H9C2细胞培养操作技巧分享
H9C2大鼠心肌细胞培养操作技巧分享
细胞名称：H9C2，又名H9c2(2-1)或H9C2，源自心脏的心肌层，形态为成肌细胞样，以贴壁方式生长。
培养基：90% DMEM + 10% FBS + PS，生长条件为37℃，95%空气+5%二氧化碳。推荐传代比例1:2至1:3，每周2-3次。
背景：H9c2(2-1)具有骨骼肌特性，能融合形成肌管，对乙酰胆碱有反应，低血清浓度下融合快速。
细胞复苏与培养指南
- 复苏：将冻存管在37℃水浴中解冻，与4 mL培养基混合，离心后弃上清，加少量培养基吹匀，过夜培养，次日检查密度。
- 传代：细胞密度达80%-90%时，用0.25%Trypsin-0.02%EDTA消化，观察消化进度，终止后按1:2比例分到新皿或瓶中培养。
- 冻存：细胞生长良好时，收集细胞，用无血清冻存液调整密度后冻存。
注意事项
- 培养基不可回收，使用新配制的完全培养基。
- 收到细胞后检查细胞状态并消毒，首次传代建议1:2。
常见问题
- 传代次数受多种因素影响，理论上无限，但受操作水平影响。
- 细胞生长问题可能与铺板、血清质量、操作力度等有关。
- 细胞状态差可能源于血清问题、过密或解冻方法不当。
质谱流式---质谱技术和流式技术的完美结合
（2）顺铂染色。顺铂可用于区分死活细胞，推荐加入1 uL 终浓度为5 uM 的顺铂，37℃孵育5分钟后加入2~5倍体积的 Cell Staining Buffer，中止反应。其后以300 g的转速离心5分钟， 弃上清后使用 Cell Staining Buffer 或细胞培养基重悬细胞；（3）细胞刺激（可选）。将细胞转入培养箱培养15~30 min，...
T25细胞培养瓶是什么瓶?
用于提供细胞体外培养环境的培养瓶、培养板和培养皿除了具有良好的透明度和无毒、无菌外，还需经表面改性处理使之能够贴壁、分裂和生长。\/iknow-pic.cdn.bcebos.com\/c2fdfc039245d6889d5bf096aac27d1ed21b24a2"target="_blank"title="点击查看大图"class="ikqb_img_alink">\/iknow-pic.cdn.bcebos....
细胞凋亡的检测
美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量...
科普讲堂|一文了解CD19 CAR-T细胞治疗方法的基础
CD19为I型跨膜蛋白，具有单个跨膜结构域、胞内C末端和胞外N末端。胞外段含有两个C2型Ig样结构域。胞内结构域高度保守，由242个氨基酸组成，在C末端附近有9个酪氨酸残基。多项研究表明，CD19的生物学功能依赖于三个细胞质酪氨酸残基：Y391，Y482和Y513。CD19在B细胞活化以及信号传导中起协同受体...
细胞因子及其功能
（一）根据产生细胞因子的细胞种类不同分类 细胞因子 1、淋巴因子（lymphokine) 于命名，主要由淋巴细胞产生，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。重要的淋巴因子有IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IFN-γ、TNF-β、GM-CSF和神经白细胞素等。2、单...
生物必修一第二章测试题及答案
B.蛋白质是细胞中含量最多的化合物 C.1种DNA转录出1种RNA D.1种DNA分子可控制多种蛋白质的合成 9.三类营养物质氧化时释放能量与耗氧量如下表: 营养物质 体外燃烧释放能量(kJ\/g) 体内氧化释放能量(kJ\/g) 耗氧量(dL\/g) 糖17 17 0.83 蛋白质 23.5 18 0.95 脂肪39.8 39.8 2.03 据上表内容不能作出的...
t25细胞培养瓶什么价格?
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中国克隆的技术
1992年，江苏农科院克隆一只兔子。1993年，中科院发育生物学研究所与扬州大学农学院合作，克隆一只山羊。1995年7月，华南师大与广西农大合作，克隆一头奶牛、黄牛杂种牛。1995年10月，西北农大克隆6头猪。1996年12月，湖南医大克隆6只老鼠。同年中国农科院畜牧所克隆一头公牛犊。（以上为胚胎细胞克隆研究...
