如何用triton-X100 裂解细胞
1:单去污剂裂解液:1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX-100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后4℃保存.使用时,加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）.
（一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方：50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM PMSF、1 mM EDTA、1% Triton x-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS)
2:裂解细胞的步骤:
常规胰酶消化
将胰酶吸出
加入培养基将细胞吹打起来
将细胞收集到EP管中,离心 2000r/min,5min.
用PBS洗三次,离心同上,弃上清
加入细胞裂解液（视细胞的数量而定,一般每孔100～150ul）
冰上孵育5～10min,离心12000r/min,5min,收集上清.
3:triton－X100 对检测结果无影响的,个人意见,供参考
多少浓度的triton-100可以破细胞膜
Triton X-100是一种非离子型去垢剂分子式：C14H22O(C2H4O)n 用途：Triton X-100是一种比较温和的去垢剂（表面活性剂或称界面活性剂）,常作为添加剂使蛋白保持稳定,尤其是膜蛋白. 性质： 1.Triton X-100对细菌等微生物没有杀伤作用. 2.Triton X-100在紫外波段下有光吸收（lambda max = 275 nm and 283 nm in methanol）,因此,当缓冲液中存在Triton X-100时不能通过测定280nm光吸收来进行蛋白定量. 3.Triton X-100常与CHAPS等zwitterionic 去垢剂一起使用来纯化膜蛋白,使膜蛋白保持其天然构象. 4.Triton X-100可以提高真核细胞细胞膜的通透性,因此在Immunostaining时常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS. 5.Triton X-100非常稳定,密封避光 +2 to +8℃条件下可以长期保存. 6.Triton X-100是透明,略显粘稠,稍微发黄的液体. 7.Triton X-100的密度为1.07 g/ml,pH6.0-8.0（5%的溶液）. 8.Triton X-100可以高压灭菌. 9.用Triton X-100来裂解细胞时,0.1% Triton X-100就足够了,不过,达到0.5%时也没问题. 10.蛋白酶K在含1% Triton X-100的溶液中依然保持活性. 11.可以使用Amberlite hydrophobic XAD resins and Rezorian A161 cartridges 来去除Triton X-100 . 去垢剂(又称表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质,一般具有乳化、分散、和增溶作用,可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型,中性去垢剂在蛋白提取中应用的较多. 中性去垢剂又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用.一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类,如PEG200；多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌.中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白,不必先除去去垢剂.
1:单去污剂裂解液:1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX-100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。
（一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方：50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM PMSF、1 mM EDTA、1% Triton x-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS)
2:裂解细胞的步骤:
常规胰酶消化
将胰酶吸出
加入培养基将细胞吹打起来
将细胞收集到EP管中，离心 2000r/min，5min。
用PBS洗三次，离心同上，弃上清
加入细胞裂解液（视细胞的数量而定，一般每孔100～150ul）
冰上孵育5～10min，离心12000r/min，5min，收集上清。
3:triton－X100 对检测结果无影响的,个人意见,供参考
谁能介绍一下俄罗斯的孔雀石设计局
90年代以来，孔雀石设计局前后提出过“虎鱼”（Piranha）、“法螺”（Triton）等中、小型常规动力潜艇的设计方案，近期为进一步开拓海外常规动力潜艇市场、完善产品档次、吨位覆盖面，该局在“虎鱼”、“法螺”艇的基础上，又向外界展示了排水量从160吨到1000吨范围的全系列近岸小型常规潜艇设计方案，具体可...
雅典娜从何而来
“邻接玛科律埃及斯人的是欧塞埃斯人;他们和玛科律埃斯人中间阁着一条妥里通河(Triton),他们住在妥里托尼斯湖(Trionis)的岸边。……他们对雅典娜神每年举行一次祝祭,在祝祭的时候,他们的少女分成两队,相互用石头和木棒交战,据他们说这样做是遵照他们祖先的方式来崇敬单调的哪个我们称之为雅典娜的女神。”(希罗多德...
紫外吸收法与Folin-酚比色法测定蛋白质含量相比,有何缺点及优点
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。 （3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。 此法的缺点是： （1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差...
雅典娜是何许人也!
”(希罗多德《历史》) “邻接玛科律埃及斯人的是欧塞埃斯人;他们和玛科律埃斯人中间阁着一条妥里通河(Triton),他们住在妥里托尼斯湖(Trionis)的岸边。……他们对雅典娜神每年举行一次祝祭,在祝祭的时候,他们的少女分成两队,相互用石头和木棒交战,据他们说这样做是遵照他们祖先的方式来崇敬单调的那个我们称之为...
