流式细胞仪检测细胞凋亡方法细胞怎么处理
一、原理
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
二、注意事项
1、必须活细胞检测，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。
2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时，有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤，导致晚期凋亡或坏死比例非常高，不能反映真实结果。实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞比例。
3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白，只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大，因而在消化细胞时，建议一般不采用含EDTA的消化液。
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）。
目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法.方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况.结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观.结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法.
流式细胞仪检测细胞凋亡方法细胞怎么处理目的利用流式细胞检测技术,通过不同的方法检测经过凋亡诱导剂处理后的细胞的凋亡水平,探讨流式细胞仪在细胞凋亡检测方面的应用,为基础研究和临床应用提供指导依据
流式检测凋亡种用呢
如何用流式细胞仪检测细胞凋亡?
原理是：正常细胞中，染料可以在线粒体内聚集，发出明亮的红色荧光；而细胞凋亡后，其线粒体膜电位发生改变，染料无法进入线粒体，只能在胞质中以单体形式存在，发出绿色的荧光。可以在荧光显微镜下，或流式检测。采用488nm激发，其检测波长分别是527nm和590nm。整个实验过程操作简单，只需要30min就可以...
请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么?
一、原理 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。...
流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗?
用PI单染就可以，PI是用来测细胞周期的，在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡，但是这个方法不是很好，坏死细胞也会包含在内。准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例。建议用AnexinV和PI双染，PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞。细胞早期凋亡时，内膜外翻，位于胞浆的磷...
流式细胞仪检测细胞凋亡中Pl 染液是什么
PI 是 propidium iodide的缩写，该染料能和核酸链结合后，被激发发出荧光。其实并不是检测凋亡，而是检测的细胞膜的完整性。完整的细胞膜对PI没有通透性，PI不能进入细胞内和核酸结合，所以细胞不能被染色。只有细胞发生了凋亡，或者坏死，或者人为因素，比如胰酶消化，吹打，刮取等等操作，损伤了细胞膜。...
如何用流式检测细胞凋亡
一、流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine, PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。图3：凋亡早期 PS从细胞膜的内侧外翻 该方法简便、快速、准确区分活细胞、凋亡...
流式细胞仪检测项目
流式细胞仪检测项目主要包括细胞表面标记分析、细胞内标记分析、细胞功能分析、细胞凋亡分析等。流式细胞仪是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。它将单个细胞与特异性抗体结合，通过激光激发荧光，测量每个细胞的多个参数，从而实现对细胞的快速、多参数分析。流式细胞仪可以检测细胞的物理特性，如大小、...
细胞凋亡检测方法汇总
操作步骤简单，首先将细胞收集并预处理，之后使用特定染色试剂进行细胞标记。之后，通过流式细胞仪分析细胞标记情况。实验中需设置对照组，包括空白对照、单染对照、阳性对照和阴性对照，以确保实验结果的准确性。在结果分析中，横坐标表示Annexin V强度，纵坐标表示PI强度。依据对照比较结果，可准确判断细胞的...
【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析
我就不明白了，既然是凋亡，就算是晚期，细胞膜也会破坏？还有的认为，2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞。我用的是美国Beckman-Coulter公司试剂盒，它的说明说上就是这么写的：Quadrant 3：viable cellsQuadrant 4：apoptotic cellsQuadrant 2：secondary necrotic cells这种说法在园子里还没见过。应该以...
流式细胞仪检测细胞凋亡需要多少体积的细胞
1.收集细胞｛数目约（1~5）×10 6个\/mL｝,500 1000 r\/min离心5min ,弃去培养液.2.3ml PBS洗涤1次.3.离心去PBS,加入冰预冷的70 的乙醇固定,4℃,1—2小时.4.离心弃去固定液,3mlPBS重悬5 min.5.400目的筛网过滤1次,500—10 00r\/min离心5min,弃去PBS.6.用1ml PI染液染色,4℃避光30...
流式细胞仪检测细胞凋亡需要多少体积的细胞?
1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×10 6个\/mL｝，500 ~ 1000 r\/min离心5min ，弃去培养液。2. 3ml PBS洗涤1次。3. 离心去PBS，加入冰预冷的70 的乙醇固定，4℃，1—2小时。4. 离心弃去固定液，3mlPBS重悬5 min。5. 400目的筛网过滤1次，500—10 00r\/min离心5min，弃去PBS。6. 用1ml...
佟庄夏天： 目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法.方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况.结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观.结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法.
靖西县15394318883： 什么是细胞凋亡?如何检测?表观遗传修饰在细胞凋亡中的作用? - ？
佟庄夏天：[答案] 细胞凋亡(apoptosis)是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程. 关于检测方法,这是我在期末考试自己总结的,并不是从网络上贴过来的! 1,形态观察 坏死细胞:细胞膨胀,细胞质膜裂解,细胞器膨大,...
靖西县15394318883： 细胞凋亡的早期检测方法有哪些 - ？
佟庄夏天： 1、PS(磷脂酰丝氨酸)在胞外膜分布的检测 PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志.AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS,使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白(如Annexin ...
靖西县15394318883： 判断细胞死活的方法 - ？
佟庄夏天：[答案] 鉴定细胞死活的方法 死活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义.细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率.在临...
靖西县15394318883： 流式细胞仪在细胞凋亡检测中的应用是什么? ？
佟庄夏天： FCM用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确
靖西县15394318883： 请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么? - ？
佟庄夏天： 一、原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧.Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高...
靖西县15394318883： 流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗? - ？
佟庄夏天： 用PI单染就可以,PI是用来测细胞周期的,在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡,但是这个方法不是很好,坏死细胞也会包含在内.准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例.建议用AnexinV和PI双染,PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞.细胞早期凋亡时,内膜外翻,位于胞浆的磷脂酰丝氨酸转位至细胞表面,FITC标记的Anexin V能与其结合,而坏死细胞不具有该特点.
靖西县15394318883： 检测细胞凋亡的三种常用方法,您知道几种 - ？
佟庄夏天： 一、形态学观察方法 二、DNA凝胶电泳 三、酶联免疫吸附法 四、流式细胞仪定量分析
靖西县15394318883： 细胞凋亡常用的检测方法有哪些?？
佟庄夏天：1 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体. 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落. (2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割 成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态. 生物帮上面有这方面的专业介绍, http://www.bio1000.com/zt/product/357940.html bd流流式细胞仪,流式细胞仪原理,流式细胞仪,流式细胞仪的用途
靖西县15394318883： 几种凋亡细胞检测方法的比较 - ？
佟庄夏天： 在细胞凋亡的基础研究领域,如有关凋亡信号转导、基因调控等方面的研究,以及在细胞凋亡的应用研究领域,诸如将细胞凋亡作为化疗药物的筛选模式、检测肿瘤组织切片中凋亡细胞数以评价肿瘤预后等,都涉及到凋亡细胞的识别与检测这一基本问题,因此,选择合适的检测凋亡细胞的方法便成为各个实验室必须解决的问题.本文结合相关文献及在研究中的体会,就凋亡细胞与坏死细胞的区别、几种常用凋亡细胞检测方法适用范围及应用中的影响因素、结果分析等简述如下.
