跪求 土壤微生物的测定：涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤（详细）

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1. 土壤样品采集
采集一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--
2cm，以无菌铲采土充分混匀后用无菌塑料袋分装。

2. 培养基的制备与平板制作
牛肉膏蛋白胨、高氏1号和马铃薯蔗糖琼脂固体培
养基培养基的溶解与平板制作
3、平板的制作
每组准备三套无菌培养皿，在皿底注明稀释液浓度。
融化锥形瓶中的培养基，放在45-50℃ 恒温水浴锅中备用
倒入45-50℃融化的培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上顺时针、逆时针轻轻转动，混匀皿中物质。培养基冷凝后即成平板。
4、制备稀释液（无菌操作）
(1)制备土壤悬液：
称取土样10g，迅速倒入90mL无菌水三角瓶中，振荡5~10min，使土样充分打散，即成为10-1的土壤悬液。

(2)稀释：
用1mL无菌移液器吸取10-1的土壤悬液1.0mL，放入9.0mL无菌水中即为10-2稀释液，如此重复，可依次制成10-2~10-8的稀释液。注意：操作时每一个稀释度换用一个移液管，以减少稀释中的误差。
5.培养
将接种好的细菌、放线菌、霉菌平板倒置，即皿盖朝下放置，于28~30℃中恒温培养，细菌
培养1~2d，放线菌培养5~7d，霉菌培养3~5d。观察生长的菌落并计数。

高中选修课本有啊 稀释涂布平板法

涂布平板法实验器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g
　　蛋白胨 1g
　　氯化钠 0.5g
　　琼脂 2g
　　自来水 100mL
　　pH 7.0～7.2 　　灭菌 1.05kg/cm2，22min
　　配制具体步骤
　　1．称量
　　按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
　　2．溶化
　　在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
　　3．调pH
　　在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
　　对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
　　4．过滤
　　趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。很多都是不需要过滤的。
　　5．分装
　　按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。
　　分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
　　(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
　　(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
　　(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
　　6．加塞
　　培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。
　　7．包扎
　　加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
　　8．灭菌
　　将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
　　9．搁置斜面
　　将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
　　10．无菌检查
　　将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。

　　1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。
　　2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）
　　3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。
　　四、实验方法
　　1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。
　　图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养
　　用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
　　2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
　　（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
　　（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

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枝江市13127417022： 跪求 土壤微生物的测定:涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤(详细) - ？
仇郑鼻炎： 涂布平板法 实验器材牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g自来水 100mLpH 7.0~7.2灭菌 1.05kg/cm2,22min配制具体步骤1.称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放...

枝江市13127417022： 土壤微生物的测定:涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤(详细)土壤微生物的测定:涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤(详细)... - ？
仇郑鼻炎：[答案] 涂布平板法实验器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g自来水 100mLpH 7.0~7.2 灭菌 1.05kg/cm2,22min配制具体步骤1.称量按培养基配方比...

枝江市13127417022： 采用涂布法测土壤中的微生物应该怎么选择取样 - ？
仇郑鼻炎： 操作步骤: 1,熔化培养基,倒平板 加热熔化,冷却至55-60℃(不烫手),倒平板(15-20 ml/个平板).每种培养基倒6个平板., 2,土壤菌悬液的制备 称取1.0g土壤,放入100ml无菌水三角瓶中,振荡20min,充分混匀,分散细胞. ,3,系列稀释 4,涂布 稀释度选择:真菌、放线菌10-3,10-4,10-5;细菌10-4,10-5,10-6, 5,培养 细菌37℃培养2-3d,放线菌28℃培养7d,真菌28℃培养2-3d. 6,计数,保存细菌单菌落 注意无菌操作

枝江市13127417022： 若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物,其正确操作步骤是() ①土壤取样; ②称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中,制备10 - 2土壤稀... - ？
仇郑鼻炎：[选项] A. ①②③④ B. ①③②④ C. ①②④③ D. ①④②③

枝江市13127417022： 如何测定土壤中特定细菌的数量? - ？
仇郑鼻炎： 直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方法.测量土壤中微生物,一般采用平板计数法,因为直接计数法只能依靠肉眼在显微镜下观察,误差较大.1、采集特定地区的土壤作为待测样品.2、要将待测样品配制成均匀的系列稀...

枝江市13127417022： 用稀释涂布平板法测定1g土壤样品中的细菌总数,每个平板接种0.1ml 在对应稀释倍数为10 - 4的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是 - ？
仇郑鼻炎：[选项] A. 涂布了3个平板,统计的菌落总数是36,记录36 B. 涂布了3个平板,统计的菌落数分别是2、14和16,取平均值11 C. 涂布了3个平板,统计的菌落数分别是15、13和17,取平均值14 D. 涂布了3个平板,统计的菌落数分别是15、13和17 则每克土壤中含细菌总数为1.5*106个

枝江市13127417022： 18、用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是( ) - ？
仇郑鼻炎：[选项] A. 涂布了一个平板,统计的菌落数是230 B. 涂布了两个平板,统计的菌落数是215和260,取平均值238 C. 涂布了三个平板,统计的菌落数分别是21、212和256,取平均值163 D. 涂布了三个平板,统计的菌落数分别是210、240和250,取平均值233

枝江市13127417022： 微生物分离方法 - ？
仇郑鼻炎： 微生物分离法是获得微生物纯培养物的一种分离方法.通过这个方法可实现一种微生物的培养,或获得一个细胞的后代.其具体方法有: 1、稀释倒平皿法.将待分离的材料作一系列稀释,取不同稀释度适量涂布于固体培养基平板上或与已熔化...

枝江市13127417022： 土壤微生物数量的测定方法 - ？
仇郑鼻炎： 取一定重量的土壤,称取1g,置于100ml无菌水中,充分振荡,然后离心,取上清液,就得到土壤浸出液(可以看做土壤中的微生物全部转移至水中).然后做梯度稀释,取一定稀释度的溶液,涂平板,培养后数菌落数,然后乘上稀释倍数,就可得到1g土壤中该微生物的数量. 例如,你在稀释10的7次方的平板上数出了15个菌落,则1g土壤中微生物数量为1.5*10的8次方个.

枝江市13127417022： 土壤微生物的检测怎么做,哪里可以做 - ？
仇郑鼻炎： 取1g的土壤置于100ml的无菌水中,充分振荡之后,离心取出清液得到土壤浸出液.然后做梯度稀释,取一定稀释度的溶液,涂平板,培养后数菌落数,然后乘上稀释倍数,就可得到1g土壤中该微生物的数量. 土壤微生物检测项目:细菌、真菌、放线菌等. 做该项检测,可以向我咨询.