PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR傻傻的我分不清楚
作者&投稿：房轻 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
PCR技术，即聚合酶链式反应，是一种体外快速扩增DNA片段的关键工具，通过模拟细胞内的半保留复制过程实现。其核心是通过控制温度变化来执行变性、退火和延伸三个步骤，将微量模板DNA扩增到大量，便于后续研究和检测。
PCR技术主要分为几类：
- 普通PCR，主要用于双链DNA扩增，通过琼脂糖凝胶电泳定性分析产物。
- 实时荧光定量PCR（qPCR）是第二代PCR，通过实时监测荧光信号，相对定量目标基因的拷贝数或表达水平，但结果受模板浓度影响。
- 数字PCR（dPCR）是绝对定量，基于泊松分布，直接测定靶序列的原始浓度，具有极高精确性。
- 逆转录PCR（RT-PCR）针对RNA分子，先逆转录成cDNA，再进行DNA扩增。
- RT-qPCR结合了RT-PCR和qPCR，可同时实现RNA的逆转录和定量分析。
PCR反应体系包括模板DNA、引物、底物、DNA聚合酶和PCR缓冲液等基本成分。每种PCR变体因其特性，适用于不同的研究领域，如基因表达、病毒载量检测等。
qPCR检测,你需要知道这些
qPCR在快速发展的同时,也产生了一些问题,如判断标准不一致,检测精确度没有统一标准,RNA检测假阳性较严重等。2009年,多个科研院所及医疗单位合作发布了qPCR的 MIQE指南 ,该指南规范了qPCR的常用术语,如Ct应称为Cq,RT-PCR应写作RT-qPCR等,并对分析的敏感性、特异性、精度等进行了规范性要求,此外指南还对样本处理...
善垄阿糖： 【q-RT-PCR技术】就是结合了荧光定量技术的反转录PCR(反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程,是DNA生物合成的一种特殊方式):先从RNA反转录得到cDNA(RT),然后用Real-time PCR进行定量分析(qPCR). 【...
福鼎市13756471196： Real time PCR 跟RT - PCR有什么区别 - ？
善垄阿糖： realtime pcr简称qpcr,是一种实时监控的pcr,每个循环都会收集信号,最终可以看出起始模板量.rtpcr是逆转录pcr,是以rna为模板合成cdna,然后再进行pcr的过程
福鼎市13756471196： 关于PCR的问题有点糊涂 Real time PCR 和 RT - PCR(逆转录PCR) Q - PCR RT - QPCR - ？
善垄阿糖： 一般RT-PCR指的就是real time PCR,qPCR基本上与RT-PCR是等同的.没有见过RT-qPCR这样表述的.逆转录后再做PCR这是两个独立的过程,先做逆转录,再做PCR,这里的PCR可以是普通PCR,也可以是qPCR.做逆转录的时候一般是需要用管家基因作为内参的,但是qPCR不一定需要,要看你的目的.通过比较管家基因与目的基因在不同条件下的表达水平的差异,是常用的半定量方法,半定量也加相对定量.相应的有绝对定量,就是绘制标准曲线,测目的基因和病原体的拷贝数
福鼎市13756471196： 实验菜鸟求问:RT - PCR(检测mRNA的)是不是就是realtimePCR的一种啊?如果不是的话它们有什么区别呢? - ？
善垄阿糖： 不相同,RT-PCR是逆转录PCR,它是以RNA为模板,反转录形成DNA的PCR反应,主要是为了去除DNA中的内含子.后者是实时定量PCR,其以DNA为模板,主要是为了测定初始时模板的浓度.
福鼎市13756471196： RT - PCR技术中所涉及的参数有哪些? - ？
善垄阿糖： 域值,CT值
福鼎市13756471196： real - time PCR可以直接以细菌的DNA为模板进行定量分析吗?还是real - time PCR 是针对RNA的啊? - ？
善垄阿糖： 当然可以. real time PCR最终是对PCR的模板做定量,只是现在较多用于基因表达差异比较与分析,也就是mRNA的定量(RT-qPCR),所以给生手的影响是用于RNA.但要注意的是,即使是mRNA,也有逆转录的过程,也就是先逆转录cDNA,这才是rt-pcr真正意义的模板,分析的是cDNA的量,进而反应mRNA的量. 直接用DNA来做,那就更可以了,反应的是模板DNA量的差异.比如对某些DNA病毒,就可以直接以病毒DNA为模板来RT-pcr,你用菌的DNA有何不可.
福鼎市13756471196： 多重荧光定量pcr 最多检测多少种 - ？
善垄阿糖： 这个看你自己的设置.qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道.理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照.那么可以做94*4=376个.当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等.具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个试剂盒可以同时检测54种突变.
福鼎市13756471196： 什么是qPCR引物? - ？
善垄阿糖： 就是quantitative PCR(定量PCR) 引物 实时定量PCR可以用于DNA技术,RNA及蛋白质分析和诊断
