qpcr原理及应用是什么？
一、原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。
耐热DNA聚合酶-Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：
1、 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
2、 模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
3、 引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链；
重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
二、应用
1、基因表达分析：例如结核分岔杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种生长相当缓慢的细菌，传统培养及鉴定一般需要花数周时间。
2015年时Watanabe Pinhata和Cergole-Novella以自己发展的real time PCR检测mpt64，直接检测病人痰液中的结核分岔杆菌，分析715个检体657个病人，其检测灵敏度（sensitivity）及特异性（specificity）分别为90.3%及98.6%。
整个实验流程可以在5个小时内完成，此方法可以用于没有套装试剂（kit）可以使用的实验室。
2、检验生物芯片的结果；
3、siRNA与miRNA诊断；
4、基因型鉴定；
5、饮食分析；
6、兽医微生物检测。
特点
1、荧光实时定量PCR的基本原理有两个要点：首先是对PCR反应中的每一个循环的反应产物进行实时检测并记录下来；
其次，用于检测PCR产物实时检测的荧光染料标记在一段可以与单链PCR产物(模板)特异性杂交的探针上，并且处于淬灭状态，只有当探针与模板特异性结合以后才有可能释放出荧光信号。
2、每一轮循环中PCR的产出量都以荧光信号的形式被PCR仪的光学检测系统记录下来，在某一循环中荧光信号的强度达到预先设定的阈值时，此时的循环数称为CT(Threshold Cycle)，Ct值与起始的模板量成反比，起始的核酸量越多，达到阈值的循环数就越少，换句话说CT值会越小。
如果要确定量的话，需要做出标准曲线，以Ct值为纵坐标，起始模板数为横坐标作图。在新的MIQE规范中Ct这个惯用的名词被重新定义为Cq值(quantification cycle)。
简述pcr技术的原理
PCR技术的原理：利用DNA聚合酶在适当的温度下，将DNA模板的两条链分离，然后在模板DNA的两端引导的引物的作用下，通过DNA聚合酶的催化作用，将引物与模板DNA的单链互补配对，从而在每个引物的5'端开始合成新的DNA链，最终得到两个新的DNA分子。一、PCR特点 PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成...
pcr技术原理是什么
一、DNA复制原理 PCR技术的核心是基于DNA的复制机制。在适宜条件下，DNA解旋成为单链，以解旋后的单链为模板进行互补链的合成，从而实现对DNA序列的复制。二、PCR技术的具体过程 PCR技术包括三个基本步骤：变性、退火和延伸。在变性阶段，通过升高温度使DNA双链解开；在退火阶段，通过降低温度使引物与模板...
pcr的原理是什么
PCR原理是聚合酶链式反应，一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。PCR原理的详细解释如下：PCR的基本构成与过程 PCR主要由三个基本步骤构成：变性、退火和延伸。在PCR过程中，DNA模板在热稳定聚合酶的作用下，通过不断重复这三个步骤，实现特定DNA片段的指数级扩增。变性与退火 在变性阶段，PCR反应...
pcr反应的基本原理
2、通过PCR反应的信号产生，在杂交技术及全自动测序仪中得到了广泛应用，为现代实验研究带来了很大启示，也促进了生命科学的发展和技术革新。二、PCR反应原理：1、PCR反应原理主要包括3个步骤，分别是变性，引物结合，和延伸。PCR反应的第一步是变性，将双链DNA高温变性为两个单链。。2、接着第二步是...
rtpcr原理及应用
rtpcr原理及应用如下：RTPCR的中文名是实时荧光定量聚合酶链式反应。RT-PCR技术是一种检测病原体核酸的方法，主要用于检测病毒、细菌及其他微生物的核酸。RT-PCR以RNA为模板，利用聚合酶链式反应扩增其特定片段，然后通过荧光探针实时检测扩增过程中的产物，并将结果转化为数字信号，从而确定样本中该病原体...
什么是聚合酶链反应(PCR)?
聚合酶链反应（PCR）的基本原理是一种酶促合成反应。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下，在DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增延伸。试验先通过加热变性，使DNA双螺旋的氢链断裂，解离成单链DNA；然后通过退火，突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链；然后再在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸...
什么是PCR技术PCR的基本原理是什么
PCR技术也叫聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。PCR技术的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA...
