求助：细胞培养中的问题
细胞培养中的一个小问题
如果，在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；
2）血清质量不好，反复冻融的结果；
3）配制培养基的PH值偏高，不宜细胞生长；
4）配制培养基的水质、容器不合格。
可应用离心、过滤的方法去除这些黑点。
细胞培养中如何防止黑点生成：
1） 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老；
2） 尽可能地减少血清冻融次数；
3） 培养基无需37℃水浴；
4） 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2；
5） 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
酶液对细胞培养很重要，常用的消化酶有胶原酶和胰酶（不同型号），还有混合酶液，原代细胞品牌专家齐氏生物认为酶液的浓度和消化时间对细胞培养至关重要。一般酶消化的问题，主要集中在酶液浓度和消化时间上，具体可以追问，希望能帮到你！
有什么问题也没说啊。下面是关于细胞培养的资料，你看一下吧
设施器材
设施：超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
器材：
一、玻璃器材
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品（最好是硅制品）做各种瓶或试管的塞子、盖子。
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、注射器和针头
培养基
几种常用细胞培养基产品
⒈ BME（basal medium eagle）基础伊格培养基
⒉ MEM
⒊ DMEM
⒋ IMDM
⒌ RPMI-1640
⒍ M199
⒎ Mccoy's 5A
⒏ F10\ F12 \DMEM混合F12（三）几种常用细胞培养配套试剂的配置（缓冲液、平衡盐溶液等）
1、无钙、镁、离子溶液（1000ml)
氯化钠（NaCl)8g磷酸二氢钠、（NaH2PO4H20）0.05g、氯化钾（KCl)0.2g、碳酸氢钠（NaHCO3）1g、柠檬酸三钠(Na3C6H5O7,H20）1g、葡萄糖1g、加去离子水或双蒸水至1000mL
2、PBS（Phosphate-Buffered saline）磷酸盐缓冲液
甲液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、磷酸氢二钠（无水）28.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL
乙液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钠（无水）2.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL
甲、乙液于4℃保存，使用时按表3-2所示比例，配制成所需pH浓度，高压灭菌后室温保存。
3、Hanks液（HBSSHank‘s Balanced salt solution)
⑴母液甲（20x）配法
①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O（A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌（此液应单配，单溶）。
待上述两溶液中的“溶质”全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL氯仿作为防腐剂，置4℃保存。
⑵母液乙（20×）配法
①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖（A.R)20.0g溶于800ml双蒸水中。
②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃研钵后加0.01N、NaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。
待上述各“溶质”完全溶解后，用双蒸水补至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐剂，置40℃保存。
3）使用液（1×）配法
取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，分装后，塞好瓶塞，挂上标志。以115℃高压灭菌25分钟（以免葡萄糖破坏），置室温后4℃保存，可使用几个月。临用前，用7.5%NaHCO3调至所需pH。
4、Eagle's液（EBSSEagle's Balanced salt solution)
是一种在二氧化碳（CO2）环境中短期维持细胞活性的平衡盐溶液，可用于细胞解离前的清洗、细胞或组织的运输、细胞计数时稀释、溶液的配置等。
5、HEPES液
生物缓冲液，化学性质稳定，在PH7.2~7.6范围内，比NaHCO3缓冲液的缓冲能力更强。
6、NaHCO3缓冲液
常规缓冲体系的一部分，但是不稳定，易受空气中CO2的含量而改变PH值，影响缓冲效果。
具体步骤
一、复苏[1]
1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动（注意防止盖子不紧致使液体进入冻存管）。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到37℃的5%CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5.根据细胞增长速度2-3天换一次培养基。
二、传代
1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加入等体积的含血清的培养基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞，让细胞悬浮起来。
6.把细胞吸到10ml或15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、冻存
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
请教:植物原生质体培养中,台盼蓝染色的方法以及台盼蓝染液的配制。
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细胞培养基中的添加剂及其作用
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求助:细胞膜蛋白免疫荧光染色问题
细胞膜蛋白免疫荧光染色问题 1、问:用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白，两者操作过程有哪些不同?参考见解:只是固定方法不同。细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。2、问:近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?参考见解:我正在做冰冻...
BSA偶联棕榈酸钠\/BSA偶联油酸钠常温析出、室温沉淀、水浴助溶、浓度不...
2. 溶解过程中的方法和设备不当，可能导致溶液在低温或室温下沉淀，影响细胞模型的稳定性。这导致在细胞培养过程中，需要频繁的“培养基加热”和“水浴助溶”，与细胞37℃的生长环境产生冲突，影响实验效果的重现性和效率。理想解决方案：无析出、无沉淀的稳定配方 理想的高脂细胞添加剂需要满足以下标准：...
帮忙找一下植物组织培养方向的论文 ,要写毕业论文 很重要.
植物组织培养是在无菌条件下,将离体的植物器官(根尖、茎尖等)、组织(形成层、花药组织等)、细胞(体细胞、生殖细胞等)、胚胎(成熟或未成熟的胚)、原生质体等在人工配制的培养基上培养,给予适宜的培养条件,诱发其产生愈伤组织或潜伏芽或长成完整的植株的技术。1.2原理 植物组织培养的依据是植物细胞的“全能性”及...
5.问:①根据下表分析各瓶细胞的生长情况 ②根据你的判断应采取什么措施...
