实验报告用过氧化酶探究对酶活性的影响

过氧化氢酶探究pH值对酶活性的影响实验步骤~

①实验目的是探究pH对过氧化氢酶活性的影响，故先在1号、2号、3号试管中各加入2mL新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液，再向l号试管内加入l mL蒸馏水，向2号试管内加入1mL（等量）氢氧化钠溶液，向3号试管内加入1mL（等量）盐酸溶液，并振荡试管。
②据题分析可知，向1号、2号、3号试管内各滴入2滴鸡肝研磨液。
③气泡的多少反应了过氧化氢酶活性的高低。仔细观察各试管内产生气泡的多少，并记录。
在最适pH时，酶的活性最高；当高于或低于最适pH时，酶的活性都会降低．故实验结果为：1号试管内产生的气泡较多；2号和3号试管内产生的气泡较少。
除pH外，还有其它环境因素会影响过氧化氢酶的活性，就此提出相关研究课题：探究温度对过氧化氢酶活性的影响。故答案为：
①1mL（等量）氢氧化钠溶液（试剂量和试剂名缺一不给分） 1mL（等量）盐酸溶液（试剂量和试剂名缺一不给分）。
②鸡肝研磨液
③产生气泡较多
探究温度对过氧化氢酶活性的影响（或其他合理答案）点评：本题考查影响酶活性的因素及探究实验，重点是考查影响酶活性的探究实验，要求学生掌握实验设计的原则，准确判断实验的自变量、因变量和无关变量。
同时要掌握影响酶促反应速率的因素。酶作为生物催化剂，不仅具有一般无机催化剂的特点，还具有专一性、高效性和温和性等特点，所有这些内容都是生物实验的好素材．以酶的特性为知识背景，可以较好的测试学生的实验知识及操作能力。

扩展资料：
动力学方法
测定一定时间内所起的化学反应量。
①比色法 如果酶反应的产物可与特定的化学试剂反应而生成稳定的有色溶液，且生成颜色的深浅与产物的浓度在一定的范围内有线性关系可用此法。
如蛋白酶的活力测定：蛋白酶可水解酪蛋白，产生的酪氨酸可与福林试剂反应生成稳定的蓝色化合物，在一定的浓度范围内，所生成蓝色化合物颜色的深浅与酪氨酸的量之间有线性关系，可用于定量测定。
②量气法 主要用于有气体产生的酶促反应。如氨基酸脱羧酶、脲酶的活力测定。产生的二氧化碳量可用特制的仪器如瓦氏呼吸仪测定之。根据气体变化和时间的关系，即可求得酶反应的速度。
③滴定法 如果产物之一是自由的酸性物质可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解，脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。
④分光光度法 利用底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。几乎所有的氧化还原酶都使用该法测定。
如还原型辅酶Ⅰ(NADH2)和辅酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，而NAD和NADP在该波长下无吸收，脱氢酶类可用该法测定。该法测定迅速简便，自动扫描分光光度计的使用对酶活力的快速准确的测定提供的极大的方便。
参考资料来源：百度百科-酶活性