试述PCR扩增的原理和步骤
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物 PCR扩增仪 延...
pcr技术基本原理
PCR技术基本原理 PCR技术是一种分子生物学技术，全称为聚合酶链式反应。其基本原理是通过DNA模板的复制，在体外快速扩增特定的DNA片段。具体解释如下：1. DNA模板复制 PCR技术的核心在于DNA的复制。在反应体系中，加入待扩增的DNA模板、能量、引物、能量以及DNA聚合酶等必要条件，通过一系列反应，使DNA模板...
荧光定量pcr(基本原理和应用领域介绍)
荧光定量PCR（qPCR）是一种广泛应用于生命科学研究和医学诊断的分子生物学技术。它结合了PCR技术和荧光检测技术，能够快速、准确地检测出目标DNA或RNA分子的数量，因此在病原体检测、基因表达分析、遗传疾病诊断等领域得到了广泛应用。基本原理 qPCR技术基于PCR技术，但是在PCR的基础上加入了荧光染料和检测系统...
员耍益心：[答案] (1)分析图解,Taq Man探针中含有碱基U,说明该探针为单链RNA,而质粒为小型环状DNA,因此与质粒相比,Taq Man探针中除荧光基团、淬灭剂外,特有的化学成分是核糖和尿嘧啶.(2)PCR技术的原理是DNA的双...
宁蒗彝族自治县18823842932： 甲胎蛋白基因(alpha - fetoprotein,AFP)的异常表达与肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤有关. - ？
员耍益心： 如果只检测是否表达,利用RNA反转录后PCR检测就好 如果要从转录水平检测表达量,要从RNA入手,一般有两种:qPCR,利用反转录得到的cDNA,做qPCR就能观察基因表达量的多少 RNA-seq,能得到所有转录组的信息,一般用于基因互作的分析
宁蒗彝族自治县18823842932： 请问qPCR检测的优点是什么? ？
员耍益心： qPCR检测灵敏度高,检测线性范围宽,检测精度和重复性好等突出优势,因此被公认为目前世界用于临床及科研的最先进核酸分子诊断技术,被美国FDA承认并推崇
宁蒗彝族自治县18823842932： qPCR技术新发展在哪些生物技术网站有详细的介绍？
员耍益心： qPCR(Quantitative PCR,定量PCR)技术具有准确度,灵敏度高等特点,它的诞生无疑是生命科学研究领域的福音,解决了不少实验难题,并且获得了大量重要的研究发现.随着科技的日益发展,这项技术也获得了不少创新发展,最近一篇题为...
宁蒗彝族自治县18823842932： 数字PCR检测方法如何选择? - ？
员耍益心： 数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术.相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量.在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你...
宁蒗彝族自治县18823842932： 请教下大神,实时定量PCR(qpcr)实验,看扩增曲线的意义是什么? - ？
员耍益心： 你好,扩增曲线可以粗略地判断扩增效率.SYBR Green的双delta Ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致.如果不一致,需要对公式进行修正,部分qPCR仪的配套软件可以做到,直接输入每对引物的扩增效率.但无论如何,保证高扩增效率是实验成功的关键.如果扩增效率一致,不同Ct的曲线显示出来就基本是平行的位移,其倾斜程度基本一致.而如下图一样,一条比较“陡”,另一条比较“平”,那么意味着扩增效率不一致.有可能是引物效率不一,或者个别样品、反应孔存在抑制PCR的污染等. 来自:肽度时界威客吴博士,有科研难题、科研需求就上肽度时界吧!
宁蒗彝族自治县18823842932： qpcr之sybr green染色法和taqman探针法的异同 - ？
员耍益心： taqman是探针法 SYBR Green是染色法 一般来说SYBR Green没有Taqman的特异性好,因为没有特异性的探针,但如果SYBR Green的结果是特异的(可以通过溶解曲线来验证)就没有问题. 反而有时候SYBR Green的扩增曲线要漂亮些.
宁蒗彝族自治县18823842932： 免疫PCR的基本原理和大致流程是什么 - ？
员耍益心： 博凌科为-为你解答:免疫-PCR主要由两个部分组成.第一部分是类似于普通酶联免疫吸附实验(ELISA)的抗原抗体反应.第二部分即常规的PCR扩增和电泳检测.免疫-PCR与ELISA的区别就...
