真核基因在大肠杆茵细胞中的表达存在的理论问题有哪些？如何克服这些问题
没有接在启动子后面，或者用连接酶连接的时候把两个或以上相同的该基因接在了一起。
真核基因是可以在大肠杆菌中表达的。比如现在美国的公司用在大肠杆菌中导入人的胰岛素基因，使其表达，合成胰岛素。
原理很简单
1. 表达载体要有大肠杆菌能够识别的启动子、SD序列就行，就好像是一段大肠杆菌本身的DNA。
2. 去掉内含子。一般用cDNA。
不过真核生物在大肠杆菌中表达会存在无法对翻译好的蛋白质进行修饰的问题,这样使得有些蛋白质不具有活性
第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.
第三,真核基因可能在表达过程中需要有分子伴侣帮助折叠成正确的构象才会有活性.如果单独的蛋白没有活性,应该考虑是否需要同时克隆分子伴侣基因.
第四,注意控制表达条件,尽量不要形成包涵体.有时候表达量过高反而会形成大量包涵体.包涵体破碎提纯是一个麻烦事,而且容易造成蛋白活性下降或者失活.
笼统这些,操作时候还要具体蛋白具体分析,优化表达条件.比如大肠某些菌株表达一些小肽的时候加一定浓度MgCl2表达量有大幅提高,但使用其它菌株表达此肽或者该菌株表达其他蛋白就无此现象.多查查文献.
大肠杆菌遗传物质
腺嘌呤A(adenine)、尿嘧啶U(uracil)、胞嘧啶C(cytosine)和鸟嘌呤G(guanine)。注意：DNA和RNA不同的碱基主要是胸腺嘧啶(thymine)和尿嘧啶(uracil)。大肠杆菌遗传物质所在的区域叫拟核区（也称作染色质体）。拟核区存在于原核生物，没有染色体，没有由核膜包被的细胞核，只有一个位于形状不规则且边界不...
大肠杆菌遗传物质所在的区域叫什么
大肠杆菌遗传物质所在的区域叫拟核区（也称作染色质体）。拟核区存在于原核生物，没有染色体，没有由核膜包被的细胞核，只有一个位于形状不规则且边界不明显区域的环形DNA分子，内含遗传物质。拟核携带着细菌全部遗传信息，它的功能是决定遗传性状和传递遗传信息，是重要的遗传物质。
以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因,并使之在大肠杆...
【答案】：要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有：(1)必须利用原核细胞的表达调控原件。如细菌的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。(2)大多数真核基因有内含子，这些内含子在转录后从前体mRNA中被切除而形成成熟mRNA。细菌细胞没有这样的机制来去除内含子。(3)没有翻译后的...
线粒体能为大肠杆菌基因的转录和翻译提供能量吗
只要是正确的实验设计，真核基因到原核细胞内，照常转录。大肠杆菌转录时只认启动子是不是原核的，不管启动子后面跟着什么基因。除非傻傻的把动物基因的启动子一起搞进去，指望着动物基因启动子起始基因转录。所以，第一个疑问的假设是不成立的。后一个疑问也不科学。怎样才叫翻译了，拿到理论长度的蛋白吗...
影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素?
⑴外源基因的拷贝数 ⑵ 外源基因的表达效率 ①启动子的强弱 ②核糖体接合位点的有效性 ③SD序列和起始密码ATG的间距 ④密码子组成 ⑶表达产物的稳定性 ⑷细胞代谢负荷 ⑸工程菌的培养条件
基因芯片在遗传学中的应用
用芯片作大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验甚至临床，缩短药物筛选所用时间，提高效率，降低风险。随着人类基因图谱的绘就，基因工程药物将进入一个大发展时期，在基因工程药物的研制和生产中，生物芯片也有着较大的市场。以基因工程胰岛素为例，当我们把人的胰岛素基因转移到大肠杆菌细胞后，我们就需要...
举例说明外源基因可以在哪几种宿主细胞中的大规模表达,各有什么特点...
(1)外源基因在大肠杆菌中的表达，特点：①大肠杆菌的结构简单;②生理代谢途径较为清楚;③并且易于遗传操作和大规模发酵培养。因此，大肠杆菌已成为高效表达异源蛋白质最常用的原核表达系统。(2)外源基因在酵母中的表达，特点：①基因组简单，易于分析操作;②具有真核生物特有的蛋自质翻译后修饰加工体系，...