由于本探究实验只要求作定性实验，设计实验步骤如下：
1．取三只试管分别编号为1、2、3号。
2．分别向三只试管中加入2毫升2%可溶性淀粉溶液。
3．分别向三只试管中加入1毫升5%HCI、清水、5%NaOH溶液，摇匀，60°C的水浴加热2分钟。
4．分别向三只试管中加入2滴I—KI溶液，观察试管内溶液的颜色变化。
如果实验结果如下：1号试管内溶液变蓝、2号试管内溶液呈橙黄色、3号试管内溶液为蓝色，则说明酸、碱性环境影响了淀粉酶的活性，也就达到了本探究实验目的——PH影响酶的活性。
但是我的试验结果又是如何呢？经实际操作，其实验结果如下：
1号试管内溶液为棕红色。
2号试管内溶液为号橙黄色。
3号试管内溶液在加入I—KI溶液瞬间变蓝，然后又呈现无色。
1号、3号试管内溶液的颜色变化完全出乎我的预料之外，是不是由于操作失误造成的呢？于是我对1号试管反复进行实验，发现在加入HCI后的不同时间内滴加I-KI溶液所呈现的颜色不一样，有时呈现红色，有时呈现褐色，或者二者之间的颜色；对3号试管进行多次操作实验，发现只有滴加足够多的I-KI溶液，蓝色才不消失。
这究竟是怎么回事呢？我们都知道淀粉及其水解产物与碘的显色反应，是由于碘分子嵌入淀粉螺旋圈内，借着范得华力与淀粉联系在一起，形成淀粉-碘络合物的缘故。其颜色与多糖链长度有关，当链长小于6个葡萄糖单位时，不能形成一个螺旋圈，因而不能显色，当链长度平均为20个葡萄糖单位时显红色，大于60个葡萄糖单位时显蓝色。
对1号试管内在加入HCI后的不同时间段滴加I—KI溶液，有时呈现红色，有时呈现褐色，或者二者之间的颜色，说明淀粉发生了不同程度的水解，产生了分子量大小不等的水解产物。试管内已经加了1毫升5%的HCI，难道淀粉酶在酸的作用下没有变性失去活性吗？经过查阅资料，我才知道事实上淀粉酶的确失去了活性，但是我忽视淀粉水解还有另外的一个条件——酸性环境，即淀粉不但在酶的作用下发生水解，在酸的作用下同样发生水解。
这样，1号试管内所表现出的实验现象就掩盖了在酸性环境中，淀粉酶的活性受到抑制或者变性失去活性的事实，即在HCI的作用下，淀粉酶变性失去催化活性，淀粉不水解，遇I—KI变蓝色的事实，这样看来淀粉酶探究温度对酶活性的影响是不合适的。
那么3号试管内现象出现的原因又是什么呢？滴加溶I—KI液试管内溶液瞬间变蓝，说明试管内一定有淀粉存在，但是为什么蓝色在瞬间又消失了呢，难道淀粉在瞬间又被水解了吗？经过查阅资料方知3号试管中还存在着另一种化学反应，即I与NaOH发生的化学反应： 2NaOH+I2=NaI+NaIO+H2O
尽管刚刚加入的I—KI溶液中的碘和淀粉反应产生淀粉—碘络合物，使溶液变为蓝色，但是由于碘分子是嵌入淀粉的螺旋圈内，借范得华力与淀粉联系在一起的，其化学性质并没有发生改变，所以尔后又迅速与NaOH发生反应，产生了无色的NaI、NaIO，使试管内呈现的蓝色在瞬间又归为无色。只有当加入足够多的碘-碘化钾溶液时，与NaOH充分反应完毕后剩余的碘方与淀粉发生反应，产生淀粉—碘络合物，出现蓝色。
从3号试管的颜色变化看，尽管当加入足量的I—KI溶液时，我们期望的溶液颜色——蓝色最终出现了，也同样说明碱性环境影响了酶的活性，但是如果我们用淀粉酶探究PH对酶活性影响的学生实验时，需要向学生解释的太多，所以从3号试管内的颜色变化看，用淀粉酶探究温度对酶活性的影响也是不合适的。
分析1号、3号试管的实验现象，用淀粉酶探究温度对酶活性的影响也是不合适的，那么是不是就只能用过氧化氢酶探究PH对酶活性条件的影响呢？

我们知道有许多关于用唾液淀粉酶探究PH对酶活性影响实验的习题，调节酸碱性的物质也是NaOH、HCI，那么实际操作会出现上面提到的问题吗？不会的，因为唾液淀粉酶的最适宜的温度是37?C，在室温下进行实验即可，不需要水浴加热，而且分别加入1毫升5%HCI、清水、5%NaOH溶液后可以立即滴加I—KI溶液，尽管存在者上述反应，但是由于温度低，时间短，淀粉在HCI的作用下水解的很少，NaOH与碘反应的很慢，并不会影响实验效果。
而淀粉酶活性的最适宜温度是60?C，需要水浴加热，而较高的温度使得淀粉在HCI的作用下水解的很快，NaOH与碘反应的很快，于是在用淀粉酶探究PH对酶活性的实验中1号、3号试管内便出现了如上述实验现象。总结以上原因，我在此也建议用淀粉酶探究温度对酶活性的影响，用过氧化氢酶探究PH对酶活性的影响，或者用唾液淀粉酶探究PH对酶活性的影响。

影响酶活性的因素”是高中现行生物学课本中的一个实验内容，也是第1个探究性实验。但是，教材中所介绍的实验药品（α-淀粉酶）价格较贵，实验设计思路为定性实验。能否改进实验设计方案，使其不仅能培养学生的实验技能和实验设计能力，通过实验过程理解影响酶活性的因素的知识内容，而且促使学生积极参与探究活动，养成实事求是的科学态度和一丝不苟的科学探究精神呢？为此，笔者进行了一些有益的尝试。

