培养基的配方,希望给我详细点咯~!
基础培养基添加血清、抗生素等物质后,叫完全培养基,也叫(血清)细胞培养基。基础培养基只能维持细胞生存,要想使细胞生长和繁殖,还需添加天然培养基,常用的是牛血清,因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。此外为防止污染,培养液中尚需加一定量的抗生素。 完全培养基根据添加血清量的多少,可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基,用于不同细胞和不同研究。
细胞生长培养基(液)是用以维持细胞生长增殖之用,含血清比例较大。生 培养基(液)长培养液是培养细胞工作中最主要的培养用液。其组成为:基础培养基80%~90%,血清(多用小牛血清) 10%~20%,抗生素(多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)。
这是适用于一般细胞的培养液组成。为培养特定细胞,还要选择适应性培养基,可能尚需添加基本培养基中缺少或该细胞需要的成分。
细胞维持培养基(液)
这是为维持细胞缓慢生长或不死的培养液,血清含量甚少。一般细胞因缺少生完全培养基(2张)长因子不能增殖,生长缓慢;但发生转化或癌细胞因自身有产生促生长增殖因子的能力,虽在血清缺少情况下仍能生长;因此维持液可用于选择发生恶性转化的细胞。其组成为:基本培养基95%,血清2%~5%,抗生素(多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)。
此处需注意,如培养正常细胞完全不加血清,可维持细胞不死,但时间过长细胞难免退化。
以配2L为例:
100ml蒸馏水溶解大量元素20ml、微量元素20ml、铁盐10ml、烟酸2ml、氯化钙4.4ml、VB12ml、VB62ml、NAA2ml、IAA2ml、KT0.2ml;
称取20g蔗糖(2.5%),2g大豆蛋白胨(0.1%),溶解。
将培养液母液倒入热溶液中,定容至2L;
用1N的NaOH和1N的HCl调PH至5.8-6.2;
转移,高压灭菌(121摄氏度下25min)。
http://zhidao.baidu.com/question/43795769.html?fr=qrl&cid=986&index=4 那是以解决问题哦。
一、组成培养基的五类成分
目前,大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物
无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成,大量元素中,氮源通常有硝态氮或铵态氮,但在培养基中用硝态氮的较多,也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子,在近代的培养基中,其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物,由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子,大多以螯合铁的形式存在,即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源
培养的植物组织或细胞,它们的光合作用较弱。因此,需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素
在培养基中加入维生素,常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素,其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物
包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外,琼脂也是最常用的有机附加物,它主要是作为培养基的支持物,使培养基呈固体状态,以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质
常用的生长调节物质大致包括以下三类:
(1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)。
(2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点
1.常用培养基配方
组织培养是否成功,在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点,适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时,应对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9-1。
培养基中的激素种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料而有变化,因此各配方中均不列入。
2.几种常用培养基的特点
(1) MS培养基。 MS培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不致影响离子间的平衡。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
说明:表中各培养基配方中,均未列出铁盐。关于铁盐配方,除尼许培养基为柠檬酸铁10毫克/升外,其余均为:5.57克的FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)和7.45克的Na2-EDTA(乙胺四乙酸二钠)溶于1升水的溶液,5毫升/升。
须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的明显特点。
(2)B5培养基。B5培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。经过试验发现,有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好,而另一些植物,在B5培养基上更适宜。
(3)N6培养基。N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养,在国内外得到广泛应用。在组织培养中,经常采用的还有怀特(While,1963)培养基、尼许(Nitsch,1951)培养基等。它们在基本成分上大同小异。怀特培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。
三、培养液的配制
1.制备母液
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量,应该将培养基中的各种成分,按原量10倍、100倍或1000倍称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做母液。这样,每次配制培养基时,取其总量的1/10、1/100、1/1000,加以稀释,即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。
