dna的电泳实验为什么跑出来是一条亮白色的条带

作者&投稿:貂桑 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
基因组DNA提取后电泳跑出来是一条长带请高手指点是怎么回事?~

winter_gates(站内联系TA)基因组就是这样,如果提得非常好还会有一条较明的带。kingleo99(站内联系TA)很明显是提取过程中DNA降解了,所以在提取时应该要动作轻!三磷酸腺苷(站内联系TA)断裂或者降解,但是能做实验就好了,不必在意下次小心点,冰上操作,小心轻柔winter_gates(站内联系TA)在提取基因组DNA时,基因组DNA会断裂成15~20kb的片断,所以在跑电泳时会在大于15kb的地方存在一条主带(在提取效果比较好的情况下)。但是,因为不可能将RNA完全去除,和在提取时不可避免的将DNA打断为更小,所以肯定存在一条较长的拖尾,有些RNA去除不好的还会在比较小的位置存在一条带,那是没有除尽的RNA。

OD值检测的话对于RNA污染是非常不准确的,因为RNA的260/280大概也是那附近,约为1.8-2.0左右。所以这种检测方法仅仅能测定是否有蛋白质的污染。一般提取DNA的过程中,RNA污染几乎是不能避免的,尤其是用某些生长旺盛的组织提取DNA,这些组织往往RNA的表达量都非常大。所以电泳时能够看到RNA的部分。但一般RNA对后续的操作影响并不是很大,所以很多时候都可以不用管它。如果实在看它不顺眼,你可以在提取完成后加入Rnase去消化它。

这种问题真的不好直接用文字回答你。首先你要搞明白为什么要电泳,电泳的目的是什么。我不知道你有没有亲自做过电泳,首先希望你先查询下如何DNA电泳。在DNA电泳前,

  1. 在需要电泳的DNA溶液里加上loading buffer,目的是在电泳时可以看到指示带,有两条:跑在前面的蓝色条带是溴酚蓝,位置大约相当于300bp的DNA,后面的绿色条带是二甲苯青FF,相当于4000bp左右大小DNA的位置。

2. 在制备琼脂糖胶时,需要加入EB,EB可以与DNA结合,在紫外灯下显示DNA位置,也就是你说的白色条带。

3. 现在有些实验室用一些新型染料(EB有毒),可以用蓝光而不是紫外观察条带,这个时候看到的DNA条带其实是淡蓝色的,不是白色的。

 

不知道你明白没有?     我要看文献了,下午老板要找我谈话。。。。。




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胶体的胶粒正负性怎么判断
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高一化学必修一知识点总结
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林芝县15696794009: 提取DNA实验中为什么琼脂糖电泳后仅能见到一条主带呢?一条染色体含有一条DNA,基因组中不同的染色体DNA的大小是不同的.按理来说,所提取的基因... -
王荀联双:[答案] 1.你需要知道琼脂糖胶的分辨率是有限的,通常用的1%的琼脂糖胶是不能有效分辨相差100bp以内的片段的(这一点不能说明你的问题);2.你还需要知道基因组是很大的,通常都是以M为单位的,而琼脂糖胶分辨最大片段的能力是...

林芝县15696794009: 基因组DNA提取后电泳跑出来是一条长带请高手指点是怎么回事? -
王荀联双: winter_gates(站内联系TA)基因组就是这样,如果提得非常好还会有一条较明的带.kingleo99(站内联系TA)很明显是提取过程中DNA降解了,所以在提取时应该要动作轻!三磷酸腺苷(站内联系TA)断裂或者降解,但是能做实验就好了,不必在意 下次小心点,冰上操作,小心轻柔winter_gates(站内联系TA)在提取基因组DNA时,基因组DNA会断裂成15~20kb的片断,所以在跑电泳时会在大于15kb的地方存在一条主带(在提取效果比较好的情况下).但是,因为不可能将RNA完全去除,和在提取时不可避免的将DNA打断为更小,所以肯定存在一条较长的拖尾,有些RNA去除不好的还会在比较小的位置存在一条带,那是没有除尽的RNA.

