凝胶过滤法分离蛋白质时,从层析柱上先被洗脱下来的是
选择a
凝胶法分离是根据被分离物质的分子大小,一是分子很小,能进入分子筛全部的内孔隙;二是分子很大,完全不能进入凝胶的任何内孔隙;三是分子大小适中,能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开,但每种凝胶分离范围之外的分子,在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同,但同属于凝胶分离范围内各种分子,在凝胶床中的分布情况是不同的:分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内,而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内,这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短,分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床,这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外,凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小排队,凝胶表现分子筛效应。
利用物质密度的不同,小分子蛋白质进入孔内.电泳迁移率的大小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以及分子大小:利用混合物中各组分理化性质的差异:硫酸铵,其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量,蛋白质溶液加于柱之顶部:利用透析袋膜的超滤性质,分布于不同的液层而分离. 4,称为盐析. 2、分子筛,均可引起蛋白质沉淀,在相互接触的两相(固定相与流动相)之间的分布不同而进行分离:又称凝胶过滤法.主要有离子交换层析1,因而在柱中滞留时间较长,吸附层析及亲和层析等.常用的中性盐有,溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好,可将大分子物质与小分子物质分离开.超速离心也可用来测定蛋白质的分子量. 3,大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出,凝胶层析、透析法,任其往下渗漏,因此不同大小的蛋白质得以分离、氯化钠.凡能与水以任意比例混合的有机溶剂,经超速离心后.盐析时、电泳法、硫酸钠等,以破坏蛋白质的胶体性质:在蛋白质溶液中加入大量中性盐、丙酮等,因此在电场中可以移动:蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷、超速离心、盐析与有机溶剂沉淀,蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比、甲醇、层析法,使蛋白质从溶液中沉淀析出. 6,如乙醇. 5
选择a凝胶法分离是根据被分离物质的分子大小,一是分子很小,能进入分子筛全部的内孔隙;二是分子很大,完全不能进入凝胶的任何内孔隙;三是分子大小适中,能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开,但每种凝胶分离范围之外的分子,在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同,但同属于凝胶分离范围内各种分子,在凝胶床中的分布情况是不同的:分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内,而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内,这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短,分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床,这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外,凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小排队,凝胶表现分子筛效应。
答案A
用凝胶过滤柱层析分离蛋白质是根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法,与蛋白质分子的带电状况无关.在进行凝胶过滤柱层析过程中,比凝胶网眼大的分子不能进入网眼内,被排阻在凝胶颗粒之外.比凝胶网眼小的颗粒可以进入网眼内,分子越小进入网眼的机会越多,因此不同大小的分子通过凝胶层析柱时所经的路程距离不同,大分子物质经过的距离短而先被洗出,小分子物质经过的距离长,后被洗脱,从而使蛋白质得到分离.
五类免疫球蛋白分离纯化的方法有何不同?
离子交换层析法:利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同,与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附,然后进行解脱,达到纯化蛋白质目的。常用载体:纤维素DEAE,带正电,吸附带负电的Alb、α、β球蛋白。凝胶过滤法:凝胶颗粒是网状结构,当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时,分子大的先下来...
如何根据蛋白质的配基特异型将其分离
蛋白质的配基特异型是指蛋白质分子表面的特定区域,这些区域能够与特定的配体(如抗体、酶的底物等)发生特异性结合。根据蛋白质的配基特异型将其分离的方法主要包括亲和层析、免疫沉淀、凝胶过滤等。1、亲和层析:亲和层析是一种利用蛋白质与特异性配体之间的亲和力来实现蛋白质分离的技术。在这种方法中,...
实验室测定蛋白质分子量的方法有哪些?
测定蛋白质分子量的常用方法:粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳、渗透压法、质谱法包括电喷雾离子化质谱技术和基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法(多角度激光散射)、沉降法(超速离心法)。1、粘度法 一定温度条件下,高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性,随着分子量...
简述凝胶过滤,离子交换和亲和色谱之间的区别
但是分辨率没有凝胶过滤高。亲和层析法:根据生物分子的特异性分离目的蛋白,特异性很高,但是配件容易丢失 适合含有特异性的标签的或者抗体。疏水色谱:根据疏水性来分离蛋白质,缺点是有的蛋白质在高盐中溶解度降低,所以应用范围受到限制,适合蛋白质表面含有较多疏水性氨基酸残基的疏水性蛋白质。
根据分子大小分离蛋白质的方法有哪些
1. 透析 利用蛋白质分子不能通过半透膜,使蛋白质和其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。2. 密度梯度离心。蛋白质颗粒的沉降系数不仅决定于它的大小,而且也取决于它的密度。3. 凝胶过滤 利用蛋白质分子大小,因为凝胶过滤所用的介质是凝胶珠,其内部是多孔的网状结构。当不同的分子大小的蛋白质...
蛋白质的纯化实验
2、凝胶过滤法 也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadex ged)和琼脂糖凝胶(agarose gel)。 (三)根据蛋白质带电性质进行分离 蛋白质在不同pH环境中带电性质和电荷数量不同,可将其分开。 1、电泳法 各种蛋白质在同一pH条件下...
干细胞生物学的免疫溶解法的分离步骤
以致超滤速度减慢,截流物质的分子量也越来越小.所以在使用超滤方法时要选择合适的滤膜,也可以选择切向流过滤得到更理想的效果 离心也是经常和其它方法联合使用的一种分离蛋白质的方法.当蛋白质和杂质的溶解度不同时可以利用离心的方法将它们分开.例如,在从大米渣中提取蛋白质的实验中,加入纤维素酶和α-...
蛋白的分离纯化步骤和所需实验器材,实验试剂
故B错误;C、二氧化锰难溶于水,所以可用过滤或蒸发的方法从H2O2溶液制氧气的残余物中分离出MnO2,故C正确;D、稀盐酸和硫酸钾溶液不反应、和硝酸银溶液反应生成氯化银白色沉淀、和碳酸钠溶液反应生成二氧化碳气体,所以可用稀盐酸区分失去标签的K2SO4、AgNO3和Na2CO3溶液,故D正确.故选B....
分子量分别为25 89 90 85的蛋白质用凝胶过滤法分离时应选择什么型号凝胶...
如果用的是SDS-PAGE胶。则25kda的可以用14% 聚丙烯酰胺,其他80以上的可以用8-10%的。
若用凝胶过滤法分离血红蛋白与肌红蛋白时哪一种蛋白质先被洗脱下来
血红蛋白先被洗脱下来 血红蛋白的分子量是67000,肌红蛋白的分子量是17000 凝胶过滤法分离原理是分子量越大的蛋白在流动相中的速度越快,所以会先被洗脱下来。
裔面重组:[选项] A. 分子量大的 B. 分子量小的 C. 电荷多的 D. 带电荷少的
偃师市19173318121: 用sephadex G凝胶过滤来分离蛋白时,总是分子量小的先下来,大的后下来吗 - ?
裔面重组: 不是的 是分子量大的先随流动相一起流出 分子量小的进入凝胶网孔 因此下来的比较慢 可以参考一下凝胶过滤的原理: 凝胶层析是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术.凝胶的孔隙犹如”筛眼”,当被分离的物质流过凝胶柱时...
偃师市19173318121: 蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么 - ?
裔面重组: 1. 根据分子大小不同进行分离纯化 2. 根据溶解度不同进行分离纯化 3. 根据电荷不同进行分离纯化
偃师市19173318121: 蛋白质的分离方法有哪些?它们各依据蛋白质的什么性质或特点? - ?
裔面重组:[答案] (一)水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要视有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解...