测定蛋白质分子量的技术体系有:a凝胶过滤层析 b SDS-PAGE c 生物质谱 d免疫电泳e等电聚焦电泳
电泳,这种方法不是用于分离蛋白治离子交换城西是最好的。
蛋白定量的测试方法有很多种,其中较为常见的有五种,分别是Bradford法、Bradford斑点试验、Coomassie 斑点试验、紫外分光度检测法及BCA法这五种。
在生化实验中,对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析,是经常进行的一项非常重要的工作。蛋白质是一种十分重要的生物大分子,它的种类很多,结构不均一,分子量又相差很大,功能各异,这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法带来了许多具体的因难。
扩展资料
蛋白定量分析也就涉及到生产科研的多个领域及行业,也是生物学科、食品检验及掺假掺伪、临床检验、诊断疾病和质量检验中最常见的方法。
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功,或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存,需对细胞裂解液进行蛋白定量。
为了判定蛋白的产量,需对纯化好的蛋白进行定量。为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记,同样需首先对蛋白样品进行定量,以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。
参考资料来源:百度百科-蛋白定量
凝胶过滤层析中,分子量越大的蛋白流出的越快。(用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内,在同一条件下层析,记录每一分钟成分的洗脱体积,并以洗脱体积对分子量的对数作图,在一定分子量范围内可得一直线,即分子量的标准曲线。测定未知物质的分子量时,可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗肿后,根据物质的洗脱体积,在标准曲线上查出它的的分子量。 )
SDS-PAGE电泳,因为蛋白经过SDS变性,基本上形状和所带电荷都类似,因此迁移率之和大小有关。(SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。)
生物质谱,可以测量生物分子的核质比。(质谱分析是一种测量离子荷质比(电荷-质量比)的分析方法,其基本原理 Joseph John Thomson是使试样中各组分在离子源中发生电离,生成不同荷质比的带正电荷的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器。在质量分析器中,再利用电场和磁场使发生相反的速度色散,将它们分别聚焦而得到质谱图,从而确定其质量。)
免疫电泳利用抗原抗体反应的特异性,与分子量大小无关
等电聚焦电泳利用不同蛋白等电点不同
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理&步骤
SDS-PAGE,即十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,是用于测定蛋白质分子量、分离、分析、纯化、定性、定量和少量制备蛋白质的技术。其原理涉及蛋白质样品的前处理、SDS的使用、溴酚蓝的作用以及聚丙烯酰胺凝胶的结构。在蛋白质样品制备中,还原剂如巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)用于破坏二硫键,消除二级结构...
聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量
表3不同分子量范围的蛋白质和核酸在凝胶电泳 中所选用的凝胶浓度百分率 物 质分子量范围适用的凝胶浓度(%)蛋白质<10 1-4×104 4×10-1×105 1-5×105 >5×10520-30 15-20 10-15 5-10 2-5 核酸<104 104-105 105-2×10610-20 5-10 2-3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续的和不...
SDS-PAGE检测蛋白质分子量的基本原理
在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,因而消除了蛋白质原有的电荷差别,使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量,而与蛋白质...
蛋白质含量的测定方法
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。四、BCA法:实验原理:BCA检测法是Lowry测定法的一种改进方法。与Lowry方法相比,BCA法的操作更简单,试剂更加...
SDS-PAGE测定蛋白质分之量的基本原理是什么?简述一下主要步骤?同志们帮...
使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,...
如何准确测定样品中蛋白质的含量
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速 ,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要...
在生物学里面SDS-PAGE表示什么啊
如果加入一种试剂使电荷因素消除,那电泳迁移率就取决于分子的大小,就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年,Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇,可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电,使各种蛋白 质—SDS...
高一生物蛋白质那一章节所需要用到的所有计算公式
点拨:(1)该蛋白质分子形成过程中,脱水分子数= 51-2=49,形成3个二硫键(-S-S-)时脱掉6个氢,因此,分子质量减少量=49×18+6=888;(2)形成肽键数=脱水分子数=49,肽键可表示为:-CO-NH-;(3)每条肽链至少含有一个氨基和一个羧基,两条肽链至少含有2个氨基和2个羧基。(4)因为一个...
