如何实现快速检测及有效控制沙门氏菌

怎样防治沙门氏菌病？~

沙门氏菌病又称副伤寒，是由沙门氏菌引起的各种家畜、家禽及野生动物以胃肠机能紊乱和败血症为特征的传染病。
（1）病原
沙门氏菌革兰氏染色阴性，不产生芽孢，也无荚膜，绝大部分沙门氏菌有鞭毛，能运动。在普通培养基上生长良好，需氧及兼性厌氧。最适生长温度为37℃。本菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在外界条件下可生存数周，在60℃条件下1小时，70℃条件下20分钟致死。一般常用消毒剂的常规浓度均能杀死本菌。
（2）流行病学
在自然条件下，貂、狐、貉均易感。本病主要经消化道感染，污染的肉类饲料和饮水等为主要传染源，多数沙门氏菌为条件性致病菌，在动物的肠道内寄生。当不卫生的饲养条件、气候的剧烈变化等致使动物抵抗力降低时，发生内源性感染。本病有明显的季节性，多在6～8月份呈暴发性流行。
（3）病理解剖
尸体营养状态取决于病期。胃空虚或有少量黏液样的液体，黏膜肿胀，有时充血，肝增大，呈暗红色或土黄色。脾脏多数病例高度肿胀，增大6～8倍。肾微肿，呈暗红色、灰红色或带有淡黄色。膀胱多空虚，黏膜上有散在的出血点。
（4）临床症状
自然感染潜伏期3～20天，平均为14天。人工感染时，潜伏期为2～5天。
根据机体抵抗力和病原的毒力，本病在临床上的表现是多种多样的，大致可分为急性、亚急性和慢性3种。当急性经过时，病兽拒食，先兴奋，后沉郁，体温升高到41～42℃，轻微波动于整个病期，只有在死前不久才下降。大多数病兽躺卧于小室内，走动时背弓起，两眼流泪，沿笼子慢慢移动，发生下痢、呕吐，在昏迷状态下死亡。一般经5～10个小时或延至2～3天死亡。
亚急性经过时，主要表现胃肠机能高度紊乱，体温升高到40～41℃，精神沉郁，呼吸浅表频数，食欲丧失。病貂被毛蓬乱无光，眼睛下陷无神，有时化脓性结膜炎。下痢，粪便呈水样，混有血液，衰弱无力，卧于笼中，后期麻痹，衰竭而死。慢性型表现为顽固性腹泻，贫血，毛焦蓬乱，卡他性胃肠炎，极度衰竭，经2～3周死亡。
（5）病理解剖变化
尸体营养状态取决于病期。大肠无明显变化，肝脏增大，呈暗红色或土黄色。脾高度肿胀，增大6～8倍。肾微肿呈暗红色。
（6）诊断
根据流行病学、临床症状和病理解剖变化，可作出初步诊断。确诊需进行细菌学检查。
（7）治疗
预防沙门氏菌病主要是把住饲料和饮水的卫生关。幼貂可接种沙门氏多价菌苗，分2次，间隔7天，每次1～2毫升。当发病时，对病貂和疑似病貂均应立即治疗。可随饲料投服新霉素，每次10万～15万单位，每天2次，连用5天；也可用氯霉素0.1～0.5克，连用5～7天。可应用仔猪副伤寒血清，皮下注射20～40毫升；也可用庆大霉素2万～4万单位，肌内注射。

为什么要检沙门氏菌？
据世界卫生组织的报告，1985年以来，在世界范围内，由沙门氏菌引起的已确诊的人类患病人数显著增加，在一些欧洲国家已增加五倍以上。在我国内陆地区，由沙门氏菌引起的食物中毒屡居首位。据资料统计，在我国细菌性食物中毒中，70%～80%是由沙门氏菌引起，而在引起沙门氏菌中毒的食品中，90%以上是肉类等动物性产品。动物性产品中含有多种丰富的营养成分，非常适宜于沙门氏菌的生长繁殖，人们一旦摄入了含有大量沙门氏菌（10E5～10E6个/g）的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素的作用下发生食物中毒。

沙门菌的快速检验手段有哪些？
PCR方法灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。

恒温PCR方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台恒温荧光检测仪，直接通过扩增曲线来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。

