超高效液相色谱的优缺点

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高效液相色谱法的优缺点~

优点:分离效率高,选择性好,检测灵敏度高,操作自动化,应用范围广;
与气相色谱法相比具有的优点:不受试样的挥发性和热稳定性限制,应用范围广;流动相种类多,可通过流动相的优化达到高的分离效率;一般在啊室温下分析即可,不需高柱温。
缺点:分析成本高,液相色谱仪价格及日常维护费用贵,分析时间一般比气相长。

原理是一致的。
不同的地方一个是仪器,一个是色谱柱。
后者超高效液相色谱,可以缩短检测时间,节省时间,节省流动相,大大地提高了效率。
先说色谱柱,超高效液相色谱柱的粒径会更小,柱子也更短。如果说样品流过液相色谱柱的感觉是流过满是石头的管路,那么超高效液相色谱柱就是装满了沙子的管路。一般液相色谱柱的粒径是5um,超高效液相色谱柱的粒径有3.5um,3.0um,甚至有1.7um。这样样品和固定相的吸附会更加充分,分离也会很快。
再说仪器,刚才说到的满是沙子的管路,因为色谱柱的粒径减小,所以柱压会大大提高。这样普通的液相色谱仪也就不耐受这种高压了。所以超高效液相色谱仪,从泵,到各个管路都是耐高压的。这样可以充分发挥色谱柱的作用,快速分离样品。

上面一张图是高效液相色谱图,15min分析出的一个样品。下面一张图是超高效液相色谱图,同一个样品,7min就分析完毕。而且峰型更好。

超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同,所改变的地方有以下几点:
小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱,例如常见的十八烷基硅胶键合柱,它的粒径是5um,而超高效液相色谱的色谱柱,会达到3.5um,甚至1.7um。这样的孔径更加利于物质分离
(2)超高压输液泵的使用。
由于使用的色谱柱粒径减小,使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。
(3)高速采样速度的灵敏检测器。
(4)使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术;
(5)仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台,实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。
与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍,它缩短了分析时间,同时减少了溶剂用量降低了分析成本。
不过由于实验过程中仪器内部压力过大,也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低,仪器的连接部位老化速度加快,包括单向阀等部位零件容易出现问题等。




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