血液提取总RNA和组织提取有哪些区别

RT-PCR：每天只能提取几份血样本的total RNA，请问我是应该提取完之后直接-80保存还是先反转录再保存？~

看做什么用，如果以后还用到RNA的话就先保存。但是如果你要接着马上做下一步实验的话，就先反转录成cDNA比较稳定，不易降解。

博凌科为TRIpure LS Reagent 血液（血液样本）RNA抽提试剂
TRIpure LS Reagent试剂是直接从来源于人，动物、植物，酵母，细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。在提取血液等液体样品的RNA时按一定体积比加入该试剂即可.省去了在处理样品前离心去除液体的步骤。
使用该试剂可以同时提取DNA及蛋白质。提取的RNA样品可以用于后继的RT-PCR、Northern blot、dot杂交及体外转录等实验。回收的DNA片段可以用于PCR反应。

血液样品的保存：
为了保证提取效果，请选择新鲜的血液进行RNA的提取。在收集到血液样品后，需要加入抗凝剂。抗凝剂的选择首选EDTA，其他抗凝剂如：柠檬酸盐、肝素或者ACD也可以使用。加入抗凝剂的血液样品最好在几个小时内进行RNA提取实验。不同种类的mRNA，其半衰期也不尽相同。调控基因的mRNA的半衰期比看家基因mRNA的半衰期要短。因此，为了保证所提取的RNA能够包含更全面的信息，请尽量避免使用保存时间过长的血液进行RNA的提取。

基本步骤：
◆ 按照3：1的体积比例加入TRIpure LS reagent和待提取的液体样品(固体样品用水调整体积比至3：1）振荡混匀。
◆ 加入氯仿帮助有机相和水相分层。
◆ 异丙醇沉淀RNA。
◆ 漂洗RNA沉淀。
◆ RNase-free H2O重新溶解RNA沉淀。

注：本产品不需要进行红细胞裂解的步骤，更快，纯度高。
产品特点：
◆ 方便--- 不需要分离红细胞和白细胞
不需要进行另外的红细胞裂解步骤。

保存条件：
2-8℃　避光保存一年。

提取范围：
血液、血清、血浆、病毒培养液以及任何液体形式的样品中提取RNA。

产量：
每1ml液体样品或1mg组织或1×106培养细胞预期的RNA产量
1.人和动物全血，15～20μg
2.人淋巴细胞（约7×107白细胞），60～70μg
3.肝和脾，6～10μg
4.肾，3～4μg
5.骨骼肌和脑组织，1～1.5μg
6.胎盘，1～4μg
7.上皮细胞(1×106 cultured cells)，8～15μg
8.纤维母细胞(1×106 cultured cells)，5～7μg

组织样品采集1. 首先准备好用于包装样品的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样品编号。2. 准确切除所需组织。3. 离体新鲜组织，立即剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型。4. 在RNase-free 的0.9％生理盐水中漂洗样品，以去除血渍和污物。5. 用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，迅速投入液氮冷却。6. 把样品袋（纱布袋等）放入液氮中冷冻一下，而后将液氮冷却的组织放入样品袋（每个样品袋只保存同样的组织，样品较多时应分装至多个小袋，不要在一只样品袋中放过多的样品以防无法放入液氮罐或无法从液氮罐中取出），袋口留一根编号绳，绳上粘2 张标签纸（标签上注明：客户名、样品名称、编号、日期，粘2 张标签纸是为了防止标签脱落造成样品混乱），迅速转入液氮罐。7. 填写样品登记单，写明样品名称、组织类型、编号、取样日期、样品处理过程等情况。注意事项1. 对肿瘤组织的取材，应尽可能准确地判定肿瘤组织和正常组织，如果有可能请根据冰冻切片报告的结果来判定要进行研究的取材部位。2. 不要用 Eppendorf 管保存组织样品，因为 Eppendorf 管从液氮中取出时极易发生爆裂而造成样品损失。3. 步骤 2～5应在冰上尽可能快速进行，时间过长会导致样品RNA降解 。4. 在临床手术过程中采集的病理或正常样品，如果没有条件立即从手术室中取出进行后续处理，请在切除后立即转移到液氮中保存。二、细胞及血液样品采集贴壁细胞1. 贴壁细胞培养或处理结束后，去除培养液；2. 按每10 cm2 培养面积加1 mL TRIzol 试剂的比例加入TRIzol 试剂；3. 用1 mL枪头反复吹打, 使TRIzol接触所有长有细胞的培养瓶表面进行充分消化；4. 转移到RNase-free 的试管中用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液应该为清亮而且不粘稠的状态；5. 放入干冰或-80℃冰箱中保存。悬浮细胞6. 悬浮细胞培养或处理结束后，去除培养液；7. 保留的细胞用PBS 缓冲液快速洗一次，离心除去PBS 缓冲液；8. 按照每5×106 个细胞加1 mL TRIzol 的比例加入TRIzol 试剂，用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；9. 放入干冰或-80℃冰箱中保存。血液1. 在已加入抗凝剂的新鲜全血中加入等体积PBS（1×），充分混匀；2. 缓慢转入另一已加入淋巴细胞分离液的离心管中，并使上述混合液处于淋巴细胞分离液液面之上（即两种液体不要混合，保留清晰的界面），3000 g 离心30 min；3. 用移液枪小心分离出白细胞层；用PBS（1×）清洗白细胞，离心回收白细胞，弃去上清；4. 加入白细胞20倍体积的TRIzol 试剂，用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；5. 放入干冰或-80℃冰箱中保存。三、总RNA 样品制备操作流程1. 用于RNA 提取的试剂及其他物品必须为RNase-free 的，并且尽量在洁净、不通风的环境中进行实验。2.应当选用自己熟悉的或公认可以得到良好实验结果的提取方法（如使用EasyExtract、TRIzol或RNeasy ）进行RNA 的提取。3. 可以根据实际需要选择RNA 的保存方法：需要长期保存的RNA 样品保存于75％乙醇中；无需长期保存的RNA 样品保存于RNase-free 的双蒸水或Elution buffer 中，样品浓度不应低于3μg/μl (需要扩增的样品浓度不应低于0.2μg/μl)。4. RNA质量，即A260/A280比值应在2左右，总RNA电泳检查需要有清晰的18s和28s rRNA条带，同时28s/18s的比例应在2：1以上，70°C 水浴保温1 小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。

