凝胶过滤层析法检测显示只有一条带
二者均不能。需要考虑纯化的原理。柱层析法的原理是根据蛋白质的分子量来进行纯化，所以可能存在和目的蛋白相同分子量的杂蛋白。（不考虑蛋白之间的相互作用）证明方法：可以用某种特定的蛋白酶去切蛋白质样品。切完后再过柱子。如果还有原来的峰则证明有杂蛋白存在。
第二种方法也类似。离子交换层析的原理是根据蛋白质的等电点来纯化的。
电泳法也是根据分子量来判断。超速离心是根据沉降系数来分离的。这些都没办法彻底排除杂蛋白的影响。要排除得去考虑蛋白质的氨基酸序列。这样才能彻底排除干扰。
凝胶过滤层析上样体积为什么只有1-2ml，如果体积大了会有什么影响
你说的洗脱体积之差是指两个组分的洗下来的体积?你这个问题第一次见,没有听说过样品体积要小于洗脱体积之差这种说法,你在哪里看到的.一般使用凝胶过滤层析,想要获得高分辨率,上样体积控制在柱床体积的0.5—4%,最好是2%,群组分离时可以达到30%,小于0.5%没有意义了.另外,目前市面上分辨率最好的柱料是GE的Superdex,手填柱子的话可以达到10K分辨率.预装柱应该更高,但是十分昂贵,没有试过.其他柱料分离的分辨率要求两种蛋白的分子量相差一倍以上,如果不满足这个条件,大多是骗人的.还有柱料的选择,缓冲液的选择和样品的处理等等很多条件都影响了凝胶层析的效果.
可以用目的蛋白的等电点去测试是否含有杂蛋白。
或者你可以尝试用不同的水解酶处理蛋白，看看是否出现与目的蛋白不一致的条带。
凝胶过滤层析图谱怎么看
凝胶过滤层析图谱分析方法。1、凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。2、分级分离各种抗原与抗体。3、去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片。4、分析血清中的免疫复...
凝胶过滤层析如何实现样品浓缩、脱盐、更换缓冲液?谢谢各位啊!_百度...
而在后面,我是这样猜测的,关键你要测定活性,所以你再纯化也没有活性,问题在于你没有时时做活性检测,填料选择不很正确,检测波长我不清楚对不对,关键你要选择合适的柱子,同时每一步都做活性检测.我确实是对每个峰都作了抑菌实验,Sephadex G15的每个峰都有抑菌活性.粗提物上G200只得到了一个吸收峰,...
血红蛋白凝胶过滤层析所需仪器、用具、物品和实验的具体方案
二、实验原理 凝胶层析：原理与应用 凝胶层析又称凝凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子无法进入凝胶颗粒中的静止相中，只能存在于凝胶颗粒之间的流动相中，因而以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝...
按层析原理分类有哪几类层析
分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。2、特点 各种薄层层析的原理与其对应的柱层析原理相同，但比其相应的柱层析具有更多的优越性。它同柱层析一样，可选择不同的支持剂和不同的处理方法进行薄层层析，它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点。同时，层析...
简述凝胶过滤,离子交换和亲和色谱之间的区别
凝胶过滤色谱法：分辨率较高，但是上样量仅为柱体积的1%，而且对流速也有严格的限制。离子交换色谱法：根据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质，但是分辨率没有凝胶过滤高。亲和层析法：根据生物分子的特异性分离目的蛋白，特异性很高，但是配件容易丢失 适合含有特异性的标签的或者抗体。
蛋白质脱盐有哪些方法
1. 透析法是一种脱盐手段，通过半透膜使溶液中的小分子盐离子透过膜而蛋白质保留在膜的一侧，达到分离目的。2. 电透析法是利用电场力驱动离子移动，通过半透膜实现脱盐的过程。该方法相比透析法有一定的优势，但同样不适用于大规模工业生产。3. 凝胶过滤层析法（也称为分子筛层析法）利用固定相（凝胶）...
凝胶过滤法和凝胶过滤层析一样吗
一样。凝胶过滤法和凝胶过滤层析一样，凝胶层析也称凝胶过滤法，是20世纪60年代发展起来的一种简便有效的生物化学分离分析方法。
...大肠杆菌与内毒素的爱恨情仇——人类【纯化】花式“劝分”方法...
2. **疏水层析**：在高盐条件下，内毒素形成复合体，不与疏水填料结合，以流穿形式去除。此法适用于对盐浓度变化不敏感的蛋白，通过研究不同盐浓度，优化去除效果。实例显示，使用疏水层析有效降低了样品中的内毒素。3. **凝胶过滤层析**：基于内毒素与目标蛋白分子量差异，通过凝胶过滤层析实现分离...
