关于这组免疫组化
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
还可以表达为:p16基肿瘤抑制基p16基发突变缺失导致细胞异增殖终形肿瘤该病p16基阳性提示系恶性肿瘤 p53基抑癌基物体内种抑制细胞转变癌细胞基功能降癌症能发 Ki-67作细胞增殖标记物病理报告指数高低与许肿瘤化程度、浸润、转移及预密切相关数值越高恶性程度越高 CerbB-2基种原癌基该病阴性需用赫赛汀 TOP2A基阳性提示细胞增殖S期晚期G2/M期表达增加提示蒽环类药物化疗效(表阿霉素)制定化疗案参考用 ER/PR别雌激素受体孕激素受体提示否需要内泌治疗该病应该做内泌治疗 CK5∕6种基底细胞角蛋白鳞状皮发层细胞、肌皮细胞、间皮细胞阳性腺皮细胞阴性 p40腺癌阳性率
基本原理:抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。
分类:
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。
这些常用免疫组织化学方法的原理如下:
1. 免疫荧光细胞化学技术
将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶细胞化学技术
是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.
3. 免疫胶体金技术
就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究.
作用:
标本
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
抗体
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。
参考资料
百度百科:https://baike.baidu.com/item/%E5%85%8D%E7%96%AB%E7%BB%84%E5%8C%96/10004329?fr=aladdin
免疫组化的概念
是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
[编辑本段]●免疫组化的分类
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
[编辑本段]●免疫组化实验所用的组织和细胞标本
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
[编辑本段]●免疫组化实验所用的抗体
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
●免疫组化常用的染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。
[编辑本段]●免疫组化操作步骤
一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :
1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行
2. 缓冲液洗 3min/2 次。
3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。
4. 缓冲液洗 5min/2 次。
5. 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)
6. 缓冲液洗 5min/2 次。
7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)
8. 缓冲液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer( 增强子 ) , 在室温下孵育 20 分钟。
10 .缓冲液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer( 酶标二抗 ) ,在室温下孵育 30 分钟。
(注: HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)
12 .缓冲液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate ( 或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ) , 混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。)
14 .自来水充分冲洗 , 复染,脱水 , 透明 , 封片。
二.免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤 :
( 1 )、石蜡切片脱蜡至水。
( 2 )、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。
( 3 )、蒸馏水冲洗, PBS 浸泡 5 分钟 x2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。
( 4 )、 5-10% 正常山羊血清( PBS 稀释)封闭,室温孵育 10 分钟,倾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。
( 5 )、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。
( 6 )、滴加适量 生物素标记二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。
( 7 )、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。
( 8 )、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。
( 9 )、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。
( 10 )、显色剂显色 3-15 分钟( DAB 或 NBT/BCIP )
( 11 )、自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。
三. 冰冻切片免疫组化染色步骤:
冰冻切片 4-8um ,室温放置 30 分钟后,入 4 ℃丙酮固定 10分钟,PBS洗,5分钟x3,用过氧化氢孵育5-10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。
[编辑本段]●免疫组化实验结果的判定和分析
从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与,则事先申明。
[编辑本段]●免疫组化在临床工作的意义
近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。
免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:
(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断;
(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位;
(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型;
(4)软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的;
(5)发现微小转移灶,有助于临床治疗方案的确定,包括手术范围的确定。
(6)为临床提供治疗方案的选择。
其他的指标是用于鉴别诊断的。
从免疫组化及浸润性生长像是脂肪肉瘤。
免疫组化p16.ki67是什么意思
免疫组化P16和Ki67是针对宫颈活检来做的免疫组化项目,做这两项免疫组化的目的是为了区别低级别鳞状上皮内病变和高级别鳞状上皮内病变。如果P16和Ki67阳性都超过鳞状上皮2/3层,那么就是高级别病变,若是两者只是阳性不超过1/3就是低级别,要是都是基底阳性就是正常情况。免疫组化是利用抗原与特异...