现在我们做实验大多不用繁琐的手提方法了，我们提取组织和全血的RNA都用BIOG，感觉步骤差不多，比手提简便多了，效果还不错。

如果使用试剂盒提取基本没多大区别，我们使用的biog比较稳定，最后提取完紫外侧得浓度95左右

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尚义县19779243896： 血液提取总RNA和组织提取有哪些区别 - ？
锁味小儿： 组织样品采集1. 首先准备好用于包装样品的铝箔或冷冻保存管,并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样品编号.2. 准确切除所需组织.3. 离体新鲜组织,立即剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型.4. 在RNase-free 的0.9...

尚义县19779243896： 血中的RNA和组织的RNA有区别吗 - ？
锁味小儿： RNA在不同组织中是有差异的,不同组织具有不同的功能,自然会表达不同的mRNA,这很正常.所以血液中RNA和组织中的还是有区别的.而且血液里面提RNA比较麻烦,量也少,因此一般都是从组织中去获取RNA的.

尚义县19779243896： 【求助/交流】组织中提取的RNA与血清中提取的有什么差别麻烦告诉我 - ？
锁味小儿： 你组织中提取的RNA可能有DNA污染,所以会有比目的带大的带(可能是含内含子的DNA),建议用DNase I消化后再反转录,应该会好一些.

尚义县19779243896： 怎样提全血RNA - ？
锁味小儿： 方法与细胞组织提RNA基本相同.具体有以下几种方法. A:分离淋巴细胞群再提取 1. 新鲜血液2ml,肝素钠抗凝,D-HANK'S对倍稀释.2. 将稀释液轻置于4ml淋巴细胞分离液上层.3000rpm x 20min, 4度.3. 取淋巴细胞层,PBS对倍稀释,3000...

尚义县19779243896： 耳组织和血液提取dna不同 - ？
锁味小儿： 消化前处理不同,其余相同.组织DNA提取多加个组织研磨的过程,取米粒大小组织块,在研钵中与少许STE共同研钵,吸取液体入EP管,加RNA酶37度笑话1小时,后加SDS和蛋白酶K消化,后续操作可同血液DNA提取.

尚义县19779243896： 从全血里提取RNA的方法? - ？
锁味小儿： 10月13日 13:35 RNAgents总RNA提取系统 1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA? 2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样? 3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少? 4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的...

尚义县19779243896： 细胞提取和组织提取的rna是一样吗 - ？
锁味小儿： 不一样

尚义县19779243896： 如何提取血RNA - ？
锁味小儿： 都应该是可以的.不过提取RNA一般都用kit(试剂盒),RNA和DNA不一样,杂质多,易降解,所以基本上不用自己配的溶液提. 虽然我个人没有做过,但是全血和血清中提取RNA都是可以的,只是用的trizol和提取组织细胞中的不一样. 你尝试搜索一下Trizol LS,看看是不是你需要的.

尚义县19779243896： 求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤 - ？
锁味小儿： 总RNA提取试剂盒步骤: 1. 样品处理:a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀. b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理. c. 贴壁细胞:...

尚义县19779243896： RNA提取方法有哪些 ？
锁味小儿： RNAgents总RNA提取系统 1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA? 2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样? 3)RNAgents®总RNA提取系统的一般...