(1)大量元素。大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。制备时,按表中排列的顺序,以其10倍的用量,分别称出并进行溶解,以后按顺序混在一起,最后加蒸馏水,使其总量达到1升,此即大量元素母液。
(2)微量元素。因用量少,为称量方便和精确起见,应配成100倍或1000倍的母液。配制时,每种化合物的量加大100倍或1000倍,逐次溶解并混在一起,制成微量元素母液。
(3)铁盐。铁盐要单独配制。由硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)5.57克和乙二胺四乙酸二钠(Na—EDTA)7.45克溶于1升水中配成。每配1升培养基,加铁盐5毫升。
(4)有机物质。主要指氨基酸和维生素类物质。它们都是分别称量,分别配成所需的浓度(0.1~1.0毫克/毫升),用时按培养基配方中要求的量分别加入。
(5)植物激素。最常用的有生长素和细胞分裂素。这类物质使用浓度很低,一般为0.01~10毫克/升。可按用量的100倍或1000倍配制母液,配制时要单个称量,分别贮藏。
配制植物生长素时,应先按要求浓度称好药品,置于小烧杯或容量瓶中,用1~2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解,再加蒸馏水稀释至所需浓度。配制细胞分裂素时,应先用少量0.5或1N的盐酸溶解,然后加蒸馏水至所需量。
以上各种混合液(母液)或单独配制药品,均应放入冰箱中保存,以免变质、长霉。至于蔗糖、琼脂等,可按配方中要求,随称随用。
2.配制培养基的具体操作
①根据配方要求,用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量,放入同一烧杯中,并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
②将①中称好的琼脂加蒸馏水300~400毫升,加热并不断搅拌,直至煮沸溶解呈透明状,再停止加热。
③将①中所取的各种物质(包括蔗糖),加入煮好的琼脂中,再加水至1000毫升,搅拌均匀,配成培养基。
④用1N的氢氧化钠或盐酸,滴入③中的培养基里,每次只滴几滴,滴后搅拌均匀,并用pH试纸测其pH值,直到将培养基的pH值调到5.8。
⑤将配好的培养基,用漏斗分装到三角瓶(或试管)中,并用棉塞塞紧瓶口,瓶壁写上号码。瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
培养基的成分比较复杂,为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉,可以准备一份配制培养基的成分单,将培养基的全部成分和用量填写清楚。配制时,按表列内容顺序,按项按量称取,就不会出现差错。成分单的格式与内容见表9-2。
3.培养基的灭菌与保存
培养基配制完毕后,应立即灭菌。培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内,在汽相120℃条件下,灭菌20分钟。如果没有高压蒸汽灭菌锅,也可采用间歇灭菌法进行灭菌,即将培养基煮沸10分钟,24小时后再煮沸20分钟,如此连续灭菌三次,即可达到完全灭菌的目的。
经过灭菌的培养基应置于10℃下保存,特别是含有生长调节物质的培养基,在4~5℃低温下保存要更好些。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基,要在配制后的一周内使用完,其它培养基最多也不应超过一个月。在多数情况下,应在消毒后两周内用完。
有几个表格,到下面的地址看。
高氏一号琼脂培养基(培养放线菌用)
可溶性淀粉20g,硝酸钾1g,氯化钠0.5g,K2HPO4 •3H2O 0.5g,MgSO4•7H2O 0.5g,FeSO4•7H2O 0.01g,琼脂20g,水1000ml,pH7.2~7.4。配制时,先用冷水,将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000ml。112℃灭菌20分钟。
马丁氏琼脂培养基(分离真菌用)
葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO4 1g,MgSO4•7H2O 0.5g,孟加拉红(1mg/ml)3.3ml,琼脂20g,pH自然,水1000ml,112℃灭菌30分钟。临用前加入0.03%链霉稀释液100ml,使每毫升培养基中含链霉素30微克,2%去氧胆酸钠溶液2ml(预先灭菌,临用前加入)。
不好意思只找到两个,你先看看行不行。
MRS培养基的配方
配方:1、成分:10g蛋白陈、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1ml吐温80、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三铵、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰、15g琼脂粉、1000ml蒸馏水。2、制法:将上述成分加入蒸馏水中,加热溶解,校正ph6、2,分装后121摄氏度高压灭菌15分钟到20分钟。
求助培养基配方
先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
组织培养各种培养基的配方?
2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调...
常用培养基配置的配方
配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分...
培养基的配制
培养基的配制:1、称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。2、加热溶解 把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不...
实验室36种微生物培养基配制方法
让我们一起探索这些独特而实用的配方:1. 牛肉膏蛋白胨培养基 (细菌专用): 3g牛肉膏与10g蛋白胨的完美结合,加上5g NaCl和1000mL的pH7.4-7.6水,为细菌提供了丰富的营养源。2. 放线菌的高氏1号培养基: 20g可溶性淀粉与1g KNO₃,构成了独特的碳氮源,pH值调至7.4-7.6,有利于放线...
牛肉膏蛋白胨培养基怎么配置的?
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏3g。蛋白胨10g。NaCl 5g。琼脂15—20g。水1000ml。pH 7.4—7.6。器材:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂。1mol\/L NaOH,1mol\/L HCl。试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸(pH 5.5—9.0),棉花,...
