自行设计大黄药材成分的提取，分离，鉴定试验

大黄的实训设计方案包括提取、分离、鉴定（要写原理、对象、方法、过程）~

大黄中羟基葸醌类化合物多数以苷的形式存在，故先用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游离葸醌可溶于热氯仿的性质，用氯仿将它们提取出来。

大黄中大黄素的提取、分离和鉴定
（1）酸水解
一、实验目的
1、学习酸水解的方法
2、得到大黄粉酸水解药渣
二、实验原理
大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在，为得到游离蒽醌类化合物，先酸水解，使蒽醌类化合物以苷元的形式游离出来。
三、方法
10g大黄粉
20%H2SO4直火回流加热1小时，抽滤
滤渣
水洗中性，干燥
滤饼
四、注意事项
1、药粉在水洗中性过程中尽量避免损失；
2、药渣干燥前要松散；
3、水解液酸性强，避免用手直接接触。
五、思考题
1、酸水加热为什么要用回流装置？
2、要得到大黄中的蒽醌苷元，还有什么办法？


（2）总羟基蒽醌苷元的提取

一、实验目的
1、学习连续回流提取方法
2、得到大黄中总羟基蒽醌苷元提取物
二、实验原理
苷元为亲脂性成分，用乙醚提取。
三、实验方法
滤饼
置索氏提取器中，加150ml Et2O,
提2.5hr（提取液无色）
Et2O液（大黄中总羟基蒽醌苷元）
四、注意事项
1、纸筒的包法：原则是药粉不漏出
2、提取器的装法
（1）纸筒的高度不超过侧管的高度；
（2）药粉的高度不超过虹吸管的高度；
（3）线头在管内，保持提取器闭封。
3、溶剂的倒法
50ml由提取器上端倒入，浸泡药粉；100ml倒入平底烧瓶中。
4、温度的控制
溶剂蒸气至冷凝管第二个球处，水浴温度约60℃。
5、实验室禁止明火，实验过程中保持通风，尽量避免乙醚挥出。
6、平底烧瓶要干燥。
五、思考题
1、同回流提取相比，该方法的优点？
2、还可选用哪些溶剂提取？
3、若平底烧瓶中有水，将会有什么结果？
4、为什么温度控制在溶剂蒸气至冷凝管第二个球处？


（3）PH梯度萃取

一、实验目的
1、学习PH梯度萃取的方法和原理
2、得到大黄素粗品
二、实验原理
依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用强弱不同的碱水萃取，得到大黄素。
三、实验方法
1、 分离方法
乙醚液（T）
↓120ml(40mlX3)2.5%NaHCO3
↓-------------------------↓
乙醚液（1） NaHCO3液
↓120ml(40mlX3)2.5%Na2CO3
↓--------------------------↓
乙醚液（2） Na2CO3液
↓120ml(40mlX3)2.5%Na2CO3 ↓调 pH3
↓－－－－－－－－↓ 沉淀 　　
Na2CO3液 乙醚层（3）
↓100ml(25mlX4)0.5%NaOH
↓－－－－－－↓
NaOH 乙醚层（4）

2、TLC跟踪检查
硅胶-CMC-Na
展开剂：Pet-EtOAc(7:3)
样品：乙醚液（T，1-4）
四、注意事项
1、分液漏斗使用前检查是否漏。
2、乙醚提取液倒入分液漏斗中，若有沉淀留在瓶中，用待萃取的碱液洗后再倒入分液漏斗中，直至沉淀全部被溶解。
3、产生乳化层，解决的方法是：
（1）轻摇；
（2）长时间静置；
（3）用电吹风加热
（4）玻棒搅动
（5）抽滤
4、待完全静置分层后放出水层。
五、思考题
1、萃取时碱水层的颜色？
2、比较五种蒽醌类化合物极性大小、酸性大小。
3、在TLC中，五种蒽醌类成分Rf值的大小顺序？
4、萃取大黄素时，碱水中若含少量乙醚，酸化后能得到沉淀吗？
5、判断各种蒽醌类成分分离的依据是什么？
6、你能设计出比该方法更完善的实验条件吗？写出实验方法及验证方案。


（4）柱色谱精制大黄素

一、实验目的
1、学习硅胶柱色谱分离方法
2、得到大黄素精品
二、实验原理
依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异分离。
三、实验方法
1、装柱方法：100~200目硅胶10g，用脱脂棉填柱子底端。
要求：均匀，柱面平整紧密无气泡。
干法装柱：小漏斗法，下端活塞打开，硅胶均匀地倒入柱中；
湿法装柱：硅胶用洗脱剂拌均匀至无气泡，下端活塞打开，倒入柱中。
2、加样方法
要求：原始色带小，均匀。
干法上样：样品用少量丙酮溶解后，加少许（半牛角匙）硅胶拌匀，将丙酮挥尽后上于柱顶端。
湿法上样：样品用少量（<1ml）洗脱剂溶解，用吸管移入柱顶端。
3、洗脱收集：加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用瓶子分段收集。
分段标准：（1）色带颜色
（2）10~15ml/瓶
洗脱剂：Pet-EtOAc(7:3)
4、合并浓缩：TLC跟踪检查，合并大黄素液，回收至5ml左右。
5、放置析晶
四、注意事项
1、玻璃器皿干燥，无水；
2、装柱时，下端活塞应打开；
3、洗脱剂不能低于柱平面。
五、思考题
1、比较湿法装柱与干法装柱的特点？
2、比较湿法上样与干法上样的特点？
（5）鉴 定

