2月23号凌晨1点的火车从曲靖出发到上海是几号

作者&投稿:出子 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
我买的是2月23号晚上:23:55的票、从昆明走、到曲靖、02:10分、我可以在曲靖上车吗?2点以~

1、23号晚的23:55的票,从昆明可以上车,也可以在昆明之后的任何一个站上车,只要是当日当次车。

2、如果该车在02:10经过曲靖,那么你可以从曲靖上车。

是的,22号晚上十一点半左右就要去火车站候车了

2018年2月23日凌晨一点多,

曲靖到上海南站的K740次列车,

正常情况下是24号的14:33分到达上海南站



通过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后,变可进行cDNA第一链的合成,其步骤包括:

1)在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA 10μl(10μg),100m mol/L甲基氢氧化汞1μl,室温反应l0分钟,使RNA变性。
2)加100m mol/L的β-巯基乙醇2μl和10m mol/L RNA酶抑制剂2μl,室温放置5分钟。β-巯基乙醇有稳定逆转录酶活性的作用。
3)向上述反应混合物加lmg/ml的引物01igo dT(12~18聚体)10μl,1mol/L Tris.HCl(pH8.3)5μl,11mol/L KCl7μl,250m mol/L MgCl22μl,再加20 m mol/L的4种dNTP各2.5μl,逆转录酶2μl(40单位),用水补充到50μl,充分混匀,42℃反应1~3小时。
4)加0.5 EDTA(pH8.0)2μl终止反应,然后加150m mol/L NaOH 25μl,65℃反应1小时,或37℃8小时,水解mRNA模板,得到cDNA第一链,再加pH8.0,1m mol/L Tris.HCl,各25μl中和其pH。
5)测定放射活性,计算合成的DNA量。实际上,cDNA第一链的产量往往不会超过poltAmRNA用量的10%~30%。
6)用等体积的酚-氯仿抽提―次,取水相并用SephadexG-100离心柱层析(参看第6章)将cDNA同剩余的dNTP分开,以2.5倍体积的95%冷乙醇沉淀。
7)合成的cDNA第―链在1.4%的碱性琼脂糖凝胶上电泳,用末端标记的pBR322限制性片段为分子量标准,电泳后,铺X-光片,进行放射自显影,确定cDNA第一链的大小。

2:第二链的合成
a:第一链合成完毕后,直接进行第二链的合成。在第一链合成体系中分别加入
2.5×第二链缓冲液40μl,
DNA聚合酶Ⅰ23μ
RNase H 0.8μ
加水至100μl
b: 14-16℃下放置2小时。(>3Kb时反应时间延长至3-4小时)
c:70℃,10min,点动离心,置于冰浴
d: 在样品管中加入T4DNA聚合酶2μ,37放置10分钟。
e:加入4μl 500mM的EDTA到该样品管中,然后置于冰浴上.
f: 等体积加入酚\氯仿\异戊醇抽上清,12000g,3min。
g: 上清液转移至一干净试管,加2V乙醇,1/10V乙酸钠,-20℃30min沉淀,12000g,15min收集沉淀,70%乙醇洗沉淀,干燥,TE复溶。


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