什么是细胞外泌体？

细胞外泌体是什么？~

干细胞外泌体作为组织再生的工具出现了,其优点在于:它克服了传统干细胞疗法的局限性和风险性，并可设定明显的靶向性，为组织修复与再生开辟了新视角，同时在美容抗衰方面掀起了一股狂潮。外泌体是直径为40～100nm,密度为1.10～1.18g/mL的双层脂质结构的小囊泡,起初它被认为是细胞代谢的副产物，但近年的研究发现，外泌体在细胞通信方面发挥作用,是细胞旁分泌的介质，具有重要的细胞间调节功能。外泌体可以在细胞之间转移DNA、RNA或蛋白质，从而影响受体细胞的功能。外泌体美容方面应用机理1、再生鲜活细胞干细胞外泌体能够迁移至受损区域，激活皮肤干细胞，促进皮肤细胞新生。2、修复受损细胞调节修复损伤的各层皮肤细胞。重新再生健康细胞修复受损的各层皮肤细胞，干细胞外泌体的复合因子可在皮肤组织中长期储存，通过人体自身皮肤微环境调节发挥功效，属于生理性修复，作用更为安全，有效。

外泌体——是一类有细胞释放的细胞外囊泡。外泌体的特点见正文。

细胞外囊泡——简称EV，是由细胞释放的各种具有膜结构的囊泡结构统称，这些囊泡的直径可以从30、40nm到8、9um。细胞外囊泡有不同的亚群，而目前研究最火热的是外泌体这个亚群。

然而由于目前很难纯化到非常纯的外泌体亚群，人们纯化到的通常是直径小于200nm的囊泡，因此越来越多的人开始称之为sEV（即 small extracellular vesicle，小细胞外囊泡）。为了严谨，所以今天我们也以细胞外囊泡来称呼这些膜泡结构。本文中没有特殊说明的情况下，细胞外囊泡主要指外泌体和微囊泡。

今天主要介绍内容包括细胞外囊泡的研究意义、细胞外囊泡的分类、细胞外囊泡含有的成分、细胞培养上清的制备、细胞外囊泡的保存、细胞外囊泡的鉴定实验要求。所有内容都参考目前已发表的综述，并非hzangs杜撰。所以请新朋友们放心学习。

细胞外囊泡的研究意义
目前，细胞外囊泡的功能还没有完全阐明。已有的报道认为它们能够调节宿主-病原体的相互作用，参与传染性和炎性疾、神经疾病和癌症等很多种疾病的病理过程，同时在正常的生理过程中也发挥着介导细胞间通讯的重要功能，已有文章报道细胞外囊泡在发育中也发挥着重要作用。细胞外囊泡在临床医学中也有十分光明的应用前景，主要是因为它们含有丰富的生物标志物，可用于监测临床状态，治疗反应，疾病进展等，同时由于它们具有递送生物分子的功能，因此它们还有发展成临床药物递送载体的潜力。

细胞外囊泡的分类
细胞外囊泡—这个词是由国际细胞外囊泡学会（ISEV）创造的术语，根据细胞外囊泡的生物合成或释放途径可以对囊泡进行分类：外泌体（exosomes）直径为30-150nm，起源于内吞途径，其密度约为1.11-1.19g mL-1；微粒/微囊泡（microparticles/microvesicles）直接从质膜释放，直径约100-1000nm；凋亡小体（apoptotic body/bleb）直径约为50nm-2μm，由细胞凋亡产生；肿瘤小泡（large oncosomes）直径约1-10μm，由肿瘤细胞释放产生；以及其他各种EV亚群。由于不同EV亚群的大小以及它们的所包含的生物分子存在差异，因此现在已经有几个小组开始表征EV亚群的组成。最近的论文声称，基于一般表面蛋白质组学分析或个别EV群体的转录谱，对细胞外囊泡进行了成功的亚群分类。目前可以通过差速离心、过滤、免疫亲和、层析、流式细胞分选、密度梯度离心选取不同密度区域等多种手段大致分离不同的细胞外囊泡亚群，但是这些方法都不能完全纯化到特定的亚群，分离到的通常是富集了某一个亚群同时带有其他细胞外囊泡亚群。

细胞外囊泡含有的成分
细胞外囊泡的组成成分并不是随机的，每一个细胞外囊泡都会携带特定的分子信息。 实际上，这些纳米尺寸的细胞外囊泡能够携带蛋白质，脂质，核酸和糖等生物活性分子在细胞间传递信号，并且其包装的独特分子构成决定了要传递给受体细胞的细胞外信号的类型。有一个复杂的分选系统来决定那些分子能够进入细胞外囊泡。