一、实验目的
1、蒽醌类化合物的颜色反应
2、大黄素熔点的测定
二、实验内容
1、熔点：大黄素（256~257℃）
2、颜色反应：比较大黄素与茜草素的颜色区别 ( 纸片反应)
试剂：%NaOH，0.5% MgAc2
三、思考题
1、大黄素、茜草素定性反应后的颜色？结构与呈色的关系？
2、其它鉴别方法

大黄可减轻内毒素性低血压，消除氧自由基，降低再灌注期血浆、肺、小肠等内源性一氧化氮的水平，降低肠、肝、肺毛细血管通透性，减轻内毒素引起的肠壁血管通透性增加，防止肠道细菌移位及内毒素进入血循环等等。临床可用于严重创伤、感染性休克、MODS等危重病预防及治疗胃肠功能衰竭。我们的经验：生大黄30克煎成100ml，灌肠或口服，100ml,1-3次/日，亦可灌肠和口服并用。直到肠鸣音恢复开始减量　大黄含有蒽类衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸类、挥发油类等。
　　1. 蒽类衍生物分为：⑴ 游离蒽醌衍生物，如芦荟大黄素（aloe emodin）、土大黄素（chrysaron）、大黄酚（chrysophanol）、大黄素（emodin）、异大黄素（isoernodin）、虫漆酸D（laccaic acid D）、大黄素甲醚（physcion）、大黄酸（rhein）；⑵ 结合蒽醌化合物，有大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚的单和双葡萄糖甙；大黄素、大黄素甲醚的单糖甙；蒽酚和蒽酮化合物：大黄二蒽酮（rheidin）、掌叶二蒽酮（palmidin）以及与糖结合的甙如番泻甙（sennoside）A、B、C、D、E、F等。
　　2. 苷类化合物：土大黄甙（rhaponticin）、3，5，4’-三羟基芪烯一4’-O-β-D-（6’-O-没食子酰）葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy-stilbene－4’-O-β-D-（6’-O-gallayl）-glucoside）、3，5，4’-三羟基茋烯-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy stilbene-4’-O-β-D-glucopyranoside）。
　　3. 萘衍生物：torachrysone-8-O-β-D-glucopy ranoside，torachrysone-8-（6′-oxaly）-glucoside及决明松（torachryson）。
　　4. 鞣质类：没食子酰葡萄糖、d-儿茶素、没食子酸、大黄四聚素（tetrann）等。大黄四聚苯经水解，得没食子酸、肉桂酸及大黄明（rheosmin）。此外合有树脂。
　　尚含有有机酸：苹果酸、琥珀酸、草酸、乳酸、桂皮酸、异丁烯二酸、柠檬酸、延胡紊酸等。
　　大黄中还含有挥发油、脂肪酸及植物甾醇等。本品横切面：根木栓层及皮层大多已除去。韧皮部明显；薄壁组织发达。形成层成环。木质部射线较密，宽2～4列细胞，内含棕色物；导管非木化，常1至数个相聚，稀疏排列。薄壁细胞含草酸钙簇晶，并含多数淀粉粒。根茎髓部宽广，其中常见黏液腔，内有红棕色物；异型维管束散在，形成层成环，木质部位于形成层外方，韧皮部位于形成层内方，射线呈星状射出。粉末黄棕色。草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成。
　　取本品粉末少量，进行微量升华，可见菱状针晶或羽状结晶。
　　取本品粉末0.1g，加甲醇20ml浸渍1小时，滤过，取滤液5ml,蒸干加水10ml使溶解，再加盐酸1ml,置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g,同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸(155:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。
　　【检查】
　　土大黄苷 取本品粉末0.2g，加甲醇2ml,温浸10分钟，放冷，取上清液10μl,点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。
　　干燥失重 取本品，在 105℃干燥6小时，减失重量不得过15.0％（附录Ⅸ G）。
　　总灰分 不得过10.0％（附录Ⅸ K）。
　　酸不溶性灰分 不得过0.8％（附录Ⅸ K）。
　　【含量测定】
　　照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。
　　色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
　　对照品溶液的制备 精密称取大黄素、大黄酚对照品各5mg，分别置50ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1ml、大黄酚溶液2ml，分别置25m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含4μg、大黄酚每1ml中含8μg)。
　　供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.1g[同时另取本品粉末测定水分(附录ⅨH 第二法)]，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次约8ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
　　本品按干燥品计算，含大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量不得少于0.05％。

