CRISPR、CRISPR screen以及与单细胞测序的结合
作者&投稿：姓雷 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
1、 repeat ：short DNA ，20-40bp，Palindromic回文【DNA转录后，回文结构会形成发卡结构】
2、 spacer DNA ：间隔序列，将repeat间隔开【 spacer DNA可以和病毒DNA 完美匹配 ，特别是噬菌体DNA】
3、 cas ：CRISPR-associated【与CRISPR相关的基因】
【 cas蛋白具有解旋酶活性，可以将DNA链解旋，同时具有核酸酶活性，可以切割DNA链 】==>>因此，这是细菌的一个免疫系统，通过这种方法，细菌可以抵抗其敌人：噬菌体
因此： 只要知道目标DNA 的序列，把它做成guide RNA，融合到cas蛋白上，就可以特异性的把这段序列切掉。
接下来，学习一下CRISPR技术的一个应用——CRISPR基因筛选
利用功能缺失的策略进行的高通量遗传筛选 ，是研究人员快速寻找调控特定表型的重要或关键基因的主要方法。CRISPR基因筛选，可以通过 CRISPR gRNAs 靶向不同细胞中成百上千各异的基因，然后通过实验筛选编辑细胞，gRNA 可以帮助确定哪些基因对于生物学作用机制具有至关重要的作用。然而，这种筛选方法比较适用于回答与细胞生长能力直接相关的问题。
如果我们想研究基因调控和其它复杂的生物控制机制，就要明白多个基因是如何协同工作还有调控调节细胞状态。这就需要针对每个CRISPR靶向基因，分别进行培养，编辑和分析细胞。
这时候可以采用 CRISPR + inDrop scRNA-seq
在此，引用一篇通俗易懂的文章，很赞！！！
参考：
https://www.bilibili.com/video/BV15x411Z7kf?p=2
https://www.jianshu.com/p/cd402fc588af
樊翰双歧： crispr是生命进化历史上,细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器,简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌,利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务,细菌为了将病毒的外来入侵基因清除,进化出crispr系统,利用这个系统,细菌可以不动...
广汉市19364499496： 如何利用CRISPR来开展全基因组筛选 - ？
樊翰双歧： 如何进行CRISPR筛选? 利用CRISPR文库来开展正向遗传学筛选包括多个步骤.在大多数情况下,CRISPR文库是以极低的浓度提供的.因此,第一步就是将你的文库扩增到一定程度,足以产生慢病毒.记住,你需要使用新一代测序来检查文...
广汉市19364499496： 什么是CRISPR/Cas9技术 - ？
樊翰双歧： 1.什么是CRISPR/Cas9? CRISPR----Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats 是在细菌和古细菌中广泛存在的成簇的、有规律的、间隔的短回文重复序列. 07年,发现细菌可以用CRISPR系统抵抗噬菌体的入侵;08年,发现细菌的 CRIS
广汉市19364499496： crispr可以编辑病毒基因组吗 - ？
樊翰双歧： crispr可以编辑病毒基因组 十年前,当研究人员开始解析细菌和古细菌中一个称为 CRISPR 结构的时候,他们并没有预料到这会给基因编辑世界带来一场风暴.在过去的这一年半时间里,CRISPR 方法已迅速席卷了整个动物王国,成为 DNA 突...
广汉市19364499496： CRISPR基因编辑技术又取得了哪些爆发式进展 - ？
樊翰双歧： 中山大学人类胚胎遗传性致病基因修复实验采取了CRISPR/Cas9基因编辑技术.该技术是近年在锌指核酸酶(ZFN)技术、类转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)技术之后出现的新型基因编辑技术,原理来自细菌的适应性免疫防御机制.相...
广汉市19364499496： crispr - cas9 技术可用于大肠杆菌基因敲除吗 - ？
樊翰双歧： 是的,确切来说是大量表达.大肠杆菌是基因重组技术中常用的细菌,将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素),由于细菌繁殖速度快,通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素,再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素.
广汉市19364499496： 谁能通俗易懂的解释一下CRISPR的原理..不要用太专业的术语 - ？
樊翰双歧： 支持一下感觉挺不错的
广汉市19364499496： 如何使用crispr/cas系统进行基因 - ？
樊翰双歧： 所谓基因编辑技术,是指对DNA核苷酸序列进行删除和插入等操作,换句话说,基因编辑技术使得人们可以依靠自己的意愿改写DNA这本由脱氧核苷酸写而成的生命之书.然而长期以来,对DNA的编辑只能通过物理和化学诱变、同源重组等方式来对DNA进行编辑.然而这些方法要么编辑位置随机,要么需要花费大量人力物力进行操作.因此,能够方便而精确的对DNA和核苷酸序列进行编辑,是科研工作者们长期以来的梦想.CRISPR-Cas9系统的诞生和成熟标志这这一梦想逐渐变为现实.此外不仅仅在科研界,在诸如医疗、农业、畜牧业等研究中,这一技术也显现除了巨大的应用前景.因此,这一技术获得专利,是该技术走向应用的里程碑式事件.
广汉市19364499496： crispr为什么 单克隆筛选 - ？
樊翰双歧： CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统. 细菌被phage侵染之后,可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆,当再次遭到入侵时,从对phage形成免疫