1 实验设计

1．1 选用过氧化氢酶作为实验探究对象 过氧化氢是细胞中某些化学反应的副产物，具有强氧化性，如果不及时除去或分解，就会杀死细胞。在动物的肝细胞和血细胞中含有较多的过氧化氢酶，它可以促进过氧化氢分解。由于过氧化氢酶容易获得且催化反应的现象明显，所以选用过氧化氢酶作为实验探究对象。

1．2 设备准备 实验用具有：细胞培养瓶（代替反应小室）、刻度吸管、镊子、水槽、25 mL量筒；反应底物为30％H2O2，也可以用原包装双氧水配制的3％H2O2，但反应速度慢，现象不太明显，反应时间长。

实验中需要 H2O2酶滤纸片，制作方法是：将 10 g鲜肝剪碎，置于研钵中充分研磨，加入200 mL蒸馏水制成鲜肝液。然后，将滤纸剪成1 cm2的小片，平展在表面皿中，用鲜肝液浸泡l min后使用。

配制缓冲液，方法是：将17.96 g Na2HPO4·7H2O在 1 000 mL容量瓶内溶于蒸馏水中，加水至刻度，配制成0.067 mol／L Na2HPO4溶液。将9.07 g KH2PO4在1 000 mL容量瓶内溶于蒸馏水中，加水至刻度，配制成0.067 mol／L KH2PO4溶液。用上述两种溶液配制pH5、pH6、pH7、pH8缓冲液如下：

单位：mL

pH
5
6
7
8

0.067 mol／L KH2PO4
0.067 mol／L KH2PO4
1
99
20
80
60
40
95
5

1．3 实验方案 参照美国BSCS教材中的实验方案，经过1个多月的摸索，改进原有实验装置，制定出简单易行且定量效果好的实验步骤如下：

l）向水槽中加水至将满为止。

2）将大小相同的8片滤纸片在鲜肝液中浸泡l min，然后用镊子夹起滤纸片，靠在培养皿壁上，使多余的酶液流尽。

3）用镊子将2片酶滤纸片小心地放入细胞培养瓶（用作反应小室）的一侧内壁上，使酶滤纸片粘在内壁上。注意滤纸片不要碰到反应小室的瓶口。

4）将细胞培养瓶立起，贴有酶滤纸片的一侧壁冲上，小心加入 pH＝5的缓冲液 2 mL，然后再加入 2 mL 30％的H2O2溶液，切勿使上述混合液接触贴在内壁上的滤纸片。将小室塞紧。

5）将25 mL量筒横放于水槽中使之灌满水，若有气泡，将其轻轻倾斜，小心赶出气泡。将量筒倒立，使筒口一直处于水中。

6）小心将细胞培养瓶平放在水槽中的水里，注意反应小室贴有滤纸片的内壁应在上面，将量筒移至细胞培养瓶口上伸出的玻璃管上方，实验过程中要一直扶着量筒，保证量筒的位置不动。

7）将细胞培养瓶小心旋转180度，使H2O2溶液接触酶滤纸片。同时开始计时，在 30 S时，读取量筒水平面刻度并作出标记后记录。

8）反复冲洗反应小室后，重复上述实验过程，测量在 pH6、pH7、pH8时过氧化氢在酶的催化下所释放的气体量。注意：所有的实验中都要严格保证于净，不应该有上一次反应后的剩余溶液，每次试验完后，应充分冲洗，然后用相应的缓冲液再冲洗一遍。

2 教学过程

2．1 引入新课 由上节课的实验操作引出本节课的实验内容，启发学生思考实验操作要达到的目的，为减少学生实验操作过程的盲目性做好铺垫。

学生作出温度和pH影响酶的活性的假设后，教师介绍本节课所用的酶和底物，以及过氧化氢酶在生物体内的分布情况。然后播放自制录像《pH过氧化氢酶活性的影响》，边看录像边讲解实验用具，但是不强调实验操作过程中的注意事项，意在训练学生的观察能力、对问题的敏感能力、综合分析能力。如果某一学生只是在被动地看录像而不是边看边思考，在自己具体实验过程中会遇到很多问题，使实验进程不顺利。而在看录像过程中积极思考的学生，实验每一步的操作应该注意的问题都会关注到，实验速度快且实验结果准确。

