RT-PCR的原理是什么？有何用途？
原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。
首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。
作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。
扩展资料
反转录酶的选择
1、Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。
2、禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。
3、Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。
4、MMLV反转录酶的RNase H突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。
参考资料：百度百科——RT -PCR
PCR技术的原理是什么?
PCR原理：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应...
PCR技术的原理是什么?
变性：加热使模板DNA在高温下（94℃左右）双链间的氢键断裂而形成两条单链。退火；使溶液温度降至50~60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP），按5'一3’方向复制出...
什么是PCR检测?他的原理是什么?需要什么材料?
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物...
pcr原理是什么
PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计...
PCR的原理是什么 的原理是什么,它有什么用途
PCR全称多聚酶链式反应，原理是DNA的体外扩增。具体来说：在EP管里加入DNA、合成原料（dNTP、引物）、耐热的DNA聚合酶（taq）后，放入PCR仪，PCR仪会利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，进而达到基因复制的目的。用途：1、核酸的基础研究：基因组克隆 2、不对称PCR制备单链DNA用于...
PCR的原理是什么?
PCR的基本原理与DNA的体内复制相类似，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火和延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经高温（95℃左右）加热一定时间后，使其解离成单链，以便它与引物结合；②模板DNA与引物的退火（复性）：将温度降至55℃左右时，引物与模板DNA...
PCR技术的基本原理是什么?
PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单...
简述pcr基本原理
简述pcr基本原理，详细介绍如下：一、简述：1、PCR聚合酶链式反应是一种快速，敏感，特异性强的DNA复制技术。其基本原理是通过体外模拟DNA复制过程，通过核酸酶解引物延伸和DNA聚合作用，实现无需纯化DNA单链即可扩增目标DNA段。2、通过PCR反应的信号产生，在杂交技术及全自动测序仪中得到了广泛应用，为现代...
PCR技术的原理是什么
详情请查看视频回答
rt-pcr原理
rt-pcr原理如下：只要是利用相关技术提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合...
余罡司巴：[答案] RT-PCR有两种解释:\x0d1,最常用的理RT 是'逆转录'(reverse transcription)的缩写\x0d2,现在也有人这么用:RT是'实时'(real time)的缩写\x0d1,先说逆转录PCR:\x0d这项技术使用的'逆转录酶'来自逆转录病毒,是一种能按照碱基互补配...
湖州市13338635376： 我想知道RT - PCR的原理 - ？
余罡司巴：[答案] RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录...
湖州市13338635376： 什么是RT - PCR? - ？
余罡司巴： RT-PCR简介 RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段.RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达...
湖州市13338635376： RT - PCR原理及操作 - ？
余罡司巴： 原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条...
湖州市13338635376： 什么是RT - PCR、Real - time PCR及其应用 - ？
余罡司巴： RT-PCR是反转录PCR,是将提取的mRNA逆转录为cDNA后进行PCR的实验.可定性或半定量mRNA的量. Real time PCR是实时定量PCR,可以精确测定起始模板的量.用于定量测定.
湖州市13338635376： rtPCR的作用 - ？
余罡司巴： 反转录酶聚合酶链式反应(RTPCR)用于以高精度、高效率的大量复制样品DNA.主要用于与分子生物,医学方面的DNA鉴定.
湖州市13338635376： RT - PCR的原理是什么? ？
余罡司巴： RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录,要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质.常用的反转录酶有两种,即鸟类成髓细胞性白细胞病毒(avian myeloblastosis virus,AMV)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(moloney murine leukemia virus,MMLV)反转录酶.
湖州市13338635376： Alphascreen and RT - PCR是什么？
余罡司巴： alphascreen是一种检测生物分子间相互作用的技术,通过微珠的连接作用,将相互作用级联放大产生信号.RT-PCR一般指反转录PCR
湖州市13338635376： PCR技术有哪些用途 - ？
余罡司巴： 1、核酸的基础研究:基因组克隆 2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序 3、反向PCR测定未知DNA区域 4、反转录PCR(RT-PCR)用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA 5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控 6、cDNA末端快速扩增技术 7、检测基因的表达 8、医学应用:检测细菌、病毒类疾病;诊断遗传疾病;诊断肿瘤;应用于法医物证学
湖州市13338635376： RT - PCR与时时PCR的原理及引物有什么区别? - ？
余罡司巴：[答案] RT-PCR和一般的PCR相比原理上没有太多的区别,无非就是在反转时候RNA的定量,不同模板的设定.对引物没有特别的要求,能特异代表目的基因就行. real-time PCR根据原理的不同,引物选择也不同.通常用的是SYBR Green的方法,这种方法引...
