加入...
新林区13883403993： 李斯特氏菌有哪些危害?怎样去预防?? - ？
锻例岑连： Lisiteshijunbing 李斯特氏菌病 Listeriosis 由单核细胞增生李斯特氏菌 (Listeria monocyto-enes)引起的一种散发性传染病.至少有37种哺乳类动物和17种鸟类可被感染.该菌至少可分为16个血清型或亚型.家畜以家兔较多发生.家禽发生...
新林区13883403993： 科学家在进行细胞膜化学成分的分析时,需制备较纯净的细胞膜.从真核细胞分离出纯的细胞膜较为困难,因为会有细胞内其他膜的混杂.(1)用于制备细胞膜... - ？
锻例岑连：[答案] (1)动物细胞没有细胞壁,不但省去了去除细胞壁的麻烦,而且无细胞壁的支持、保护,细胞易吸水涨破.制备细胞膜时选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料是因为哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和众多的细胞器,提取...