人类的基因是怎么会事?
除某些病毒的基因由核糖核酸(RNA)构成以外,多数生物的基因由脱氧核糖核酸(DNA)构成,并在染色体上作线状排列。基因一词通常指染色体基因。在真核生物中,由于染色体都在细胞核内,所以又称为核基因。位于线粒体和叶绿体等细胞器中的基因则称为染色体外基因、核外基因或细胞质基因,也可以分别称为线粒体基因、质粒和...
将重组DNA导入细胞内有哪些方法?它们的原理是什么?
【答案】：(1)将重组质粒导入原核细胞称转化，通常用氯化钙法使大肠杆菌细胞处于感受态，从而将外源DNA导入细胞。另一个常用方法是用脉冲高压电瞬间处理，使外源DNA高效导入细胞，称为电穿孔法。(2)将重组体DNA包装成噬菌体，使外源基因导入宿主细胞称转导，在适宜条件下使转化率提高。(3)将外源基因导入...
比较大肠杆菌、植物和动物三种不同系统作为基因工程宿主的优缺点 我也...
低廉；（3）经过了遗传改造，已发展为一种安全的基因工程 实验系统，拥有各种不同的菌株和载体系列。不足之处（表达真核基因的障碍）（1)真核基因具有内含子，所以只能用其cDNA；（2）许多真核生物基因仅在大肠杆菌中 合成无特异性空间结构的多肽链；（3）许多真核基因的蛋白 质产物，都要经受翻译后...
繁废韦司： 这要看载体是否具有原核启动子了.一般的真核表达载体都是穿梭载体,载体上的氨苄青霉素等抗性基因就是可以再原核生物中表达的.但是你连接在载体上的真核基因是不会在原核生物中表达的,因为基因前边只有载体上的真核启动子,而且可能基因里面也会有内含子.
毕节市18325855250： 大肠杆菌作为基因工程菌的受体菌有哪些特点真和基因在大肠杆菌存在哪些障碍 - ？
繁废韦司： 遗传背景清楚 ;目标基因表达水平高;表达系统成熟完善;易于培养(培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强)、成本低;被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物.缺点:表达产物缺少饭以后的修饰(如糖基化、烷基化、磷...
毕节市18325855250： 人的基因之所以能在大肠杆菌中表达原因是 - ？
繁废韦司： 人是真核生物,大肠杆菌属于原核生物,真核生物的基因是不能在原核生物中直接表达的,在基因转移的过程中,必须在转座子中或转移基因的片段边缘加入相应的修饰片段,协助外源基因,才能得以表达
毕节市18325855250： 为什么较复杂的基因(如真核细胞的基因)不能在大肠杆菌中体现? - ？
繁废韦司： 因为真核细胞的基因结构中含有内含子,而内含子是不编码蛋白质的,所以较复杂的基因不能在大肠杆菌中体现
毕节市18325855250： 从高等生物基因组中克隆的完整基因为什么在大肠杆菌中不能正确表达? - ？
繁废韦司： 真核生物与原核生物的启动子不同.而且真核生物的基因通常是间隔基因,即外显子和内含子相间排列.真核生物的完整基因直接转入大肠杆菌,没用相应的启动子不能启动mRNA转录,而且内含子也不能正确剪切,当然不能正确表达.利用胰岛素的mRNA进行RT-PCR,扩增出它的cDNA,再将cDNA连接在有完整表达单元的载体上,转入细菌中表达.
毕节市18325855250： 基因工程问题,真核基因在原核细胞中如何表达利用大肠杆菌生产人胰岛素的时候让载有人胰岛素基因的质粒进入菌体进行扩增和表达,但是真核细胞的基因... - ？
繁废韦司：[答案] 一、请删去基因中的内含子.这可以通过将该基因的cDNA连接至载体中而解决. 二、所用的表达载体中,你所需要表达的基因必须由宿主菌能够使用的原核启动子来启动.一般商业的原核表达载体均有这类启动子. 三、如果你需要表达的基因与宿主菌的...
毕节市18325855250： 在大肠杆菌细胞中,克隆基因表达产物有哪几种存在形式 - ？
繁废韦司： 将目的目的基因克隆在载体质粒上,然后将载体质粒转入大肠杆菌中,选择成功转入质粒的大肠杆菌进行培养,就可诱导目的基因的表达了