2．2 学生分组实验 学生模仿录像中的操作进行自主实验，既需要分工合作，更需要在操作中发现问题并及时解决问题。这个过程中教师巡视学生的操作情况并适时地参与讨论，针对不同组的情况，提出一些小问题，引导学生进行深层次的思考。

实验中教师巡视，既可以了解学生实验的速度、实验过程中出现哪些不可预计的问题，使自己很好地驾驭课堂教学，又作为学习者参与讨论过程，营造宽松和谐的学习氛围。

2．3 交流和讨论 实验结束后，教师请各组学生代表汇报实验结果，确定过氧化氢酶的最适pH，在交流过程中学生会发现不同组得出的实验结论可能有所不同。综合全班的实验结果，还是可以看出过氧化酶的最适宜pH是7。然后教师告诉学生，科学家研究得出：肝脏中过氧化酶的最适pH是6.8，接近于7。但是大家的实验结果各不相同，由此引出实验讨论的问题：实验过程中有哪些因素可能造成实验误差？学生针对自己的实验操作过程进行充分的讨论，总结出影响实验结果的一些因素。这是学生回忆实验操作进行自我反省和相互评价的过程，但是很少有学生对教师提供的实验方案表示质疑，为此教师又提出另外一个讨论题：你认为该实验设计中有哪些不完善的地方？应如何改进实验装置或方案，使实验结果更准确？一个小小的问题点燃了学生质疑的火花，大家各抒己见，提出改进实验方案的建议，学生的发散思维和创新思维在此体现得淋漓尽致。教师对学生的发言进行了充分的肯定，激发了学生的学习热情和积极性。因为实验步骤中只设计了pH为5－8的实验，所以教师又提出一个简单的问题：如果想得出不同的pH与酶活性关系的变化曲线，应该如何设计？由此引导学生思考实验目的不同，实验设计的步骤和方案可能有所不同，实验设计需要有针对性。

2．4 实验设计思路的迁移──设计并交流温度对酶活性影响的实验方案 进行充分的讨论后，教师又提出问题：知道了不同的pH与酶活性的关系，现在请同学们设计“探究温度如何影响酶的活性”的实验方案。提醒学生注意底物和相应的实验装置的选择。给学生一段时间思考后，教师请学生交流实验方案。有的学生在教师提供的实验用具的基础上设计，有的学生利用化学中制备氢气的启普发生器作为反应体系，这样实验结果更加准确。但有的学生考虑得更加全面，想到H2O2在高温的情况下也会加速分解，用过氧化氢酶和H2O2探究温度的影响不太适合，所以改用淀粉作底物，唾液淀粉酶作催化剂。在这个交流过程中，学生相互评价实验的可行性，并且给予每组学生一些合理的建议。该过程充分体现了学生深入研究问题的能力。

3 教学小结和反思

生物科学实验中可以对学生进行探究过程的训练。包括观察、提出问题、进行假设、设计方案并进行实施、收集分析解读数据、得出合理结论、表达结果等。是学习者运用判断思维、逻辑思维进行学习的过程。在这个过程中，要很好地把握教师的主导作用和学生的主体作用，保证课堂教学的高效优质。避免出现盲目而无序，热闹而无获的情况。探究教学对教师驾驭课堂和教学内容的能力都提出了更高的要求。因此在授课前教师必须精心准备，要预见到可能发生的所有情况，尤其是实验安全性问题。

对实验结果的分析讨论和自主设计实验是本节课的重点，在这个过程中培养了学生多方面的能力：与他人的合作意识、分析综合的思维能力、表达与交流的能力、实事求是的科学态度、自我评价与评价他人的能力、创新能力等。但是能力的培养不是一朝一夕的事情，应该渗透到每堂课的教学中．渗透到教学的点点滴滴，朱意曾说过“读书无疑，需教有疑，有疑者无疑，至此方是长进”，在教学过程中，精心设问，周密安排，每堂课要给学生提供施展自己才华的舞台，长此以往，学生的各种能力会逐步得到提高乃至升华。

探究过程中教师应该注意自己扮演的是和学生平等的学习者而不是高高在上的知识的传授者，和学生共同探讨，可能从学生那里会获得更多的灵感和信息，反过来促进自己的教学。

如果时间允许，可以用2节课的时间，给学生提供必需的实验器材和用品，分组实施自己设计的“温度对酶活性的影响”方案，检验自己方案的可行性。这是一个自我价值的实现过程，相信在这一过程中更能激发学生学习生物学的热情，是培养学生学习生物学兴趣不可多得的契机。

