请问做液相色谱时在什么样的情况下必须进行梯度洗脱?这跟流动相的种类有无关系?
【梯度洗脱】又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。
进行梯度洗脱可以达到以下目的：
1、缩短分析周期；
2、提高分离能力；
3、峰型得到改善，很少拖尾；
4、增加灵敏度，但有时引起基线漂移。
流动相配制没比例，可以分别配制，用二元泵或四元泵控制流动相比例流速。。。进行梯度洗脱
讨论这个问题，必须要先讨论等度洗脱和梯度洗脱相比：等度洗脱优点是流动相比例不随时间进行变化，这样，能最大限度保证压力稳定，基线平直，在连续进样时，可随时停止，如果上一针有没有跑出来的峰，下一针也能直接看到，不会漏检峰，还有就是在一般性外标或内标时，当样品出峰较晚时，可采用简单方法极快检测。举例：假如主峰在10分钟出峰（无其它干扰峰），你正常进一针，然后等两三分钟再进一针，再等两三分钟进一针，这样一共运行20分钟就出了三个峰，这样的方法对标准样和样品的检测时，能极大缩短时间。而此方法用梯度是不可行的。所以等度洗脱在内外标时作用最大。
梯度洗脱是等度的辅助，但这些年一般的归一化检测已经取代了等度。主要是因为，等度洗脱如果出峰较多时，就会使各峰峰宽出现前窄后宽，积分上也有歧视现象，还有就是等度洗脱有的出峰过早有的过晚，还有的两峰相隔过宽或过窄，这时，梯度的作用就非常明显了。它可以把出峰过早的峰用低有机相-高水相向后拖动，便于分离，还能把后面出峰较晚的峰用高有机相-低水相提前跑出来。这样的好处不仅能节约时间，还能使各峰峰型都比较窄，积分更准了。
用梯度和等度与流动相也有一定关系。比如正相色谱时是不能用梯度的，在反相色谱时，等度，梯度都可以使用。
这个我真的不知道。。
请说明下液相色谱的原理以及操作时候的注意点
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9´107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。 特点1.高压:液相...
液相色谱仪使用步骤是什么?
另一类为梯度洗脱法(gradicntclution),即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比，从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离，而整个色谱过程缩短。必须注意，梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中...
液相色谱,对被检测物有什么要求么,使用液相色谱应该做些什么准备
对被测物只要求样品能制成稳定的溶液。液相色谱不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。使用前应对被测物的组成、性质（光谱信息、溶解性、化学结构）有一定的了解，针对以上信息来决定使用何种固定相...
操做液相色谱时影响保留时间的变化的因素有哪些?
影响液相色谱保留时间的因素：1、流动相的比例与极性。对于不同的柱子，分离度和保留时间往往都会有点差别，所以在操作的时候：a、可以适当调整流动相的比列，如甲醇—水（90:10），如分离效果与保留时间延长，可以调整88:12或者92:8或者95:5等。b、有时候还需要更换流动相的组成，甲醇就可以换成乙腈...
液相色谱和质谱联用建立方法时应考虑哪些问题?麻烦简要概况下几点特别...
我认为要考虑以下几点：一 所要检目标药品的物理和化学性质，看是否能使用流质联用，例如，是否易分解；沸点多少；……二 确定所要检目标药品能使用液质联用后，开始调机，先做质谱方法，并进行优化，再调液相方法。说得比较泛，操作是注意东西很多，例如调喷雾针呀，选合适的添加剂呀，乱七八糟的...
高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么
阀件，管路中析出盐的结晶，细小的晶体极为坚硬，容易对色谱柱，单向阀，柱塞泵造成损坏。因此使用盐作为缓冲溶液的液相色谱仪在分析完成后，要及时使用适合的溶剂对系统进行冲洗，尽可能将系统中的盐晶体洗脱，否则长时间不处理，将极大损害液相色谱仪的使用寿命，无论进口，国产液相均如此。
请假大家,液相色谱仪的期间核查怎么做得啊
测量值按统计学方法计算。（4）判定准则：定性测量重复性（6次测量）小于等于1.5 定量测量重复性（6次测量）小于等于3.0 【液相色谱仪期间核查周期】期间核查周期为1年，时间安排在检定周期中间进行。若对仪器的检测的准确性产生怀疑、仪器有搬动或进行对仪器校准状态有影响的维修后，均应进行核查。
液相色谱梯度洗脱中柱温有什么影响?如题 谢谢了
许多色谱工作者在操作液相色谱时，色谱柱是在室温环境下工作的。如果实验室的温度能保持不变的话，不会有什么大问题。但大多数的工作环境温度是不断变化的，因此若想将在某实验室开发的一种液相色谱方法应用到其他实验室的话，温度的差别就会引起较复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在...