林芝县15696794009: PCR后进行DNA电泳跑的条带是一条,但不是我想要的条带,是怎么回事啊? -
王荀联双: 你的结果上的“一条带”位置在哪里?我想你能确定不是目的带的话,那应该结果显示的条带比较靠前,DNA长度较小.那很有可能是引物二聚体.出现这个情况,可能的原因有3: 1.引物本身不对,不是目的DNA扩增需要的引物.2.DNA回收提纯的问题3.PCR体系内镁离子浓度问题...建议排查下各项.

林芝县15696794009: 为什么基因组DNA电泳是一条带? -
王荀联双: 基因组DNA会在你抽提过程中发生断裂,形成几十至几百kb的大片段.如果你跑的是比较浓的胶的话,无法区分不同大小的DNA,所以看起来像是一条带. 你可以配点0.6%的胶加lamda hindIII marker跑长时间看看. 一般应该有几条带.

林芝县15696794009: dna的电泳实验为什么跑出来是一条亮白色的条带 -
王荀联双: 这种问题真的不好直接用文字回答你.首先你要搞明白为什么要电泳,电泳的目的是什么.我不知道你有没有亲自做过电泳,首先希望你先查询下如何DNA电泳.在DNA电泳前, 1. 在需要电泳的DNA溶液里加上loading buffer,目的是在电泳时...

林芝县15696794009: 怎么我提的DNA只跑出一条带 -
王荀联双: 质粒电泳,并不一定会有明显的两条带的,和是否有蛋白污染,电泳液的成分,pH值等都有很大关系. 你的图上看,还是有一条比较淡的条带在前面.而粗亮的这条应该就是没有超螺旋的了.

林芝县15696794009: 提取DNA实验中为什么琼脂糖电泳后仅能见到一条主带呢?? -
王荀联双: 1. 你需要知道琼脂糖胶的分辨率是有限的,通常用的1%的琼脂糖胶是不能有效分辨相差100bp以内的片段的(这一点不能说明你的问题);2. 你还需要知道基因组是很大的,通常都是以M为单位的,而琼脂糖胶分辨最大片段的能力是有限的,即便是0.3%的琼脂糖胶所能分辨的最大片段也只有50000bp(这点可解答你的问题),所以不同长度的染色体DNA是不能在琼脂糖胶上分开的.

林芝县15696794009: 提取DNA时,跑电泳的结果是条带主要集中在100bp左右,是不是产生降解了?还是哪里出现了问题? -
王荀联双:[答案] 一种可能是DNA降解形成的小片段,另一种可能是RNA没有去处干净形成的条带.

林芝县15696794009: CTAB法提取的DNA应该是不同长度的,为什么电泳后还在一条带上? -
王荀联双: 因为琼脂糖凝胶只能分辨20kb以下的线性DNA,超过20kb的线性DNA都只会和20kb的线性DNA拥有一样的迁移速率.而基因组DNA一般都远远大于这个数,所以一般情况下所有的DNA都只会聚集于一条带上,如果你跑了marker的话,就正好在20kb附近.

林芝县15696794009: 电泳怎么都跑不出条带 -
王荀联双: 电泳跑不出条带的原因可能有很多,以下是一些可能的原因:1. 样品中没有DNA,或者DNA太少,或者DNA已经降解.2. DNA较小而电泳时间太长,导致DNA跑了出去.3. DNA太大,还在加样孔附近,甚至还没有跑到胶里.4. 酶失活或在反应体系中未加入酶.例如,Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往导致无法进行PCR扩增.要解决这个问题,您可以根据原因尝试相应的解决方法,例如更换新酶或使用另一来源的酶,优化实验条件,确保样品中存在DNA等.

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