您好,我还有个问题,克隆载体表达蛋白量很小,为什么很多实验还是采用,克隆载体与基因片段重组....
克隆载体主要是用来进行DNA的重组、目的基因的分离和纯化等等。
而表达载体主要是进行目标基因的真核或者原核表达。
两种载体的用途不同各有优势,如果你想要做蛋白的表达,那么就选用表达载体比较好。
构建克隆载体是大量扩增DNA片段,用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作,构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。
为什么要先构建克隆载体,再用表达载体,我猜是因为:
①得到大量的DNA,虽然PCR也可以,但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR,而且每次都要重新提DNA和RNA才行,而且,PCR反应的试剂盒又不便宜,用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂(相对于PCR),成功率不是极高,而且还要筛选,但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌,你就可以保存了,你想什么时候用,摇个菌,就可以制备到大量的DNA。
②测序需要。你想转表达,你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的,不要以为你设计了个特异性引物,然后跟你mark的长度就可以确定了,这也只是推测,在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许,要拿去测序,而一般送测的序列都是构建到载体上的序列,克隆载体上一般也都带有测序引物,已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
你好 我还有个问题问问你
我提醒你,金属在X光机下是蓝色的(电脑也是显现金属的颜色),象牙是绿色的,差异很大,也就是说这样不可行。也的确有人使用把小的饰品有人戴在身上,尤其是吊坠,用衣服盖住的办法蒙混过关还有人可能教你用其他东西把象牙遮盖起来,这是比较常见的,但是我提醒你常见的意思就是被发现过,只要违法就不...
...告诉我答案好吗?我还有个问题。三角形的两条边分别是三
如果是直角三角形 另外两个角的度数就是45度 根据勾股定理,得出:5或者√7
不好意思、我还有个问题、检验氯离子是先用稀硝酸再用硝酸银、而检验...
检验氯离子是先用稀硝酸再用硝酸银,是为了排除Co3 2-,HCO3-,HO-的干扰。盐酸和可溶性氯化物中有氯离子,先用硝酸银再用稀硝酸,是证明生成的沉淀不溶于酸。
如何建立亲密关系的36个问题
1、培养共同兴趣爱好:彼此之间产生联系是亲密关系建立的桥梁,找到共同的兴趣爱好会让两个人有更多的交集和在心底里认可对方,你和我是同类人。兴趣爱好有很多,包括健身、看书、唱歌、美食、打游戏等等。 2、自我表露:你会不会发现,越是亲密的人面前越能展现自己的弱点和不堪,、适当的袒露心声和示弱可以在两个人之...
女朋友和我分手已经一个月了,自己也在调整中,还有一些疑问和感触...
你也已经认识到了这点。其次,因为之前你前女友都是很考虑你的感受的一个人,我觉得你前女友跟你提出分手是经过理智思考后做出的决定,不像是一时冲动,所以感觉上蛮决绝的,可能不太容易回头了。最后,如果将来你还有追回她的机会,请你把她作为孩子一样宠爱,不是说她比你大几岁就要迁就着你的,...
你好,我想咨询个问题可以吗?我的车险还有几天就到期了,前两天去买
您好!一般来说,续保车险不宜过晚也不能过早,最好选择上一年度保险到期的前两天左右续保,因为汽车保险一般是从续保之日起,24小时以后生效,这样就可以有效的避免了保险脱保,也可以避免续保后车辆出险算在新保单中,时间恰到好处。给汽车续保的方式很多,有传统的线下投保方式,也就是车主直接到保险...
你好,我这有这么个问题,我的顾客需要减肥,但是吃了一个月居然长了五斤...
做家务是一个比较好的瘦身运动,经常挽起袖子来做做家务,可以更多的消耗卡路里。尽管做家务是一项很琐碎的事情,但是积小成多,只要持之以恒,就可以达到很好的瘦身效果。7、跳舞减肥法 跳舞不仅会使你更优雅,还能帮你舞出窈窕的身姿。从现代医学的角度来看,跳舞这种有节奏的全身性运动,有利于恢复和平衡身体的生物...
我现在很认真地问你个问题,你想清楚再回答我。这个问题该怎么问?
朋友大家在一起,有问题都有认真的去问,认识认去听认真的去回答就可以了,开心的去面对每一天,祝你幸福快乐开心,把问题问出来就可以了2,推开窗户,仰望天空。开怀大笑,明天又是一个美好的一天。3,为了逗你开心,我一已伤透脑筋 4,有美味的米粥爽快的啤酒,身边没有爱的人也要开心啊。5,一...
...反气旋,寒潮呢,春旱了,为什么。并且还有个问题,我记得有道题说_百度...
气旋的气流是【垂直上升,湿润】的原因:【由于地面水汽受热上升,导致地面低压,而水汽上升后遇冷凝结成水珠,在大气中聚合,在重力的作用下下坠,形成降雨,所以气旋多阴雨天气】;气旋影响季节和时间:由上述解释,结合可知,【气旋多发于夏秋季节,特别是夏季】,而影响我国东南沿海地区的台风就是海洋上...