高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么
sunmaocheng(站内联系TA)是不是在跑液相开始的时候,用磷酸钾缓冲液和纯乙腈先梯度洗脱?huanghaiyu(站内联系TA)只要盐完全溶解,一般不会有问题的,如果你确实很担心,就把乙腈和盐按照你的比例混合好,然后装在一个瓶子了,再进样品,这样就没问题了,使用完清洗的时候首先要用95%的水冲洗,避免残留.痴客...
在做液相色谱时理论塔板数忽高忽低的是什么原因
色谱工作站计算理论塔板数的时候一般采用的公式是5.54（半高峰宽\/保留时间）2（平方），你这两次结果由于第二个峰拖尾（所以拖尾因子也不一样），且出峰时间稍有提前，计算出的理论塔板数就会不一样。解决方法：先严格控制各项色谱条件，保证重现性，如果不行就采用手动积分模式。
劳宗英特： 讨论这个问题,必须要先讨论等度洗脱和梯度洗脱相比: 等度洗脱优点是流动相比例不随时间进行变化,这样,能最大限度保证压力稳定,基线平直,在连续进样时,可随时停止,如果上一针有没有跑出来的峰,下一针也能直接看到,不会漏检...
城东区19739237034： 液相色谱操作应注意哪些问题 - ？
劳宗英特： ① 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动.温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述). ...
城东区19739237034： 液相色谱所用流动相使用时应注意哪些问题 - ？
劳宗英特： 1、流动相恢复到室温后使用.流动相温度与室温相差时,流动相在恢复到室温前,基线水平很难稳定,特别是发生漂移,也容易产生气泡等现象.水与有机溶剂混合时,混合液变化大,往往会与室温相差很大,务必注意. 2、做HPLC流动相的...
城东区19739237034： 液相的色谱条件 - ？
劳宗英特： 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等.高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析.该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术.
城东区19739237034： 高效液相色谱法在分析实际样品时有哪些应用 - ？
劳宗英特： 1,为进行分离,可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化.如果熟悉液相色谱,这是非常有利的,但对初学者来说,这是困难的.2,适用样品范围广,80%的分析对象可借此法分析.3,可以使用高效的分离柱,易于分离复杂的多...
城东区19739237034： 如何用高效液相色谱法测定未知样品 - ？
劳宗英特： 高效液相色谱,其实就是一个将样品中复杂成分进行分离处理的工具,能不能分离,分离的好不好,还受制样水平,使用的柱子和溶剂合理不合理,等方面的限制.即使你都分离好了,不通过核磁、质谱、红外、紫外等其他仪器的帮助,也不能确认你的未知样到底是什么.
城东区19739237034： 液相气相色谱的操作步骤 - ？
劳宗英特： 气相色谱操作规程及注意事项: 1.气相色谱仪简单操作流程 1.1 反时针方向开启载气钢瓶阀门,减压阀上高压压力表指示出高压钢瓶内贮气压力. 1.2.顺时针方向旋转减压调节螺杆,使低压压力表指示到要求的压力数. 1.3开启主机电源总开关...
城东区19739237034： 如何使用液相色谱 - ？
劳宗英特： 原发布者:jing2595832液相色谱基础知识2017年04月11日一、什么是色谱色谱是一种分离工具,而不是传统意义上的分析仪器.色谱法也叫层析法,它是一种高效能的物理分离技术,将它用于分析化学并配合适当的检测手段,就成为色谱分...
城东区19739237034： 气相用的溶剂比液相用的溶剂级别高吗 - ？
劳宗英特： 这个不存在哪一个用的级别应该更高或更低的问题,要根据具体情况分析.对于液相色谱的流动相,一般要求必须使用色谱纯.因为如果不用这个级别的,不但有时会出杂峰,更重要的会使用本底增高.在气相色谱或液相色谱的用于溶解样品的...
城东区19739237034： 液相色谱在进样时要注意些什么? - ？
劳宗英特： 应当注意以下几问题: (1)样品在流动相中最好是可溶的,如果可能的话,应当用流动相溶解样品,它可使色谱图中低k'段的虚假峰尽可能减少 (2)选择合适的进样阀或注射器.般说来只要选择适当,都能获得很好的重复性.在选择进样阀...