根据判断应采取的措施如下：甲瓶细胞生长不良，培养基污染严重，需要更换新的培养基并重新接种细胞。乙瓶细胞生长良好，但培养基中可能缺乏某些营养成分，需要进行营养补充。丙瓶细胞生长良好，但培养基中存在一定程度的污染或氧气不足等问题，需要进行检查和调整。丁瓶细胞生长不良，培养基可能存在问题，需要...
细胞培养有几种类型,每种有何特点
细胞培养 细胞培养（cell culture）细胞培养的含义，简单地说即是把来自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内的体外环境中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以观察细胞的生长、繁殖、衰老等生命现象。还可以利用细胞进行细胞工程与细胞癌变等重大问题的研究。细胞培养也是研究病毒与研制疫苗的基础...
细胞培养
动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。培养的动物细胞大都取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，将组织取出来后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中，在培养箱中培养，这个过程称为原代培养。细胞在...
在细胞工程中有许多实验都要问是否体现了全能性,怎么判断?
全能性的概念想必你懂。植物细胞培养和植物组织培养都是体现全能性的 。动物细胞培养， 像单克隆抗体不体现全能性， 因为动物细胞细胞质的抑制作用， 动物细胞只能不断增值。 它的原理是细胞的增殖， 就不是全能性了。题目问全能性的话， 就看它能不能长成一个完整的植株了 ...
培养基有点不透亮是不是细胞污染了
细胞培养中常见的污染情况总结如下，你可以对比一下。1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续...
始彩锋锐： 1、实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验.2、无菌操作.操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素.3、用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间.贴块法分离细胞时,注意动作要轻柔,不要伤到细胞组织,组织块边缘尽量平整有利于细胞游离.4、培养液的选择.不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择.传代细胞培养还要注意:1、无菌操作;2、控制消化时间;3、及时关注细胞生长状态
阿克苏地区19567903807： 请回答下下面有关动物细胞培养的问题.(1)在动物细胞培养时,将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基称为___培养基.通常在培... - ？
始彩锋锐：[答案] (1)培养图示重组细胞时,将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为合成培养基.动物细胞所需的营养物质:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等,还需加入血清、血浆等天然物质.通常在...
阿克苏地区19567903807： 请回答下列有关动物细胞培养的问题:(l)在动物细胞培养中,通常在合成培养基中加入一定量的抗生素,其目的是___.(2)在使用合成培养基时,通常需... - ？
始彩锋锐：[答案] (1)通常在动物细胞培养液中加一定量的抗生素,以防止培养过程中的污染.(2)在动物细胞体外培养过程中,在使用合成培养基时通常需加入血清、血浆等天然成分,补充培养基中缺乏的物质.(3)在动物细胞培养时,当...
阿克苏地区19567903807： 细胞培养过程应该注意什么问题补充:可是很难保证完全无菌,很容易就 ？
始彩锋锐： 细胞培养过程中的注意事项 ⑴温度 温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长.利用冷冻保藏细胞可保持细胞的原有分裂分化能力.温度过高导致细胞死亡.这主要是由酶和蛋...
阿克苏地区19567903807： 求细胞培养过程中一些注意的小问题 ,最好是经验之谈. - ？
始彩锋锐： 首先培养基 胰酶 FBS什么的都是要滤一遍的 该灭菌的都要灭菌的 接下来开始实验~ 超净台要照紫外至少半小时,最好把细胞间也照下紫外 开始后先用酒精棉把超净台台面擦一下 点燃酒精灯 任何拿进超净台的东西最好先喷下酒精 除了从培养箱...
阿克苏地区19567903807： 原代细胞培养常见问题有哪些 - ？
始彩锋锐： 原代细胞培养常见问题的原因及其解决的办法: 1. 培养液pH值变化太快 可能原因 (1)CO2张力不对 (2)培养瓶盖拧得太紧 (3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足 (4)培养液中盐浓度不正确 (5)细菌、酵母或真菌污染 建议解决方法 (1)按...
阿克苏地区19567903807： 回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的 - ... - ？
始彩锋锐：[答案] (1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触性抑制.此时,瓶壁上形成的细胞层数是单层. (2)随着细胞传代次数的增多,绝大部分细胞分裂停止,进而出现衰老甚至死亡...
阿克苏地区19567903807： 回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面___时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的___.... - ？
始彩锋锐：[答案] (1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制.此时,瓶壁上形成的细胞层数是单层(或一层).要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来,需要用胰...
阿克苏地区19567903807： 回答下列有关动物细胞培养的问题.(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到表面___时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的___.此时,... - ？
始彩锋锐：[答案] (1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制.此时,瓶壁上形成的细胞层数是单层(或一层).(2)随着细胞传代次数的增多,绝大部分细胞分裂...
阿克苏地区19567903807： 动物细胞培养问题 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理然后分瓶继续培养让细胞继续增殖(传代培养)这里的分瓶步骤应该如何分?是用培养液稀释... - ？
始彩锋锐：[答案] 如果需要的细胞量不大,可以扔掉一部分;如果需要很多,就都留着,分到几个瓶子里.以一分三为例:1,去除培养基,PBS洗一遍,胰酶消化,消化完毕后,用完全培养基终止消化,然后将液体平分到3个瓶子中,补适量培养基即可.
