为什么使用30%的甘油保存菌种?请求指教

作者&投稿:绽孙 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
为什么用甘油保存菌种?原理是什么?干燥?隔绝空气????~

1、冷冻保存时菌液会被冻起来,内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等,加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。
2、简单来说就是抗冻,原理是甘油能够提高水体的黏稠度,使其冰点提高,防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害,通常使用甘油的终浓度在10%~20%,该范围外的浓度会对细胞产生毒性,质粒会很容易丢失。
3、高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性,如果该菌只用一次怎么化都没关系,甘油浓度太高质粒就很容易丢失。

扩展资料:
按照细菌的生长曲线理论,对数生长期的菌种活力最大,最适合收集。针对不同类型的细菌和培养方式(培养基、振荡培养还是静置培养),收集的时间会有不同。一般细菌,振荡培养4-6h为宜,静置培养8-12h为宜。当然,这是针对要求比较高的研究型实验室(研究分子转化和蛋白表达等)的操作。对工业实验室来说,最好收集在24h之内的菌种。
在临床上有研究,链球菌 、奈瑟氏菌 、弧菌等需特殊方法保存的细菌 ,冻存 3个月后细菌基本死亡,这可能 是因为陈旧培养物中细菌自身所产生的有害代谢产物过多 ,使其在保存过程中容易死亡。
为了排除培养物种有害代谢物质的损害和保证低温保藏过程中的营养性,有一个好的操作:离心收集细菌细胞,倒掉旧培养液,加入新鲜培养液后与甘油混合均匀。这个操作也可以起到富集细菌的目的。
参考资料来源:
百度百科-菌种保藏

简单的就在原来的培养基,如LB,或生理盐水中加甘油,终浓度在20%左右,悬浮沉淀后装小管扔冰箱冻起来就可以了。但时间不能太长,不要超过2~3个月,时间长了要重新活化、筛选。
甘油和水是互溶的,根本不是什么密封作用!甘油是为了防止冷冻结晶破坏细胞

微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理从而达到保藏目的。而且,甘油管冷冻保藏法适用于一般细菌的保存,同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种,适用范围广,操作简便,效果好,无变异现象发生。

甘油-生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液,其原因是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用,且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分,从而更好地保护了待保存的菌株。

扩展资料

1、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥),其中真空冷冻干燥法最常见。

2、寄主保藏法

寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。

无论采用何种保藏方法,首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏,最好保藏它们的休眠体,如分生孢子、芽孢等。其次,应根据微生物生理、生化特点,人为地创造环境条件,使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。

参考资料来源:百度百科-菌种保藏



1. 20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)

2. 将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管,4~6h增菌后,加入适量甘油一生理盐水保存液,-20℃冰箱保存;链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管,在5%~10%CO2中经8~10h增菌后,加入适量保存液,80℃低温冰箱保存;真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤,不做培养,加入保存液后,-20℃冰箱保存。结果 在连续3年实验期内,各菌种保存效果良好,且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。结论 使用甘油生理盐水保存法来保存菌种,各菌种保存时间长,方法简便,特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。

3. 常用的是终浓度 10-30% 的甘油。
由于纯甘油十分粘稠,很难定量,一般配成终浓度 50% 的水溶液,高压灭菌后室温保存即可。使用时按 50% 甘油:菌液 = 1:1 混合均匀,然后迅速冻结。

A. 先把甘油稀释成50%,然后灭菌
这样20%的终浓度用400微的菌体加600微的50%甘油混合不就可以啦
纯的甘油太粘稠啦,用枪不好吸的

B 终浓度15%。甘油配成80%的浓度,到时候加800微升菌体,200微升甘油就好。】


果园除草用每亩要多少草甘膦
10%草甘磷用1000ML左右,根据草的大小和种类,可以自行调节。41%浓度一般200-300ML就可以了。如果多年生的杂草,可以加有机硅来增效,重要的一点是药液一定用清水。