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柳州市18043551430： 影响酶活性的因素,实验报告...要整个过程,包括仪器等等. - ？
窦物尤尼：[答案] 影响酶活性的因素”是高中现行生物学课本中的一个实验内容,也是第1个探究性实验.但是,教材中所介绍的实验药品(α-淀粉酶)价格较贵,实验设计思路为定性实验.能否改进实验设计方案,使其不仅能培养学生的实验技能和实验设计能力,通过...

柳州市18043551430： 某小组在探究“影响酶活性的条件”的实验时,提出“过氧化氢酶的活性是否受pH影响”的问题,并设计实验的 - ？
窦物尤尼： (1)本题探究的问题是“过氧化氢酶的活性是否受pH影响”,故实验变量为pH,因变量是过氧化氢酶的分解速率,可观测指标是试管中产生的气泡数量. (2)本题探究的问题是“过氧化氢酶的活性是否受pH影响”上述操作步骤中存在明显的缺陷...

柳州市18043551430： 小刚利用过氧化氢酶研究温度对酶活性的影响.过氧化氢酶常见于活体组织中,能把过氧化氢分解成水和一种气 - ？
窦物尤尼： (2)酶的活性(3)氧气 排水法收集后用带火星的木条伸向瓶口看是否燃烧(4)0 低温降低酶活性 高温使酶失活

柳州市18043551430： 过氧化氢酶的作用实验报告(过氧化氢酶的作用) ？
窦物尤尼： 1、动物的新鲜肝脏中含有过氧化氢酶.实际上,无论动物、植物、微生物,凡是好... 这就需要提到另外的一类酶——氧化酶. 氧化酶是过氧化物酶体中的一类主要酶类,...

柳州市18043551430： 回答下列有关过氧化氢酶实验的问题:(1)为验证过氧化酶具有高效性,同学甲设计了如下实验: 试管编 - ？
窦物尤尼： (1)①为验证过氧化酶具有高效性,应与催化剂比较,水不能做催化剂,B的催化剂用氯化铁,故答案为:B的催化剂用氯化铁;②过氧化氢性质稳定,不易分解,故答案为:过氧化氢不易分解;(2)酶是蛋白质,受热发生变性;探...

柳州市18043551430： 为什么探究ph值对酶活性的影响试验最好用过氧化氢酶? - ？
窦物尤尼： 因为它的活性很敏感 可以很显然看到实验现象

柳州市18043551430： 过氧化氢氧化对生物膜结构的影响 - ？
窦物尤尼： (1)题干说明为了研究用一定浓度镉、铜对河蚬过氧化氢酶活性的影响,实验组应是镉、铜以及镉+铜对其影响,因此a是镉.(2)无关变量是除了实验变量外的其他因素,如河蚬只数、河蚬生理状况、加入物质的量、培养时间等都可以.(3)测酶...

柳州市18043551430： 为什么要用过氧化氢酶验证不同ph值对其分解速录的影响 - ？
窦物尤尼： 过氧化氢酶在分解过氧化氢的时候会有气泡产生,更容易让人观察到实验的分解速度

柳州市18043551430： 影响酶活性的条件 实验报告 急、! - ？
窦物尤尼： 酶是一种活性蛋白质.因此,一切对蛋白质活性有影响的因素都影响酶的活性.酶与底物作用的活性,受温度、pH值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响. (一) 温 度 大曲和麸曲的酶活性,在低温干燥的条件下,...

柳州市18043551430： 下列实验设计不合理的是()A.用淀粉酶探究温度对酶活性的影响B.用过氧化氢酶探究PH对酶活性的影响 - ？
窦物尤尼： A、淀粉酶可以催化淀粉的水解,可以使用碘液来检测淀粉的水解程度,A正确; B、过氧化氢酶催化过氧化氢的水解,可以用过氧化氢酶探究PH对酶活性的影响,B正确; C、蛋白酶的本质是蛋白质,也可以与双缩脲试剂产生颜色反应,不能用双缩脲试剂做指示剂探究蛋白酶能使蛋白质水解,C错误; D、洋葱根尖成熟区细胞含有大液泡,可以用来观察植物细胞的质壁分离及复原,D正确. 故选:C.