细胞培养上清的制备
目前有两个策略来制备细胞培养上清用于提取细胞外囊泡。使用去除细胞外囊泡的胎牛血清（FBS）培养基培养细胞和使用不含FBS的培养基培养细胞（血清饥饿细胞）。但是目前一些高水平的文章报道使用的方法通常是前者。另外，有些文章开始关注去除细胞外囊泡的胎牛血清中游离RNA对实验结果的影响，但是目前并没有形成共识。如果需要先储存培养上清，一定量后再用于细胞外囊泡分离，那需要预先去除体系中的死细胞和细胞碎片。

细胞外囊泡的保存
Lőrincz等人曾对中性粒细胞来源的细胞外囊泡做了不同条件的储存，之后再去分析这些囊泡的特性，他们发现虽然细胞外囊泡样品中囊泡数量和形态没有明显变化，但即使是储存在-20或-80摄氏度情况下的细胞外囊泡也存在磷酯酰丝氨酸外翻明显增多的情况；但他们同时也发现，尿液来源的细胞外囊泡并没有这些变化。Kalra等人分离了来自结直肠癌细胞的细胞外囊泡，不同条件保存一定时间后进行PKH67染色跟踪细胞外囊泡的摄取，分析发现这些囊泡依旧可以被细胞摄取。就目前的情况，学者们并未就储存条件对细胞外囊泡是否有影响达成共识。因此建议大家实验时分离细胞外囊泡后尽快用于实验，尽量减少储存过程。

细胞外囊泡的鉴定及实验要求
根据国际细胞外囊泡协会于2014年发表的一个指导手册（MISEV），鉴定外泌体首先需要通过WB来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中，通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征，通过NTA等手段来分析样品中细胞外囊泡的群体特征（粒子浓度、直径分布等）。

今天就先介绍到这里。细胞外囊泡领域作为生物学研究中的一个新兴领域越来越受到学者和生物公司的关注，也有越来越多的研究报道出现。但是我们也要清楚的认识到该领域的研究技术依旧不完善，对细胞外囊泡的认识依旧不充分，细胞外囊泡研究依旧处于一个起始阶段，要走的路还很长。

外泌体是细胞分泌的一种微小膜泡，里面含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，可以用于基因治疗，也可以用于癌症的诊断和治疗。
1.基因治疗：在基因治疗中，递送遗传物质是重要的环节，而外泌体膜泡具有运输和传递的功能，通过外泌体将基因载体递封装、传送，一般不会伤害到基因物质。
2.癌症的诊断和治疗：外泌体存在于人的体液中，很多细胞都可以分泌出外泌体。
不管是正常细胞，还是有病理状态的细胞，而这些被分泌出的外泌体，具有源细胞的生理功能或病理改变，通过对外泌体的检测，可以清楚的了解源细胞的情况。如果外泌体中含有大量的特异性miRNA，就可以诊断分泌这个外泌体的源细胞是属于肿瘤细胞。

外泌体是一类源于内体的细胞外囊泡，通常直径为30-150纳米，是最小的细胞外囊泡类型
[1] 、由脂质双层包裹的外泌体被释放到细胞外环境中，含有来自原始细胞的复杂内容，包括蛋白质、脂质、mRNA、miRNA和DNA。
[2] 、外泌体的定义是它们是如何形成的--通过多泡体的融合和外渗进入细胞外空间。
多泡体是内细胞途径中独特的细胞器，作为早期和晚期内体之间的中介发挥作用。
[3]、多泡体的主要功能是将将被回收到其他地方的成分与那些将被溶酶体降解的成分分开。[4]、积聚在多泡体中的囊泡在细胞质内时被归类为腔内囊泡--在从细胞中释放时被归类为外泌体。

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新都区15761904401： 外泌体是一种由肿瘤细胞主动分泌至胞外的囊状具膜小泡,这些外泌体能与肿瘤细胞膜融合并促进肿瘤的侵袭和扩散,帮助肿瘤细胞逃避机体免疫系统识别.... - ？
仝骅复方：[选项] A. 外泌体与肿瘤细胞膜能够融合依赖于膜的功能特点 B. 外泌体分泌至胞外的过程不需要载体,但需要消耗能量 C. 形成外泌体的肿瘤细胞膜表面糖蛋白较正常体细胞明显增多 D. 不对称镶嵌分布的蛋白质分子构成了外泌体膜的基本骨架

新都区15761904401： 三种细胞外液关系图 - ？
仝骅复方： A、由图可知,a是淋巴,b是血浆,c是组织液,A错误; B、组织液、淋巴和血浆三种细胞外液中,血浆(液体b)的蛋白质含量最高,B错误; C、细胞1是淋巴细胞,C错误; D、细胞3是组织细胞,其种类最多,D正确. 故选:D.

