CTAB法提取RNA的原理
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。2.不能完全抑制RNase的活性。氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。简言之，无论哪种抽提方法，药品的作用基本都是一样的
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（OligoT）可以与之配对结合，这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上，现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。
磁珠法一般是用生物素标记OligoT，亲和素标记磁珠（生物素和亲和素间具有高度亲和力）。实验时生物素标记的OligoT与mRNA的polyA高效杂交形成复合体，此复合体又与标有亲和素的磁珠结合。用磁性分离架就可以将这堆复合物分离出来。最后用无RNase去离子水将mRNA从复合物中洗脱下来即可。
寡聚dT纤维素柱层析法的大致流程：总RNA流经寡聚dT纤维素柱时，在高盐缓冲液中，带polyA尾的mRNA被特异地结合在柱上。降低盐浓度，mRNA被洗脱。一般过两次柱后，就可得到较高纯度的mRNA。
当然有些mRNA没有polyA尾巴，这种就比较难办了，我最近的实验就是在对付这种东西。如果你是拿mRNA做RT-PCR，其实一般是不必分离mRNA的，设计好引物就可以用总RNA做了。
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关于“食用药用真菌”方面的论文?
核糖核酸(mushroom RNA) , 可刺激诱导蛐 胞产生干扰素,抑制流感病毒的增殖。 以上抗细菌、真菌及病毒的真菌至少有3O 种,上述所列举的只不过是已知国内有记载的 各类大型真菌。 III.毒菌的药用价值 目前国内已查明毒菌1 90余种, 8属,26 科。下述种类具有特殊的药理活性。毒光盖伞 …… 后面字数超出了,这里放...
DNA提取 异丙醇需要灭菌吗
10、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg\/mlRNaseA,4℃保存。CTAB\/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg\/ml RnaseA加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染。每一步操作细致一些，得到的DNA可用于Southern blot。建议：长时间保存DNA可放于-20℃，但...
慈杰吲哚： CTAB是一种阳离子去污剂,可以有助于细胞裂解并具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),由于溶解度差异,CTAB与多糖形成复合物沉淀,但核酸仍可溶.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.
甘洛县19457264483： CTAB法提取DNA的原理,要详细些 - ？
慈杰吲哚： CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复...
甘洛县19457264483： 粗提取植物DNA的实验步骤和原理 - ？
慈杰吲哚：[答案] 提取植物DNA常用的方法是CTAB法.原理:CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有...
甘洛县19457264483： CTAB 法提取DNA的原理和步骤? - ？
慈杰吲哚： 1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中; (2)加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min; (3)小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯仿...
甘洛县19457264483： 植物dna提取的原理和方法?其中乙醇和氯仿一异成醇各起什么作用 - ？
慈杰吲哚： 植物DNA提取方法是采用CTAB法. CTAB,是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mol/L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1~0.5mol/L NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的...
甘洛县19457264483： DNA的提取、纯化全过程(非试剂盒) - ？
慈杰吲哚：[答案] DNA提取有很多种方法,SDS法,CTAB法,高盐低PH法,不同的材料方法会不同,像含多酚类糖类的材料就适合用CTAB法,总的来说DNA提取就是先把细胞破碎,一般是用液氮研磨然后再加入各种提取液,然后就使用酚氯仿异戊醇抽提然后就是...
甘洛县19457264483： 急!!SDS法与CTAB法提取细菌DNA中细胞裂解的机理 - ？
慈杰吲哚： 两者都是靠表面活性剂(SDS、CTAB)破裂细胞膜,从而释放细胞内核酸.建议在加入TE缓冲液后充分吹打重悬.在加入SDS或CTAB后也用枪头吹打几次.
甘洛县19457264483： ctab法提rna - ？
慈杰吲哚： ctab提取液的配方: 浓度为2%的CTAB; 浓度为20 mmol/L的EDTA; 浓度为100 mmol/L的Tris-HCl(pH值为8.0); 浓度为1.4 mol/L的NaCl; 浓度为1%的PVP.
甘洛县19457264483： rna的提取还有何种方法?是比较各自的优缺点? - ？
慈杰吲哚：[答案] 常见的的总RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法. RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)...
甘洛县19457264483： 植物染色体DNA的抽取及浓度测定 - ？
慈杰吲哚： 目的意义 DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质,它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用,是分子生物学和基因工程研究的对象,但无论是研究植物DNA的结构和功能,还是开展外源DNA的转化、转导的研究,首先要做的就是从植物组...
