RT-PCR技术的简介
RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应（PCR）相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞组织中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。
RT-PCR简介
RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。使用天为时代公司的总RNA提取系统（如目录号 DP405和DP406），所获得的RNA的纯度高，基因组DNA污染少，用于RT-PCR系统可得到满意结果。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。
RT- PCR首先经反转录酶的作用以RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。
什么是T-克隆载体和U-克隆载体?
用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。如pGEM-3Z4Z载体由pUC1819增加了一些功能片段改造而来，大小为2.74kb。与pUC1819相比，在多克隆位点的两端添加了噬菌体的转录启动子，如Sp6和T7噬菌体的启动子（link：xlinkhref=i010801图4-8link），便于克隆片段的测序。...
什么是t载体
T-DNA，全称为转移DNA，是一种生物工程技术工具，专为在植物中进行基因重组而设计。其独特之处在于，T-DNA能够与受体生物染色体的特定序列相融合，从而将外源基因插入到细胞的基因组中。在基因操作中，T-DNA的一侧通常带有单个脱氧腺苷酸(A)，与PCR产物的A-T碱基配对，提高了克隆成功率。染色体是真核...
什么是T-载体?
通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI 酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体.因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制,甘露聚糖酶能够表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示...
qRT-PCR差异分析及P值计算
qRT-PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法是KJ Livak(Applied Biosystems)等人在2001年提出的“比较Ct法相对定量”,即:利用ΔCt值差异来推算基因表达差异(Ct目的基因 – Ct内参基因 = ΔCt),该方法的具体计算方法请参见文章: qRT-PCR相对定量计算详解 。 一般在相对定量...
介绍一下 PCR
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物...
为什么pcr产物要先连在t载体上
T载体是一种克隆载体，链接后先得到较多的拷贝，可以提高链接表达载体的效率。
pcr T检验单尾还是双尾
单尾和双尾取决于H0。当H0使用等号而H1使用不等号时，进行双尾检查。H0为定向时，单尾检查。H0和H1是完整的事件组，彼此相对，并且仅建立了其中一个。
外阴横纹肌肉瘤诊断检查
PCR方法在诊断RMS时具有敏感性和特异性，尤其在用α\/γAchR<1作为RMS诊断标准时。最近，eaveolin-3可作为RMS肿瘤标记物。细胞遗传学方法可用于检测腺泡型RMS中常见的t(2；13)(q35；q14)和t(1；13)(p36；q14)染色体易位，但灵敏度较差。荧光原位杂交技术(FISH)结合RT-PCR检测13号染色体上形成的...
TCR基因修饰的细胞毒性T淋巴细胞构建
随着分子生物学的发展,TCR基因克隆、转导技术已较成熟,研究方向主要是如何保证TCR基因高效、正确表达组装成为具生物活性的分子。 机体免疫防御主要由体液免疫与细胞免疫两大系统构成,其中以CD8+T淋巴细胞介导的细胞免疫在抗肿瘤过程中发挥重要作用。CD8+T从静息性T细胞活化为具有特异杀瘤作用的细胞毒性T淋巴 细胞(...
RT-PCR怎么读?
第一，RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也简称RT-PCR，但是这是不对的，通常指第一种。第二,RT-PCR直接按照字母顺序读，还可以直接读汉语全程:反转录PCR ...
蒲谢碘化： RT-PCR简介 RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段.RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达...
普兰店市19373875936： 逆转录PCR的介绍 - ？
蒲谢碘化： 逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.
普兰店市19373875936： “RT - PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些? - ？
蒲谢碘化： RT-PCR 是将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结 合的技术.首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 为模板, 扩增合成目的片段.RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基 因表达水平...
普兰店市19373875936： 我想知道RT - PCR的原理 - ？
蒲谢碘化：[答案] RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录...
普兰店市19373875936： Alphascreen and RT - PCR是什么？
蒲谢碘化： alphascreen是一种检测生物分子间相互作用的技术,通过微珠的连接作用,将相互作用级联放大产生信号.RT-PCR一般指反转录PCR
普兰店市19373875936： RT - PCR原理及操作 - ？
蒲谢碘化： 原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条...
普兰店市19373875936： RT - PCR的原理是什么?有何用途? - ？
蒲谢碘化： RT-PCR有两种解释:1,最常用的理解:RT 是'逆转录'(reverse transcription)的缩写2,现在也有人这么用:RT是'实时'(real time)的缩写1,先说逆转录PCR:这项技术使用的'逆转录酶'来自逆转录病毒,是一种能按照碱基互补配对原则...
普兰店市19373875936： real - time RT - PCR是什么意思 - ？
蒲谢碘化： real-time RT-PCR 实时荧光定量RT-PCR 双语对照词典结果: 网络释义 1. 荧光定量RT-PCR 2. 实时定量RT-PCR 3. 荧光RT-PCR
普兰店市19373875936： 什么是RT - PCR、Real - time PCR及其应用 - ？
蒲谢碘化： RT-PCR是反转录PCR,是将提取的mRNA逆转录为cDNA后进行PCR的实验.可定性或半定量mRNA的量. Real time PCR是实时定量PCR,可以精确测定起始模板的量.用于定量测定.
