基因组DNA文库要怎样分离目的基因？
构建基因组dna文库是要分离细胞的
而且是染色体的DNA , 染色体DNA位于细胞核，而其他线粒体DNA，mRNA， tRNA都位于细胞质，首先分离细胞核，就能把这些先排除掉了。分离基因组DNA更简单直接。
基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题.所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因.常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选
直接获取
1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了（基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取.利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下：① 选用特定限制性内切酶,DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA.③ 经适当处理,将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组.④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒.⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌,形成大量噬菌斑,从而形成含有整个DNA的重组DNA群体,即文库.
2.cDNA文库法（即原教材中提到的逆转录法）.cDNA文库,是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体.虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因,但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多,相关工作量同样大得多.更为重要的是,在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子,但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在,所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列,即不能表达真核生物DNA.而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列（已在拼接过程中被去除）,所以可以以真核生物成熟mRNA为模板,逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达.因此,在基因工程中,cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法.
3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”.这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来.鸟枪法的具体做法是：用限制酶（即限制性内切酶）将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在受体细胞中大量复制（在遗传学中叫做扩增）,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来.如许多抗虫,抗病毒的基因都可以用上述方法获得.
用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便,缺点是工作量大,具有一定的盲目性.
人工合成
1.(主要是序列已知的基因).主要是通过DNA自动合成仪,通过固相亚磷酸酰胺法合成,具体过程可以网上查询,反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列,一般适于分子较小而不易获得的基因.对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物,再利用引物获得目的基因.
2.聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定.过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成.PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑
他只是给目的基因的扩增
基因文库的构建是目前基因工程的核心工作，也是分离目的基因的常用方法之一。首先，将某生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械方法切割成大小合适的片段，并将这些片段与适当的载体进行体外重组；再引入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增，从而获得所有阳性菌落，从理论上讲，这些重组子应包含有整个基因组DNA序列。
它提供全套遗传信息，即完整的基因组DNA，可以研究基因组中5′端控制基因转录的调控序列、内含子的分布和作用，以及重复序列的数量分布及大小，因此，称之为基因组文库（genomic：library）或基因文库（gene：library）（link：xlinkhref=i011902图4-20link）。构建高等植物基因组DNA文库时，通常采用λ噬菌体载体和黏粒载体。基因文库构建后，从文库中筛选基因的方法主要有核酸杂交法、免疫学检测法、DNA同胞选择法、PCR筛选法等。
应用λ噬菌体载体构建基因组DNA文库的一般操作程序主要包括（link：xlinkhref=i011902图4-20link）：（1）用适当的限制性内切酶消化基因组DNA，以得到约20kb的大片段。
（2）用限制性内切酶切割载体DNA，使载体形成与外源DNA相匹配的黏性末端。
（3）选用适当方法，去除λ噬菌体裂解生长非必需的内部片段。
（4）λ噬菌体载体臂与外源DNA大片段连接成较长的多联体。
（5）利用体外包装系统将多联体组装成完整的颗粒。
（6）重组噬菌体侵染大肠杆菌，形成大量噬菌斑，每一克隆中含有外源DNA的一种片段，全部克隆构成一个基因文库。
基因工程中为什么要建立基因文库?基因文库是如何建立的?
基因文库是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。目的：当我们要对某一基因结构和功能进行研究时，首先要获得此基因，最简便的方法就是直接从基因文库中获取。构建过程：将纯化的细胞基因组DNA用限制性内切酶消化，获得一定大小的DNA片段，将这些片段克隆到载体中，从而获得含有不同DNA片段的噬菌体...
构建基因组文库与cDNA文库均需要什么酶
基因组文库：DNA连接酶，限制性核酸内切酶 cDNA文库：逆转录酶，S1核酸酶，DNA聚合酶，DNA连接酶，限制性核酸内切酶 共同酶：DNA连接酶，限制性核酸内切酶
基因组文库文库最小值
N = ln(1 - P) \/ ln(1 - f)其中，N代表所需的最少克隆子数。P通常设定为目标基因在文库中的期望出现频率，一般情况下，我们期望找到99%的目标基因，即P等于0.99。f则是指克隆的DNA片段平均大小与整个基因组大小的比例。通过这个公式，你可以计算出为了确保找到所有目标基因，文库中需要包含的...
构建cDNA文库是否需要酶切
———让您久等了。。。是的，基因组文库需要酶切，cDNA文库不需要酶切，但这指的是目的基因。不管哪一种，目的基因要想与质粒连接，都是需要酶切的，因为必须把质粒切开，才能连接目的基因。基因组文库，是直接从染色体DNA分子上获取目的基因，肯定需要限制酶进行特异性切割。cDNA文库构建，是用细胞...
在基因组文库中筛选目的基因需要用到dna什么酶
A、构建基因组文库时，首先需用限制酶切割DNA和质粒，然后用DNA连接酶将两者连接起来形成重组质粒，最后将不同的DNA片段分别导入不同的受体菌群，形成基因组文库；而构建cDNA文库时，以mRNA为模板逆转录形成DNA的过程，该过程需要逆转录酶的参与，一般不需要限制酶，A正确；B、基因组文库包含某种生物所有的...
基因文库是怎么回事?
所以,基因的克隆、克隆基因的分离、分离基因的鉴定是利用基因文库技术分离目的基因的主要内容。一、基因文库的类别 1. 基因组文库与cDNA文库 根据基因类型,基因文库可分为基因组文库及cDNA文库。基因组文库是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上而形成的集合。 cDNA文库是指某生物某一...