法螺的国语词典法螺的国语词典是什么
法螺的国语词典是：动物名。嵌线螺科法螺属。生活于海洋中的软体动物。壳壁很厚，表面有瘤状突起。分布于加勒比海、印度洋和太平洋。壳高可达四十公分。如：「每次大伙聚在一起，他就开始大吹法螺，吹嘘他去过多少地方。」词语翻译法语Charoniatritonis。法螺的国语词典是：动物名。嵌线螺科法螺属。生活...
请问这张图片是什么动物?有何药用价值?
红瘰疣螈（Tylototriton shanjing），在云南西部分布较广，数量也较多。药用：补肺益肾，纳气平喘，助阳益精。
松养尼扎： 1:单去污剂裂解液:1mol/L Tris·HCl(pH8.0) 2.5ml NaCl 0.438g TritonX-100 0.5ml 蒸馏水至 50ml 混匀后4℃保存.使用时,加入PMSF至终浓度为100μg/ml(0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl). (一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解...
大兴安岭地区18698381807： 请教PBS和Triton x - 100 - ？
松养尼扎： Triton X-100是一种非离子型去垢剂分子式:C14H22O(C2H4O)n 用途:Triton X-100是一种比较温和的去垢剂(表面活性剂或称界面活性剂),常作为添加剂使蛋白保持稳定,尤其是膜蛋白. 性质: 1. Triton X-100对细菌等微生物没有杀伤作用....
大兴安岭地区18698381807： TritonX - 100裂解细胞膜的浓度是多少? - ？
松养尼扎： 网上看到DNA提取用的TritonX-100是5%的(维基百科),所以不想破坏核膜的话得浓度再低点.免疫组化一般用0.5%够了,但免疫组化只是令抗体能够通过细胞膜就行,说到要裂解你还得再研究一下赫赫.
大兴安岭地区18698381807： 增加抗体对细胞膜的通透性是什么意思 - ？
松养尼扎： 这是Triton-X100的作用原理,就是通过Triton-X100裂解细胞后,会使细胞膜的选择透过性降低,变得更容易接受外源大分子,比如抗体. 当然细胞的生命活动也会受到影响,甚至失去活性.
大兴安岭地区18698381807： 用0.1%triton x - 100处理细胞,有什么作用 - ？
松养尼扎： 用0.1%triton x 100处理细胞可以除去细胞的质膜和内膜系统.在进行细胞骨架染色时,可以使得荧光染料能够更容易地透过细胞膜与F actin特异性结合.以便于对细胞骨架显示和微丝的观察.
大兴安岭地区18698381807： 为何用triton - x100处理材料细胞骨架视察实验 - ？
松养尼扎： Triton X⑴00可将细胞质膜中和细胞质中的全部脂质和部份蛋白质被溶解抽提,但细胞骨架蛋白质不受破坏而被保存.
大兴安岭地区18698381807： 提总蛋白用的裂解液,同时不加NP - 40和TritonX - 100,可以么? - ？
松养尼扎： 不可以,Triton X-100的性质和NP-40很相似,没有必要加了1%NP-40还加TrionX-100,这些非离子型表面活性剂的作用到底不如SDS这些离子型的
大兴安岭地区18698381807： 在病毒提取过程中,加入triton - x100,巯基乙醇,和EDTA作用是什么? - ？
松养尼扎： Triton X100一般在阻断缓冲液中或稀释缓冲液中使用,由于存在疏水结构域,整合蛋白和膜的结合非常紧密,用此试剂可才能从膜上洗涤下来. 巯基乙醇的作用可能有催化蛋白质完全变性和解聚,解离成亚基或单个肽链. EDTA能与Al3+、Fe3+、Ti4+、Mn2+、Cu2+、Pb2+、Zn2+、Ni2+、Co2+等离定量作用. 具体对病毒提取有什么作用~我也不是很清楚~你自已再想想吧!我只知道这些药品的理论.
大兴安岭地区18698381807： 您有做过用triton114提取膜蛋白吗 - ？
松养尼扎： 用Triton X100溶解膜蛋白之后怎样再除去Triton是比较困难的低CMC值的去垢剂透析效果很差,因为去垢剂胶团缓慢透过或者干脆就不能透过透析膜.由于一些原因,超滤方法可能效率也不高.除了通透性的问题,在超滤膜的附近蛋白浓度变得很高,这容易导致大范围聚集.在柱上进行缓冲液更换通常较缓和并且高效.可以通过脱盐柱,离子交换柱或者疏水柱完成膜蛋白中Triton X100的去除
大兴安岭地区18698381807： 科学家们是怎样提取细胞中的那些微量的物质的? - ？
松养尼扎： 你说得太宽泛了.核酸:基因组DNA有现成试剂盒出售,TAKARA公司的两百块钱左右一盒,照着说明书做就行了.原理是用碱裂解细胞后用特异性硅胶柱疏水结合富集DNA.测量用比色法就行RNA有TRIZOL试剂卖(Invitrogen公司),1000多...
