PCR产物克隆的方法和优缺点
【TA 克隆的优缺点】
1、优点：
（1）是目前克隆 PCR 产物最简便、快捷的方法。
（2）不需使用含限制酶序列的引物，不需将 PCR 产物进行优化，不需把 PCR 产物做平端处理，不需在 PCR 扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。
（3）TA克隆选择灵活，如果一个位点不好使用，同一批质粒还可以用其他酶再切，随时可以扩增。
（4）方便下游作业，比如说要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。
2、缺点：
（1）PCR产物的酶切和判断比较困难。
（2）另外酶切连接过程本身也相当地费时费力。
【TA 克隆】TA 克隆方法（ Original TA Cloning Kit ）即利用 Taq 聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条 PCR 扩增产物的 3` 端自动添加一个 3`-A 突出端。利用 TaKaRa 的 T 载体，直接高效地连接 PCR 产物。随着基因组计划的进行，以及分子生物学技术、基因芯片技术在生命科学研究、生物工程和医学等领域的应用，对 TA 载体的需求量会逐步扩大。
一、缺点：
1、PCR产物的酶切和判断比较困难。
2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力。
二、优点：
1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法。
2、不需使用含限制酶序列的引物，不需将 PCR 产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理，不需在 PCR 扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。
扩展资料：
T-A克隆由于在PCR过程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分为2种情况：
1、使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上A，得到的DNA序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加A的过程，通常是以PCR回收产物为模板，加上一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分钟，然后将加A产物直接用于TA连接。
2、使用不同的Taq酶，在PCR扩增循环结束后，加上72℃ 10分钟一个过程，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。
参考资料来源：百度百科-T-A克隆
1.T/A cloning
这种克隆方式利用的是，一般PCR所用的DNA聚合酶具有在PCR产物3‘端添加一个碱基A的特性，也就是说，实际上常规PCR的产物并不是平末端的，而是有一个突出的A碱基，为了对PCR产物进行高效的克隆，人们开发出了一种专门用于PCR产物克隆的载体--T载体，T载体是一个线性化的载体，其末端是一个突出的T，正好与PCR产物上突出的A配对，所谓的T/A克隆就是将带有突出A尾巴的PCR产物与T载体连接，然后转化宿主菌的克隆，这种克隆效率非常高，很容易成功，应用也非常广泛，常用于下游克隆操作前的PCR产物测序鉴定和方便对PCR产物进行酶切处理。
2.Restriction stick end cloning
翻译过来就是限制性粘末端克隆，就是在PCR扩增引物的设计过程中，在引物中添加特定的酶切位点，这样经过PCR扩增后，得到的片段两端就带有需要的限制性酶切位点，对PCR产物进行酶切后，就可以直接与目的载体进行连接，实现克隆。这种方式省略了T/A克隆，一步到位，但是由于酶切位点位于片段末端，常常导致酶切效率较低，需要较长时间，必须设计好保护碱基。
3.Blunt-end cloning
所谓的平末端克隆，就是用Klenow片段将PCR产物末端突出的A碱基补平，然后与带有平末端的载体进行平末端克隆，平末端克隆效率很低，这种方式一般应用的很少，只是当PCR扩增所用的酶是高保真聚合酶如Pfu时，因为这种酶不会再PCR产物末端添加额外的碱基，PCR产物为平末端的，这时可能会用到平末端克隆，其实对这种PCR产物进行一个加尾处理，再进行T/A克隆，可能更加简单一些，呵呵。
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龙华区15636688960： ta克隆的优缺点 - ？
广趴康宝： 一、缺点: 1、PCR产物的酶切和判断比较困难. 2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力. 二、优点: 1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法. 2、不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理...
龙华区15636688960： 如何提高PCR产物克隆的效率 - ？
广趴康宝： 【TA 克隆的优缺点】1、优点:(1)是目前克隆 PCR 产物最简便、快捷的方法.(2)不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把 PCR 产物做平端处理,不需在 PCR 扩增产物上加接头,即可直接进行克隆.(3)TA克隆选...
龙华区15636688960： PCR技术和 基因工程的优缺点分别是什么 - ？
广趴康宝： PCR技术的优点是快速在体外拷贝所需要的DNA片段. PCR技术的缺点是技术含量高,循环过程复杂,需要一定的器材. 基因工程的优点是打破了常规育种难以突破的物种之问的界限,可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间,甚至...
龙华区15636688960： 关于生物PCR技术 - ？
广趴康宝： 首先pcr比较快,人体的dna从解旋到复制再到形成双联的dna分子是很复杂的,其次人体在复制dna的时候不排除有突变的可能,而pcr技术采用的是人工的将基因片段剪切和拼接,使用的是各种dna的酶,比如dna聚合酶就是最重要的一个,酶又是高效的催化剂,所以可以降低反应的时间和突变的可能而pcr技术采用的是人工的将基因片段剪切和拼接
龙华区15636688960： 如何确定TA克隆的方向 - ？
广趴康宝： 一般只能通过测序才能确定目的基因的插入方向.
龙华区15636688960： 从克隆载体上PCR出目的基因原理 - ？
广趴康宝： 克隆载体是环状双链DNA.PCR的原理: 首先,当热变性,模板双链分开成两条单链模板 然后,两条引物分别结合上各自的模板 聚合酶,催化dNTP等进行引物延伸,成为两对长链模板,由于延伸的时间只够完成目的基因的长度,是不足以完成整个环状的延伸的.所以得到模板的互补链是有头有尾的. 这是一个循环. 再热变性,刚刚由引物变成的模板,解开成两条单链.新引物分别结合到两条模板上,延伸.引物结合模板,不断的变成新模板. 当然,新模板以旧模板为模板合成.而引物特异性结合位点确定了新的模板的长度.
龙华区15636688960： 求PCR介导定点诱变的优缺点是什么? - ？
广趴康宝： 优点:1.突变体回收率高.一些改进的方案可使回收率达到近100%.2.快速简便.能用双链DNA作模板,不需制备单链模板,因而不需要将目的DNA亚克隆到单链噬菌体载体上.3.高温度的利用,可降低模板DNA形成二级结构的几率.4.所有反应可以在同一试管中进行. 缺点:1.PCR扩增DNA时会产生一定程度的碱基错配,除预定突变外常包含一些非预定突变.2.在扩增的DNA的3'末端加上非预设的碱基.3.对每套引物和模板,PCR反应都需要优化.4.标准PCR不能有效扩增大于3kb的DNA片段.
龙华区15636688960： pcr技术采用什么方法从不同dna分子中分离出等长的dna分子 - ？
广趴康宝： p完后跑个胶,在胶上位置一样的DNA分子等长,然后切胶回收即可
龙华区15636688960： 克隆技术的利弊 - ？
广趴康宝： 选自2000年11月8日《文汇报》 我们所说的生物技术的利和弊主要指的是克隆,其利和弊是 利:1) 克隆技术可解除那些不能成为母亲的女性的痛苦. 2) 克隆实验的实施促进了遗传学的发展,为“制造”能移植于人体的动物器官开辟了前景...