沙门氏菌(Salmonella)是一种革兰氏阴性肠杆菌, 也是肠杆菌科中最主要的食源性致病菌。据有关资料统计由沙门氏菌引起的疾病病例在病原菌食源性疾病病例中所占比例已超过三分之二，2007年发生的“ 花生酱事件”以及 2008 年发生的“ 西红柿 事件”等[1]沙门氏菌中毒事件的发生也使得食品中沙门氏菌的检测受到人们的普遍关注。本文主要是对食品中沙门氏菌的传统检测方法以及后续建立的以分子生物学、免疫学、生物传感器和电化学为基础的快速检测方法进行了系统的综述，旨在为该致病菌的检测方法的研究应用提供一定的参考。
1、 传统的检测方法（国标法）
目前, 我国对食品中沙门氏菌的检测大多采用GB 4789.4-2010《食品微生物学检验 沙门氏菌检验》对食品样品进行检测，这种传统的培养方法可分为前增菌、增菌、分离培养、生化试验和血清学鉴定等步骤进行。虽然传统培养法可靠性高，但是其操作繁琐且耗时费力，并不能满足食品快速检测的要求。
2、分子生物学检测方法
2.1聚合酶链反应技术
PCR技术是一项敏感性高、特异性强且快速准确的微生物检测技术，也被许多学者用于对食品中沙门氏菌进行检测和研究。汪琦等[2]就采用传统培养方法 、BAX(r)方法和PCR 方法 3 种方法对沙门氏菌进行检测。在常规PCR的基础上宋东晓[3]建立了检测食品中沙门氏菌的新的PCR方法——多重PCR。此外其他新的PCR技术也运用于食品中沙门氏菌的检测，钟伟军[4]通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索,建立了检测沙门氏菌的核酸荧光定量PCR方法，此研究为食品中沙门氏菌快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。
2.2核酸探针技术
核酸探针技术是根据核苷酸碱基互补的原理,在已变异的DNA样品中加入用同位素等标记的DNA特异片段，在一定条件下两片段进行杂交从而达到检测DNA的目的。此技术不仅简便、快速而且敏感性高、特异性强，已用于食品中沙门氏菌的检测。Almeida等[5]通过建立一种新颖的肽核酸探针结合荧光原位杂交方法对血液、粪便、水以及婴儿奶粉样品中沙门氏菌进行了检测，准确度高达 100%。
2.3基因芯片技术
基因芯片技术是利用已知核酸序列的探针与靶核苷酸序列杂交，然后通过信号检测对其进行定性与定量分析，在沙门氏菌等各种致病菌的分析检测中有很好的应用前景。饶宝等[6]通过建立检测致病菌的基因芯片检测方法，设计了通用引物和特异性探针: 沙门氏菌探针、大肠杆菌探针和金黄色葡萄球菌探针,实现了同时检测并区分沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的目的。祝儒刚等[7]运用多重 PCR 结合基因芯片技术建立了检测肉及肉制品中的大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌等5种食源性致病菌的快速检验方法。
2.4噬菌体裂解技术
噬菌体有特异性裂解细菌的作用。张碧波等学者利用此技术进行沙门氏菌
快速检测，结果和其他学者相同，据此得出特异性噬菌体可以检测出沙门氏菌，此法方便可行。姜琴等[8]利用噬菌体裂解对150份食品样品进行快速检测，结果说明肠杆菌科噬菌体组合对培养10h的沙门氏菌敏感性和特异性较高，这对实现沙门氏菌实时、快速而准确的检测有重要意义。
2.5环介导等温扩增技术（LAMP）
环介导等温扩增技术是2000年Notomi等开发的一种新的恒温核酸扩增方法,此方法的特点是特异性强、灵敏度高且简单、快速,适合对大规模样品的快速检测[9]。李佳桐[10]通过实验建立了沙门氏菌的LAMP检测方法,并将此方法与常规PCR进行比较,结果显示：LAMP方法对沙门氏菌的检测恒温65℃下只需要40min,只扩增沙门氏菌,不会扩增其他革兰氏阴性菌,最低可检出浓度10cfu/mL,比常规PCR的最低检出浓度高1个数量级,通过添加荧光染料SYBR Green Ⅰ,能够快速简便的观察检测出绿色的阳性结果十分明显的区别于橙色的阴性结果。