基因文库构建的过程、原理及方法
第一种方法的掌握对技术的要求比较高,对多数人而言需要多次摸索才能找到最适条件;而后一种方法易于掌握,但有研究者根据复性动力学的原理也提出了其不利因素,即采用基因组 DNA 饱和杂交的方法会因为低拷贝的表达基因拷贝数少而无法被杂交上。目前已报到的均一化 cDNA 文库多是根据第二种原理构建的,常用策略有基于 ...
基因组文库的文库最小值
以保证所有的基因都在克隆子群体中。为了获得某种基因需要构建的基因组文库的最小值可按下面的经验公式估算：N=ln（1-P）\/ln（1-f）公式中，N表示基因组文库必须的克隆子数；P表示文库中目的基因出现的频率，一般情况下，期望值为99%，即0.99；f是克隆的DNA片段平均大小与基因组大小的比值。
构建基因组文库的步骤 基因文库的质量标准 建立基因组文库的方法 建立...
构建基因组文库的步骤A 分离基因组DNA;B 用超声波或限制酶等进行基因组DNA部分或完全降解;C 将降解物进行分级得到所需大小DNA片段;D 将DNA片段与载体连接(一般用λ噬菌体载体);E 将重组体导入宿主细胞;F 最后筛选鉴定重组子克隆。建立基因组文库的方法2—λ噬菌体基因组文库 可插入较大片段,最大可达23kb建立基...
重组DNA技术中可用于获取目的基因的方法有( )。
【答案】：A、B 应用重组DNA技术有时是为了分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列，这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因。AB两项，获取目的基因的方法包括：①化学合成，即通过DNA合成仪合成目的基因。②基因组DNA文库筛选，即利用限制性内切核酸酶切割染色体获取基因。③cDNA文库法，即以mRNA为模板合成...
訾腾能全： 可以利用基因工程技术来分离目的基因,大致步骤是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA;2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其克隆中的目的基因提取分离出来即可.
动力区17682978628： 如何从基因文库中获取目的基因? - ？
訾腾能全：[答案] 可以利用基因工程技术来分离目的基因,大致步骤是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA;2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条...
动力区17682978628： 1. 基因工程中,把外源基因(目的基因)分离出来的方法主要有哪些? - ？
訾腾能全：[答案] 1 直接从基因文库中获取(鸟枪法-用限制酶处理DNA,再根据所需选择目的基因) 2 间接获取方法(人工合成)包括:反转录法和化学合成法
动力区17682978628： 如何从基因组中分离出目的基因 - ？
訾腾能全： 1.鸟枪法,就是在培养皿中加入大量内切酶之后提取需要的目的基因,用DNA连接酶与目的基因连接后选择 2.合成法,根据表达的蛋白质来推出DNA构成后人工合成,当然,这样是不含内含子的这些是生物书上的,我刚刚毕业(高中)
动力区17682978628： 怎样从基因文库中提取目的基因 - ？
訾腾能全： PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA.在获取目的基因后才使用PCR技术.获得目的基因的方法:一、构建基因文库 提取总DNA.用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化...
动力区17682978628： 怎样从基因文库中找出目的基因 - ？
訾腾能全： 用DNA探针从基因文库中准确提取目的基因,由于DNA双链的核苷酸序列是彼此互补的,当DNA分子杂交时,首先是双链解开(该过程称为变性),根据所需基因的核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链,并用同位素标记,即成为探针.用这一探针探查基因文库中已经变性的DNA片段,如果有一个DNA片段能和探针片段互补结合而成双链(分子杂交),这一片段即含有所需要的基因.从基因文库中找所需要的目的基因,就是要根据目的基因的有关信息,例如,根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因翻译产物蛋白质等特性来获取目的基因.此法较为复杂.打了这么多字,希望对你有用.
动力区17682978628： 目的基因分离最常用的方法及原理?急 - ？
訾腾能全：[答案] 1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小,基因容易定位,用限制性内切酶将基因组切成若干段后,用带有标记的核酸探针,从中选出目的基因.真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因.图10-3-1 限制性内...
动力区17682978628： 怎样从基因文库中获取目的基因? - ？
訾腾能全： 有了基因文库,获取目的基因可以通过下面三种方法.1.可以通过碱基序列人工合成,2.通过特定的限制性内切酶将目的基因剪切下来,3.可以用mRNA通过逆转录合成目的基因.
动力区17682978628： 如何从基因文库中找到所需要的基因? - ？
訾腾能全： 从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交.首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆.同时另行制备...
动力区17682978628： 在做转基因实验时,怎样从基因组文库中提取目的基因?？
訾腾能全： 得,我回答你的追问哈 用内切酶切割的DNA,就是第一步提取的全基因组. 我多嘴几句: 你的标题问的是基因文库.这涉及到构建某细胞的全基因组文库的问题,当构建文库完成后,可以根据目的基因的特性,进行提取. 构建E.coli全基因组文库:对E.coli进行提取基因组DNA,然后用酶切,用适当的载体对酶切产物随机整合,然后将整合后的重组载体,转化入宿主细胞.(一般没个宿主细胞只能吸收一个重组载体,这是细胞的特性.)然后根据所需目的基因的转录翻译产物进行鉴定,筛选出阳性克隆,然后进行提取载体,再用之前的酶切,电泳分离目的基因片段. 回答完毕. 有问题,发邮件,留言均可.