您好,我想咨询个问题刚换离合线踩下去有声音很大声,可是开了一会儿又没...
可能是离合器没有安装好或者是离合器本身的质量问题,因为看不到实车,不能对故障进行准确判断.一、学会分辨属于合理响声的异响 汽车异响这个问题,普通车主很难辩别哪些是故障异响,哪些是合理异响。去修理厂检测异响的车辆,只有近20%的车真的出了问题。配备了涡轮增压发动机的车型,响声和自然吸气发动机...
童岩秦皮: 表达载体 具有较高的蛋白质表达效率,一般因为具有强的启动子. 而克隆载体 只是为了保存基因片段,这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响你别的工作.看你的目的而选吧 各有好处.
抚顺市13346912472: 克隆载体与表达载体有哪区别?它们分别都有哪些常见的类型?谢谢!?
童岩秦皮: 克隆载体:大多是高拷贝的载体,一般是原核细菌,将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接,再导入原核细菌内,质粒会在原核细菌内大量复制,形成大量的基因克隆,被克隆的基因不一定会表达,但一定被大量复制. 表达载体就是在克隆...
抚顺市13346912472: 表达载体和克隆载体一样吗?有什么区别?实验室常用有哪些? - ?
童岩秦皮:[答案] 1.不一样 2.载体的分类 按功能分成: (1)克隆载体:都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增.它是用来克隆和扩增DNA片段(基因)的载体. (2)表达载体 :具有克隆载体的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)还具有转录/翻译...
抚顺市13346912472: 请教 我要克隆表达一段基因, - ?
童岩秦皮: 这个要看情况.你要看每一个碱基的比对情况,如果出现移码缺失,肯定不可以.如果有碱基突变,因为同一种氨基酸可能对应多种密码子,你要看看对应的氨基酸是不是相同的,如果是相同的就可以用,如果不同就不可以用.还需要注意一点,测序结果中最开始的100bp都有可能是不准确的.你这个里面有2个gaps,就是2个缺失突变,可能是不能用来做表达的.不过,你需要再仔细看看每个碱基对应的情况.
抚顺市13346912472: 如何确保pcr产物以正确的方向克隆到表达载体中 (未翻译方向) - ?
童岩秦皮: 完全确保的话,第一,做酶切的两个酶要不一样;二你在做完酶切后,用磷酸化酶处理下,纯化后再连接(这一不会降低连接效率,但会确保质粒不自连.按正确方向克隆
抚顺市13346912472: 关于原核表达基因测序问题 - ?
童岩秦皮: 其实简单一点,可以直接克隆到表达载体上,送去测序确定之后再表达;我们以前一直这么做的;但是有些情况下,比如表达载体不是诱导型的,或者表达的蛋白对大肠杆菌宿主菌毒性很大,影响菌的生长,导致菌生长困难、提质粒困难等等,就会先克隆到一个克隆载体上面,做测序确定;然后再克隆到表达载体上.通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选;我喜欢选控制比较严谨的可调控性原核表达载体,比如pET系列的多个载体,直接把目的基因克隆上去.
抚顺市13346912472: 用原核载体克隆并表达一种生物中的某个基因(序列已知),这种生物若是一种原核生物,应如何设计实验??
童岩秦皮: 原核表达是目前最常用的表达系统,一般在大肠杆菌中做,也有在酵母,乳酸菌或者真核细胞里面做.大肠杆菌是工程菌,易操作,不会存在质粒转不进去的情况.因为酵母,乳酸菌等细胞内部一般都存在限制修饰系统,不是所有的工程质粒都...
抚顺市13346912472: 表达菌,克隆菌问题 - ?
童岩秦皮: JM109,DH5a,TOP10是常用的克隆菌株 BL21是常用的表达菌株E. coli克隆菌株,种类非常多,常见的还有HB101,XL1-Blue等等,根据你克隆的方法和目的不同,有不同的选择.表达菌株我所了解的只有BL21和他的衍生菌株,像BL21(DE3)等等,其他的就不清楚了.如果你想知道更详细的,找本最新版的《分子克隆》,或者类似的书看看.
抚顺市13346912472: 您好,我看您在表达载体这一块懂的比较多,我想请教您我构建PET32a表达载体,但是没有办法表达,求原因?
童岩秦皮: 首先分析测序结果是否正确,融合表达有没有同框,其次分析是没有表达还是表达较弱,可以采用Western检测目标蛋白或者检测标签,如果是弱表达的话就需要优化表达条件.还有就是你构建的载体有没有转化进入表达宿主细胞,同时也要考虑密码子偏好性的问题.
抚顺市13346912472: 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求! - ?
童岩秦皮: 1.首先这应该是个融合表达载体.应该考虑后面的读码框问题.就是应该适当在后面的酶切位点前加入0-2个碱基.使得你的目的基因和egfp在同一读码框内. 2.KOZAK序列在真核细胞中表达有作用,这就看你后期的实验目的了.不过不加的话...