怎样通过电泳图计算DNA分子量,扩出的基因与marker不相符,无法通过marker确定,是否有计算方法通过电泳

作者&投稿:徐满 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
电泳图跑出后如何通过条带跑的距离来计算目的基因的分子量,需要具体的步骤,我跑的条带跟MARKER对不上~

其实做的多了,根本就不会去计算,只要大致看一下在marker的那两条带之间即可,反正那种计算本身也不准,也是近似结果。所以无需要特别计算,如果你的条带是5点几kb,刚好在1kbmaker的5、7kb之间偏下,基本上即可确定扩增出来了,如果不在两者之间,计算也没用,你扩的可能是非特异带

目的嘛,利用DNA在泳动时的分子筛效应和电荷效应,可达到分离混合物的目的。DNA在高于其等电点的溶液中带负电,向阳极移动,其迁移速率与其相对分子量成反比。

DNA Marker 是分子量不同的DNA片段,主要用途就是DNA 分子凝胶电泳时,加样用做对比来检测琼脂糖凝胶是否有问题。通过其大小可以粗略估算样品DNA分子量的大小。 DNA电泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的,这样对目标片段大小的估计才比较准确。需要注意的是Marker的电泳同样也要符合DNA电泳的操作标准。如果选择λDNA/HindIII或者λDNA/EcoRI的酶切Marker,需要预先65℃加热5min,冰上冷却后使用。从而避免HindIII或EcoRI酶切造成的粘性接头导致的片段连接不规则或条带信号弱等现象。

需要分析的就是和marker对比,你的DNA分子的大小,跑到哪个位置的是什么成分,可以看碱基组成

能,以前求过迁移率,最后记得化简完的结果是好像是l^2和m成正比,也就是电泳距离的平方和分子量成正比,但也是估算,基本上差不多。或者你可以根据marker的距离什么的自己推算一下。
但如果遇到质粒或者超螺旋,结果差距就比较大了

凝胶成像仪上有自带的条带分析软件和分子量分析软件,通过DNA marker,利用分子量分析软件,就可以算出待测DNA的分子量

胶回收,测序,不就知道了么


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宗圣卢海普:[答案] 能,以前求过迁移率,最后记得化简完的结果是好像是l^2和m成正比,也就是电泳距离的平方和分子量成正比,但也是估算,基本上差不多.或者你可以根据marker的距离什么的自己推算一下. 但如果遇到质粒或者超螺旋,结果差距就比较大了

中山区13793573403: 怎样通过电泳图计算DNA分子量,扩出的基因与marker不相符,无法通过marker确定,是否有计算方法通过电泳
宗圣卢海普: 能,以前求过迁移率,最后记得化简完的结果是好像是l^2和m成正比,也就是电泳距离的平方和分子量成正比,但也是估算,基本上差不多.或者你可以根据marker的距离什么的自己推算一下. 但如果遇到质粒或者超螺旋,结果差距就比较大了

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宗圣卢海普: 用D2000的MARK与位置DNA片段一起跑电泳,MARK的量是5ul,目的条带的量是1ul,跑完后EB染色,照胶,这样MARK的750BP的位置的条带的量大约是100ng,然后可以根据亮度判断别的位置的条带的量,有专门的软件来定量

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中山区13793573403: 如何才能知道DNA片段的准确大小呢?
宗圣卢海普: 在样本电泳的同时电泳分子量marker,这种方法可以大概了解DNA的分子量大小;如果想要准确知道的话,就去测序.

中山区13793573403: dna扩增时的marker怎么使用 -
宗圣卢海普: 你说的是分子量DNA marker吧,主要是用来指示扩增产物片段的大小,用的比较多的是200bp DL,就是200bp到2000bp,共10个条带.你上样的时候单独加在样品旁边的孔里.

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中山区13793573403: 核酸凝胶电泳中 怎么利用灰度值对DNA定量
宗圣卢海普: 你的成像系统中有灰度计量的一栏 做DNA定量的时候要先制备标准样品,在标准循环中制作线性的循环曲线 然后通过成像系统读取样本的灰度 代入曲线中求DNA的量 现在一般都不玩这个的了 10多年前的技术 并且灰度计算不准确 现在做dna定量 相对定量最普遍都会做荧光定量PCR 绝对定量还是做blot吧

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