3、免疫学方法
3.1酶联免疫吸附技术
酶联免疫吸附法简称 ELISA， ,此技术敏感性高 ,不需特殊设备 ,结果观察简便，早在1977年就有报道将酶联免疫吸附法用于食品中沙门氏菌的检测。伍燕华等[11]设计捕获抗体和检测抗体，建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法对食品中的沙门氏菌进行检测。张帅等[12]建立双抗夹心ELISA体系，检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800CFU/g，等均并与其他血清型沙门氏菌、单增李斯特菌等菌均无交叉反应,特异性良好。
3.2免疫荧光标记技术
免疫荧光标记技术是根据抗原抗体的特异性反应，将荧光素标记在已知抗原(或抗体)上,与特异抗体(或抗原)结合后产生荧光，可用来定位抗原或抗体、并通过定量分析，确定测定含量。叶明强[13]基于纳米免疫磁珠富集,免疫量子点标记,建立了一种食品中沙门氏菌的含量进行快速检测的方法，研究出了一种新型的免疫荧光食源性致病菌检测技术。
3.3斑点免疫金渗滤法
免疫胶体金技术是以胶体金作为标记物结合免疫原理的一种应用于抗原抗体的新型技术，该技术运用最广泛的就是斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。孔繁德等及曹春梅等都利用此技术对沙门氏菌的快速检测进行了研究，曹春梅等[14]是利用斑点免疫金渗滤法对沙门氏菌O9抗原进行了研究，结果表明此法简单、快速，适合推广运用；孔繁德等[15]是通过建立直接检测沙门氏菌的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒对该菌进行了研究。
3.4免疫磁性分离技术
免疫磁珠分离技术是将特定病原体的单抗或多抗与磁珠微球偶联，并通过抗原抗体反应形成磁珠，在外加磁场作用下磁珠会发生定向移动，从而达到分离目标病原体的作用。食品样品中致病菌含量很少，常规的方法是很难从中分离出来的，借助免疫磁性分离技术可以达到快速分离的目的。王海明等[16]应用磁免疫技术建立快速检测食源性沙门氏菌的方法，结果表明此方法能对食品基质中的目标菌进行快速有效的富集,其检测限<10cfu/25g,检测周期约为40小时。胡霏[17]也通过实验针对鼠伤寒沙门氏菌建立免疫磁分离技术结合荧光层析技术的快速检测方法。
4、生物传感器技术
生物传感器是利用一些生物活性物质如酶 、多酶体系 、抗体等做为敏感器件，然后配以适当的信号传导器所构成的分析检测的工具。我国学者已采用此法对沙门氏菌的抗原、抗体的免疫吸附进行检测，并已用于快速检测食品中致病的沙门氏菌，而仅需 1h 完成，达到了快速的检测目的。宁毅[18]在对碳纳米管性质研究的基础上,结合分子探针构建了碳纳米管生物传感器，并将其用于沙门氏菌的检测，结果显示所构建的传感器灵敏度高、特异性强、稳定性好。
5、电阻抗技术
电阻抗法是近年发展起来的一项生物学技术，因为具有检测速度快、灵敏度高、准确性好等优点，目前此法已用于食品中沙门氏菌检测检验并已通过美国公职分析化学协会(AOAC)认可。陈广全等[19]建立了电阻抗法快速检测食品中沙门氏菌的方法，并将其与常规培养法进行比较，对食品中的沙门氏菌属进行检测,结果表明电阻抗法比传统培养法更加快速、可靠。
6、总结
综上所述，沙门氏菌检验技术正从传统的培养方法向分子检测方法改进，并向仪器化、标准化、自动化方向发展，并且食品安全、致病菌等问题对人类健康以及生活环境都造成了严重威胁，加强沙门氏菌检测势在必行。目前沙门氏菌快速检测技术大多具有检测迅速、灵敏度高、特异性强等特点，此外这些方法还具有各自的优点和局限性，在未来发展过程中需要我们不断改进和创新，建立更成熟可靠、方便快捷的沙门氏菌快速检测技术。

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