丨斤装的草甘磷百分之三十放多少盖子?
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草甘膦能和封闭除草剂混用**。草甘膦是灭生除草剂,丁草胺封闭药是封闭除草剂,丁草胺与草甘磷一起使用,连封闭带除草,最好现配现用,每亩地用30%草甘膦水剂75-100g,50%丁草胺乳油0.15kg,兑水45kg,另外草甘膦和乙草胺封闭药一起打可以延长控草期。

30%的草甘膦含量误差是多少
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青县17851883875: 大肠杆菌感受态细胞制备中,第八步中氯化钙溶液中甘油的作用是什么 -
巢万孚卫:[答案] 菌种保存采用甘油种结合超低温(-70℃)保存的方法,即用无菌甘油悬浮工程菌,并使甘油终浓度为30 %(V/V),所获物即为工程菌的甘油种.低温可使工程菌的生命活动处于非活跃状态而能较长时间保存细胞活力、减少基因变异,而30%的甘油可保...

青县17851883875: 用甘油保存细菌,甘油的浓度究竟多少合适呢? -
巢万孚卫: 对绝大多数细菌来说,甘油终浓度10-30%都可以.甘油不太好吸取,所以通常都是配置成稀一点的储液,如50%的甘油.这个根据个人习惯就好,多寡随意,不是固定的.

青县17851883875: 甘油法低温保藏大肠杆菌 -
巢万孚卫: ... 甘油和水是任意比混溶的. 不是甘油和种子液1:1,这个只是某个方法而已,重要的是甘油量要在20-50%之间不等,看你冻在多少度的冰箱里了.但这个毕竟是短期的保藏方法, 你要保藏得久一点,或者再短一点,液氮、干燥、平板等等都是可以用来保藏大肠杆菌的,只是甘油法比较常用.

青县17851883875: 如何用20%甘油保存菌种 -
巢万孚卫: 20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)

青县17851883875: 细菌能象冻存细胞那样冻存吗 -
巢万孚卫: 你指的是保存菌种吧?一般菌种是需要加等体积30%甘油的,遵照速冻缓溶的原则来保存.即加完甘油后直接扔到液氮里冻,然后放在-80冰箱即可长期保存,随用随化.

青县17851883875: 甘油浓度高保菌会导致菌种不稳定吗 -
巢万孚卫: 由于甘油具有吸水性,浓度太高了会吸收了皮肤的水份而不利皮肤,太低了又不能吸收空气中的水份而起不到保温作用,所以浓度一定要适中.

青县17851883875: 甘油法低温保藏大肠杆菌我想问一下,甘油低温保藏大肠杆菌,那个30%的甘油怎么配置,油不是和水会分层的,还有甘油保藏大肠杆菌的时候为什么是甘... -
巢万孚卫:[答案] . 甘油和水是任意比混溶的. 不是甘油和种子液1:1,这个只是某个方法而已,重要的是甘油量要在20-50%之间不等,看你冻在多少度的冰箱里了. 但这个毕竟是短期的保藏方法, 你要保藏得久一点,或者再短一点,液氮、干燥、平板等等都是可以用...

青县17851883875: 甘油保藏菌种 -
巢万孚卫: 你可以这样,把你平板上的单菌落扩大培养一下,这些准备好之后找一些灭过菌的EP管,按照60%—80%甘油的加入量,保存零下四十度.例:一个一毫升的EP管取菌液2_-4ml甘油6-8ml,充分混匀即可.

青县17851883875: 甘油是无色的为什么存菌用的是黄色 -
巢万孚卫: 甘油保存菌种的条件是需要冻存.主要靠低温来降低微生物活性,达到保存的目的.加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞.

青县17851883875: 甘油保存菌种的时候是否灭菌? -
巢万孚卫: 甘油保存菌种应该高压灭菌,甘油不想酒精等有机溶剂对细菌有损伤作用,如果不灭菌,拿出来直接使用肯定会长出杂菌,一定会影响实验的.

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