如何用NCBI查询一种蛋白质的分子量
1、电脑浏览器百度搜索NCBI,直接点击图示链接进入。2、下一步打开其中的首页,需要搜索对象并选择跳转。3、这个时候如果没问题,就继续确定浏览所查询的蛋白质。4、这样一来等得到相关的结果以后,即可实现要求了。
蛋白质的分子量测定方法
http:\/\/www.musc.edu\/pharm\/msgb.html http:\/\/www.eng.uc.edu\/~gbeaucag\/Classes\/Characterization\/MolecularWeighthtml\/MolecularWeight.html http:\/\/mrw.interscience.wiley.com\/emrw\/9780471140863\/cp\/cpps\/article\/ps0712\/current\/pdf if you know the amino acid sequence, you can calculate:http...
訾梦炎热:[答案] a,b,c 凝胶过滤层析中,分子量越大的蛋白流出的越快.(用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内,在同一条件下层析,记录每一分钟成分的洗脱体积,并以洗脱体积对分子量的对数作图,在一定分子量范围内可得一直线,即分子量的标准曲...
武隆县13228739046: 测量蛋白质分子质量有哪些主要方法 - ?
訾梦炎热: 1.根据化学组成测定最低分子量用化学分析方法测出蛋白质中某一微量元素的含量,并假设分子中只有一个这种元素的原子,就可以计算出蛋白质的最低分子量.2. 渗透压法当蛋白质浓度不大时,可用以下公式: M=RT/lim(∏/C) 其中R是气体常数(0.082),T是绝对温度,∏是渗透压(以大气压计),浓度单位是g/L.3. 沉降速度法: M=RTs÷D(1-Vρ) 其中s是沉降系数,D是扩散系数, ρ是溶剂的密度, V是蛋白质的偏微分比容.4. SDS-PAGE法: lgM=K1-K2μR 其中K1和K2是与试验条件有关的常数.用已知分子量的标准蛋白作标准曲线,即可求出未知蛋白的分子量.
武隆县13228739046: =测定蛋白质分子量的主要方法有哪些 - ?
訾梦炎热: 知道蛋白质分子量、氨基酸组成计算器 http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/ 一般的方法: sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 [原理] 十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, 简称sds)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分...
武隆县13228739046: 简述蛋白质分离纯化与鉴定的主要方法有哪些 - ?
訾梦炎热: 分离蛋白质混合物的各种方法主要是根据蛋白质在溶液中的以下性质:1)分子大小;2)溶解度;3)电荷;4)吸附性质;5)对其它分子的生物学亲和力等进行分离.常见的分离提纯蛋白质的方法有:1、盐析与有机溶剂沉淀:在蛋白质溶液中...
武隆县13228739046: 大分子如蛋白质的分子量如何测定及其原理 - ?
訾梦炎热: 一般的方法:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 原理:十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量http://zhidao.baidu.com/question/39155032.html?si=1
武隆县13228739046: 凝胶过滤法和SDS法哪个更加准确测定蛋白质分子量 - ?
訾梦炎热: 蛋白质的形状影响凝胶过滤时候的行为,分子形状长的蛋白质在凝抄胶过滤的时候有类似于分子较大的蛋白的行为,用SDS-PAGE测定的蛋白zhidao质分子量应该比较准确,因为变形后的蛋白质迁移速度只取决于蛋白质分子大小.
武隆县13228739046: 蛋白质的结构的测定方法都有什么啊,? - ?
訾梦炎热: 蛋白质三级结构测定主要有X射线衍射法、核磁共振技术、三维电镜重构技术三种方法.X线晶体衍射是最经典的测定生物大分子结构的方法.蛋白质晶体衍射中最大的难点就在于蛋白质的结晶,也在一定程度上限制了它的发展.NMR技术后起之秀,相对于X-RAY较为简单,近年来技术越发成熟,可测定蛋白质的分子量也在攀升,而且其分辨率也很高,三维电镜重构技术也是结构生物学研究中的一种较新的技术.技术难点在于算法.
武隆县13228739046: 测定蛋白质分子量方法有哪些? - ?
訾梦炎热:[答案] SDS-PAGE 超速离心 凝胶过滤 粘度法 生物质谱技术