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茅箭区18059675555： 大黄的回流提取给出合理的实验设计,顺利从大黄粉中利用乙醇回流提取 ？
战清乙酰： 1.因你是大黄粉,故判定是熟大黄,加入白酒10公斤,拌匀,用文火煮约10-20分钟,取出,除去大黄粉即可. 2.如是生大黄,需先用水浸泡6-8小时捞出,浸泡的水澄清后倾入锅内.每百公斤原干药加辅料(鲜?前草10公斤,鲜侧柏叶10公斤),与大黄分层放入锅内,用武火煮4-6小时,煮至水近干时,再按上面一的程序去做,但要除去?前草.侧柏叶. 3.以浸出物(水.醇)含量为指标,以10小时的炮制品其浸出物含量最高.

茅箭区18059675555： 某中药含有大黄酚 芦荟大黄素 大黄素甲醚等成分,设计合理的 提取 分...某中药含有大黄酚 芦荟大黄素 大黄素甲醚等成分,设计合理的 提取 分离流程 - ？
战清乙酰：[答案] 大黄酚:A 芦荟大黄素:B 大黄素甲醚:C 中药 l 乙醇回流 l 浓缩 浸膏 l 乙醚萃取 药渣 乙醚液(A B C) l 0.5%NaOH水溶液萃取 碱液(B) 乙醚液(A C) l 盐酸 l 硅胶或磷酸氢钙柱色谱 石油醚-苯洗脱 沉淀(B) 先出A 后出C 这是提取流程,

茅箭区18059675555： 如何使用ph梯度萃取法提取分离大黄中蒽醌类化合物 - ？
战清乙酰： pH梯度萃取法的原理是由于溶剂系统pH变化改变了它们的存在状态(游离型或解离型),从而改变了它们在溶剂系统中的分配系数.根据蒽醌的α与β位羟基酸性差异及羧基的有无,使用不同碱液(5%NaHCO3%Na2O31%NaOH5%NaOH)依次从有机溶剂中萃取蒽醌类成分,再分别酸化碱液,蒽醌类成分即可析出沉淀.希望对你有帮助

茅箭区18059675555： 根据大黄中游离蒽醌性质,除用双相酸水解法提取外,尚可用 哪些提取方法 - ？
战清乙酰： 本发明涉及植物药中有效成分的提取方法,具体涉及从植物药中提取、分离蒽醌类化合物的方法.蒽醌(anthraquinone)是具有如下骨架的化合物的总称.蒽醌类化合物包括了其不同还原程度的产物和二聚物,如蒽酚(anthranol)、氧化蒽酚...

茅箭区18059675555： 大黄的游历羟基蒽醌怎么提 - ？
战清乙酰： 大黄素市场上有两种提取来源:一种是虎杖提的,一种是大黄提的,虎杖提的有效成份:根和根茎含游离葸醌及蒽醌甙. 主要为大黄素、大黄素甲醚和大黄酚,以及蒽甙A、蒽甙B. 根中还含3,4',5-三羟基芪-3-β-D-葡萄糖甙. 另含鞣质和几种多...

茅箭区18059675555： 怎样提取大黄与陈皮混合物的有效成份？
战清乙酰： 100克混合物,用20%硫酸溶液300 ml润湿,再加氯仿500 ml,回流 提取2hr,稍冷后过滤,残渣弃去,氯仿提取液于分液漏斗中, 分出酸水层,得氯仿提取液,再用20%NaOH萃取.

茅箭区18059675555： 从大黄中提取游离蒽醌的最佳方法是? - ？
战清乙酰： 可以看中药化学书啊,很经典的提取.可以用苯-硫酸回流提取

茅箭区18059675555： 给定一个天然药材,对其所含化学成分进行分析,将如何设计实验? - ？
战清乙酰： 萃取法:能萃取的进GCMS LCMS;不能萃取的进ICP;TG+GCMS连用 或者GC-FTIR;不过这个研究方向除非已经有明确疗效,所有测试几乎毫无意义. 萃取就是用一种溶剂把溶质从另一种溶液中提取出来的方法,相当于用吸铁石把铁从一堆铜...

茅箭区18059675555： 药物分离的方法有哪些 急用!!!!! - ？
战清乙酰： (一)溶剂提取法: 1.溶剂提取法的原理:溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质,选用对活性成分溶解度大,对不需要溶出成分溶解度小的溶剂,而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法.当溶剂加到中草药原料(需适当...

茅箭区18059675555： 从中药中提取有效成分是什么分离方法 - ？
战清乙酰： 中草药所含成分十分复杂,既有有效成分,又有无效成分和有毒成分.为了提高中草药的治疗效果,就要尽最大限度从复杂的均相或非均相体系中提取有效成分,然后通过分离和去除杂质以达到提纯和精制的目的. 植物有效成分分离方法很多,...