为什么要做免疫组化 探究免疫组化在医学领域的重要性?
对组织或细胞中的特定蛋白进行定位和鉴定。在医学领域中,免疫组化技术广泛应用于疾病的诊断和治疗。本文将探究免疫组化在医学领域中的重要性。免疫组化技术可以用于药物的研发和评价。药物研发人员可以利用免疫组化技术检测药物对特定蛋白的作用,从而确定药物的作用机制和疗效。
什么叫免疫组化检查
免疫组化检查是一种利用免疫学原理检测细胞抗原的方法。以下是关于免疫组化检查的详细解释:一、定义与原理 免疫组化检查,全称为免疫组织化学检查,是一种基于抗原与抗体特异性结合的原理,通过在组织切片上标记特定的抗体来检测相应抗原的表达情况。这种方法广泛应用于病理学诊断、肿瘤学等领域。二、检测...
什么叫免疫组化检测
如操作复杂、成本较高、对样本处理要求较高等。因此,在实际应用中需要结合具体情况进行综合考虑。总结来说,免疫组化检测是一种重要的体外实验技术,基于抗原与抗体的特异性结合原理,广泛应用于病理学诊断和医学研究。它在疾病诊断、生物科学研究等领域发挥着重要作用,但也存在一定的局限性。
免疫组化(IHC),免疫细胞(ICC),以及免疫荧光(IF)区别
在实验研究中,免疫组化、免疫细胞化学和免疫荧光技术都是基于抗原抗体反应的关键原理,但各自有独特的应用和特点。免疫组化(IHC),利用化学反应使抗体显色,适用于组织样本,如石蜡切片和冷冻切片,常用于定位和定量蛋白质。免疫细胞化学(ICC)则针对分离或培养的细胞样本,通过荧光或化学标记来研究细胞...
免疫组化NSE、syn、CEA、Ki67.是什么意思
NSE,中文译为神经特异性烯醇化酶,Syn是突触素,CEA是癌胚抗原,KI67是增殖指数。这四个免疫组化的组合结果来看,可以推断肿瘤发生的部位是在肠道,CEA旨在与大肠癌进行鉴别。若为类癌CEA应为(-),如果是符合神经内分泌肿瘤(类癌),那么NSE和Syn都必然是(+)。ki67显示增殖指数,较高的话一般提示...
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免疫组化指标主要包括多种抗体标志物,用于辅助诊断肿瘤和其他疾病。常见的有:一、肿瘤相关指标:如细胞角蛋白、抑癌基因蛋白等。这些指标有助于判断肿瘤的来源、分化程度及恶性程度等。二、免疫相关指标:包括T细胞相关指标、免疫相关细胞因子以及免疫球蛋白等。这些指标反映了机体的免疫功能状态。三、细胞...
免疫组化p16.ki67是什么意思?
做这两项免疫组化的目的是为了区别低级别鳞状上皮内病变和高级别鳞状上皮内病变。区分就得看P16和Ki67的阳性程度,判定方法是这两者阳性占宫颈上皮的多少,如果P16和Ki67阳性都超过鳞状上皮2\/3层,那么就是高级别病变,若是两者只是阳性不超过1\/3就是低级别,要是都是基底阳性就是正常的。
免疫组化cd34是什么意思
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对其进行定位、定性及相对定量的研究。cd34分子是高度糖基化的i型跨膜糖蛋白,选择性地表达于人类及其他哺乳动物造血干\/祖细胞表面,并随细胞的成熟逐渐减弱至...
病理技术免疫组化
病理技术中的免疫组化是一种科学手段,它运用了免疫学的核心原理,即抗原与抗体之间特有的结合反应。这个过程依赖于抗原与标记抗体的结合,通过化学反应使这些标记抗体的显色剂如荧光素、酶、金属离子或同位素呈现颜色。其目标是揭示组织细胞内部的抗原,包括多肽和蛋白质,进行精确的定位、定性和定量分析。...