列举蛋白质的分离纯化方法,并分别阐明其原理。
④分子筛(凝胶过滤层析)根据性质：蛋白质的高分子性质。作用机制：凝胶过滤树脂颗粒呈多孔状结构，在层析过程中，蛋白质小分子能进入树脂颗粒的孔，因而路径长，后洗脱出来；较大的蛋白质分子不能进入孔，路径短，先洗脱出来。影响因素：分子大小及形状。⑤离心 根据性质：蛋白质的高分子性质。作用机制：...
经初步纯化后的蛋白质样品,如果用层析法检测显示只有一个峰,是否可以认...
二者均不能。需要考虑纯化的原理。柱层析法的原理是根据蛋白质的分子量来进行纯化，所以可能存在和目的蛋白相同分子量的杂蛋白。（不考虑蛋白之间的相互作用）证明方法：可以用某种特定的蛋白酶去切蛋白质样品。切完后再过柱子。如果还有原来的峰则证明有杂蛋白存在。第二种方法也类似。离子交换层析的原理...
郟耍瑞潘： 说明你的目的蛋白和杂蛋白的分子量大小接近.可以用目的蛋白的等电点去测试是否含有杂蛋白.或者你可以尝试用不同的水解酶处理蛋白,看看是否出现与目的蛋白不一致的条带.
天河区13359205177： 经初步纯化后的蛋白质样品,如果用层析法检测显示只有一个峰,是否可以认为该纯化样品只含有一种蛋白?这两道题一个问法,就是略有区别在所用的层析... - ？
郟耍瑞潘：[答案] 二者均不能.需要考虑纯化的原理.柱层析法的原理是根据蛋白质的分子量来进行纯化,所以可能存在和目的蛋白相同分子量的杂蛋白.(不考虑蛋白之间的相互作用)证明方法:可以用某种特定的蛋白酶去切蛋白质样品.切完后再...
天河区13359205177： 一个蛋白质样品,在某一条件下电泳,结果显示一条带,为什么不能证明该样品是纯的? - ？
郟耍瑞潘： 有可能是两种分子量相近的蛋白质混合在一起,电泳结果是一条带应该至少用两种方法分析样品才可以证明样品是纯的
天河区13359205177： 质粒的酶切后琼脂糖凝胶电泳检测 在紫外光下应该出现几条带? - ？
郟耍瑞潘： 最好的酶切结果当然是只有两条条带,如果旁边再跑一个没有酶切的质粒和一个空载(同样的载体但是没有目的片段的质粒)作为对照那会很好说明问题:这两条条带应该是一条很明亮,位置较高(酶切下的线性载体),粗一些,理论上是下面...
天河区13359205177： G - 75凝胶过滤色谱图出现拖尾现象,怎么回事? - ？
郟耍瑞潘：[答案] 拖尾峰可能是你的柱子装填的不好,装填的填料太过疏松就会有拖尾峰. 如果柱子装填没有问题,可能是你的样品本身的结构可能不是非常均一,有部分聚体的结构也有可能出现拖尾峰的情况.
天河区13359205177： 全长cDNA PCR - ？
郟耍瑞潘： 首先保证你的cDNA的质量.你的基因5'UTR和3'UTR多长?如果5'UTR过短导致你的CDS起始密码子过于靠近cDNA5'端,那么即使少量的降解也会大大降低你的扩增效率.其次,如果你保证了cDNA的质量,那么产生的过大条带可能是不同的剪接本.你应该详细检查你的序列是否存在具有多个剪接本的可能.还有,我怎么没听说过gateway载体不能用凝胶回收的?很多实验室都是胶回收后连接gateway载体的,只不过洗脱的时候用dd水洗脱就行了.
天河区13359205177： 按照试剂盒提取的质粒,应该出现几条带啊?为什么我只有两条条带出现呢?请高手指点!谢谢!! - ？
郟耍瑞潘： 用酚、氯仿法从工程菌中提取的质粒一般有三种构像,即超螺旋,线形和开环.(开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链,因此电泳速度最慢)三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环,线形的质粒在中间,而开环...
天河区13359205177： 凝胶过滤层析的基本原理 - ？
郟耍瑞潘： 凝胶过滤层析又称为排阻层析或分子筛方法.其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相(凝胶)具有分子筛的特点,将被分离物质各成分按分子大小分开,达到分离的目的.层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联...
天河区13359205177： 凝胶过滤层析法加样是应注意哪些问题?？
郟耍瑞潘： 一般分为三个步骤:装柱、加样、洗脱淋洗. 装柱是需要注意的是:【1】垂直放置 【2】放置产生气泡 【3】放置柱分层 加样时,【1】加样前打开出口,使展开剂流出,至正好露出凝胶上平面时,立即关闭出口 【2】加样时,用滴管缓缓沿柱内壁加入柱子 【3】打开柱子得出口,使待分离的样品进入柱子. 加样完成后,进行洗脱.