什么是高雪氏病
高雪氏病(Gaucher′s disease)又称葡糖脑苷脂沉积病(glucocerbroside lipidcsis)是因β-葡萄糖脑苷脂酶(β-glucocerehrosidase)减少或缺乏,使葡萄糖脑苷脂(glucocerbroside)不能分解成半乳糖脑苷脂或葡萄糖和N-酰基鞘氨醇,因而葡萄糖脑苷脂在单核巨噬细胞系统各器官中大量沉积、引起组织细胞大量增殖。 由于...
医学检验是干什么的
2、临床疾病诊断的基本知识；3、临床医学检验的基本理论知识和实验操作技能；4、数理统计和计算机应用的基本知识和技能；5、各种常用医学检验分析仪器的构造和操作技能；6、与健康相关检验的基本知识与技能；7、具有临床医学检验科研工作的初步能力。培养目标：本专业培养具有基础医学、临床医学、医学检验等方面...
缑昭芙露： 分散的细胞怎么会搏动呢…… H9C2细胞比较消耗血清,建议10%的胎牛血清和高糖培养基.虽然高糖刺激对细胞的线粒体可能有影响.
泽州县19862677538： H9c2细胞培养基出现白色细沙样沉淀是什么原因 - ？
缑昭芙露： H9c2细胞培养基出现白色细沙样沉淀是什么原因 培养基白色絮状物是在培养基配制完成后没有及时包扎灭菌,是微生物作用所致,也是培养基不同成分之间发生反应所致.总之,培养基配制过程中就需要打开灭菌锅了,尽快灭菌,就不会有白色絮状沉淀了. 这是受到了真菌或者放线菌的污染造成的,有时候霉菌孢子很难去除.除了注意消毒多用无菌水冲洗可以大大降低这种情况的发生率,要说绝对避免几乎是不可能的.多注意一下接种各个过程的细节吧,毕竟微生物那么小,稍有不慎就给它们以可趁之机.
泽州县19862677538： 如何把细胞铺的更均匀 - ？
缑昭芙露： 做细胞生物学实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验了.但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶.现分享我的实验技巧.一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入...
泽州县19862677538： 细胞培养的主要条件和注意事项以及使用的试剂 - ？
缑昭芙露： 要做细胞培养的话,硬件条件包括:细胞室(最好带空气净化系统),超净工作台,培养箱,离心机,冰箱,显微镜(倒置),常规培养耗材及移液枪等. 操作原则:无菌(最基本的),培养环境的稳定(温湿度保持恒定,不轻易改变培养基及添加物等,传代换液时操作要快,尽可能缩短在培养箱外的操作时间) 使用的试剂有:培养基,PBS,传代用消化液,血清,抗生素(青链霉素),培养用添加物(非必需氨基酸,细胞生长因子等)
泽州县19862677538： 做基因转染实验用h9c2细胞系可以么 - ？
缑昭芙露： 首先你得明确这个h9c2细胞的培养是否好做,操作是否稳定.然后你得确定,这个细胞株对于你得研究来说不可或缺,具有明确的代表性.上面两个都没有问题的话,祝你顺利.
泽州县19862677538： 细胞培养过程需要注意哪些事项? - ？
缑昭芙露： 1、要保证实验材料新鲜,从活体分离材料后要注意低温保存.2、要保证无菌操作.可以在操作时用的培养液中加入平时细胞培养液5倍含量的青链霉素.3、要注意酶液的浓度和控制消化时间.4、要注意培养液的选择.不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择.无菌操作、控制消化时间、及时关注细胞生长状态.
泽州县19862677538： 分子生物学体外细胞培养具体操作过程和注意事项 - ？
缑昭芙露： 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行.准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超...
泽州县19862677538： 细胞培养需要注意哪些问题 - ？
缑昭芙露： 1、实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验.2、无菌操作.操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素.3、用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间.贴块法分离细胞时,注意动作要轻柔,不要伤到细胞组织,组织块边缘尽量平整有利于细胞游离.4、培养液的选择.不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择.传代细胞培养:1、无菌操作2、控制消化时间3、及时关注细胞生长状态
泽州县19862677538： 分子生物学中,体外细胞培养的具体操作过程和注意事项 - ？
缑昭芙露： 那要看你做什么实验啊,要培养什么细胞啊???你是要培养动物细胞吗???动物细胞培养最关键就是一定不要染菌,要不细胞全死了,培养瓶灭菌,最好接种室也用紫外光杀菌,再接着,接种前,买来的细胞要复苏,培养液要配好,复苏之后就可以培养了
泽州县19862677538： 细胞培养一般方法有哪些? - ？
缑昭芙露： 1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验...