培养基的配制是怎么样的?
④母液应在2~4℃的冰箱内保存。(2)培养基的配制 首先要根据培养基配方,算好母液吸取量,并按顺序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸馏水定容至所需体积,并用0.1~1摩尔\/升的盐酸或氢氧化钠调整pH,加入琼脂加热溶化,配制好的培养基要趁热分注,倒入试管、三角瓶等培养器皿中,一般至容器1\/4...
培养基的配制步骤
一般包括以下几个基本步骤:准备所需材料:包括培养基成分、蒸馏水、试管或烧瓶、称量器具、pH计等。称量和混合培养基成分:按照配方中各成分的比例,准确称量所需的培养基成分。将固体成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,直到完全溶解。调节pH值:使用pH计测量培养基的初始pH值,并根据需要进行调节。通常使用酸或...
微生物实验怎么配培养基的成分啊?
马丁氏培养基配方如下:KH2PO4 1g MgSO4·7H2O 0.5g 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 15-20g 用蒸馏水定容至1000ml 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。由于链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液,在100ml培养基中加1%...
旗琳海舒: 1、细菌培养基配方一 牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克,水 100毫升在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热.待烧杯内各组分溶解后,加...
色达县19745869396: 基础培养基的配方是什么 - ?
旗琳海舒: 最常用的是MS培养基,有:硝酸铵1650 mg/l 硝酸钾1900mg/l 七水硫酸镁370mg/l 无水氯化钙332mg/l 磷酸二氢钾 170mg/l 铁盐40 mg/l 微量元素你自己去查一查,一般书上都有的,再加蔗糖20 g/l,琼脂5.8g/l
色达县19745869396: 求MS培养基的配制步骤,需要详细点的介绍, - ?
旗琳海舒:[答案] 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容.一般取100mg配成100ml母液. 2、配制培养基 以配...
色达县19745869396: 组织培养各种培养基的配方? - ?
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色达县19745869396: 酵母培养基的配方谁能够给我一个完整的酵母培养基(四缺SD)培养基的配方.谢谢啦 - ?
旗琳海舒:[答案] YPD培养基 Yeast Extract 10,PePtone 20,Dextrose 20,若制固体培养基加入琼脂 20,(121℃灭菌 20 分钟)
色达县19745869396: 哪位知道完全培养基的配方,要详细一点的,谢谢!?
旗琳海舒: <p>不知你说的什么培养基 xiaosigou123|四级</p> CMC-Na固体培养基(CMC平板)g/l:CMC-Na 20;Na2HPO4 2.5;KH2PO4 1.5;蛋白胨 2.5;琼脂 20;蒸馏水 1000ml;pH 7.0~7.5[10]即可评论|赞同0 2012-08-28 19:14lyw1986111|五级动物细胞的完全培养基就是基础培养基+血清或血清替代物评论|赞同0 2012-08-31 16:46lovebigegg|三级有机氮源、无机氮源(可以没有)、碳源、磷、钾等,还有微量元素、维生素等
色达县19745869396: 常用培养基配方有谁知道?
旗琳海舒: 营养琼脂 成分: 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15~20g 蒸馏水 1000mL 制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121℃高压灭菌15...
色达县19745869396: 食用菌的液体培养基如何配制~? - ?
旗琳海舒: 每个食用菌品种的菌丝体生长和子实体生长所需要的碳氮比有所不同.应该根据选择的品种来确定.首先应该熟知该菌种的碳氮比是多少.然后进行合理配置. 金针菇液体菌种配方.玉米粉3%,土豆15%,葡萄糖0.5%,磷酸二氢钾0.02%,磷酸氢二钾0.08%,硫酸镁0.05%. 香菇液体菌种配方,玉米粉2%,葡萄糖1%,麦麸2%,酵母膏0.3%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.1%.
色达县19745869396: 植物培养基的配方如题 谢谢了 - ?
旗琳海舒: (1)MS培养基 它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的.特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液.其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要.它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物...
色达县19745869396: 急求关于霉菌培养基的制作 ,过程越详细越好. - ?
旗琳海舒: 霉菌培养基最简单实用的是马铃薯葡萄糖培养基(PDA),如果没有葡萄糖换成蔗糖也行,就是马铃薯蔗糖培养基(PSA),其他的见下面:(一)麦芽汁培养基的配制1.培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林.2.配制方法 (1)用水将大麦或...