新都区15761904401： 细胞内液与外液是什么意思 - ？
仝骅复方： 细胞外液:人体内,存在于细胞外的体液叫做细胞外液.主要包括:组织液(组织间隙液的简称)、血浆(血液的液体部分)和淋巴、脑脊液等.占体液总量的1/3.人体内的细胞外液,构成了体内细胞生活的液体环境,这个液体环境叫做人体的内环境. 细胞内液:人体内,存在于细胞内,其化学组成和含量直接影响细胞代谢与生理功能的体液,叫细胞内液.约占成人体内液体2/3(约占体重的40%).由于人体的细胞不能直接和外界环境接触,细胞直接接触的环境是细胞外液,即细胞内液通过细胞膜与细胞外液相互交流.细胞外液主要有组织液、血浆(非血液)、淋巴、脑脊液.

新都区15761904401： 细胞外的液体就是细胞外液吗? 辅导书上说汗液,尿液等等不属于细胞外液.为什么? - ？
仝骅复方： 细胞外液包括组织液、淋巴液以及血浆.不是所有的细胞外的液体都是组织液

新都区15761904401： 如何用癌细胞的细胞分泌外液中提取外泌体 - ？
仝骅复方： 如何用癌细胞的细胞分泌外液中提取外泌体 小胶质细胞(microglia)是神经胶质细胞的一种,相当于脑和脊髓中的巨噬细胞,是中枢神经系统(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防线.小胶质细胞大约占大脑中的神经胶质细胞的20%.小胶质细胞不停地清除着中枢神经系统中的损坏的神经,斑块及感染性物质.无数临床上和神经病理学研究表明激活的小胶质细胞在神经退化类疾病的发病机理中起到十分重要的作用,如帕金森病,多发性硬化和阿兹海默症等.但是过多激活或失控的小胶质细胞会引起神经毒性.他们是促炎因子和氧化应激的重要来源,如肿瘤坏死因子(TNF),一氧化氮,白介素等有神经毒性的物质

新都区15761904401： 下列液体属于细胞外液的是( ) ①血液②淋巴液③泪液④汗液⑤尿液⑥肠液⑦体液⑧组织液⑨体液⑩血浆 - ？
仝骅复方： 细胞外液包括血浆 淋巴 组织液 1 血液不是和血浆一个概念 血液包括血浆和血细胞 所以血液不是细胞外液 2按照定义完全正确 3泪液是外分泌液 属于外环境(细胞内外液是内环境)所以明显不是 4汗液 不是 理由同3 5尿液 不是 理由同3 6长夜 不是 属于外环境·····理由同上 7体液 体液包括细胞内液和细胞外液 所以不是 8组织液 是的 参照定义 9体液 汗 和7一样 10血浆 是的 不解释

新都区15761904401： 体液是否等于细胞外液 - ？
仝骅复方： 体液分布在细胞内外,其总量的1/3为细胞外液(约占体重的20%),2/3为细胞内液(约占体重的30%~40%).细胞外液又分两部分,流动于血管与淋巴管中的血浆和淋巴液,占体重的4.5%~5%,组织间液约占体重的15%.细胞外液还包含着一部分通透细胞的液体,即胃肠道分泌液、脑脊液,以及胸膜、腹膜、滑液囊等处的液体.

新都区15761904401： 什么是内分泌?什么是外分泌? - ？
仝骅复方： 人体的内分泌腺有甲状腺、肾上腺、垂体、胰岛等.内分泌腺无排泄管,腺细胞排列缺乏极性,多聚集成团块状或索状.内分泌腺分泌的分泌物称激素.其分泌物直接进入细胞周围的血管和淋巴,由血液和淋巴输送到各组织或器官中.内分泌腺与内分泌组织共同组成内分泌系统,通过体液调节方式,对机体的各方面功能起着重要的调节作用. 外分泌腺有唾液腺、汗腺、皮脂腺、肝脏、胰腺等(胰腺分为内分泌部和外分泌部,胰的大部分属于外分泌部,但是胰岛属于内分泌部).外分泌腺有排泄管,称腺导管,其分泌物通过腺导管输送到相应的组织或器官发挥其调节作用(一般为排泄作用).

新都区15761904401： 何谓人体细胞外液?？
仝骅复方： 淋巴 血浆 组织