打算做组织的转染，有哪位朋友给点建议或者资料？电转的效率如何？谢谢！
电转染、lipofectin都可以
一般不应该是质粒的问题，如果你担心是反复冻融的问题，建议分装或是在4摄氏度解冻。
最容易出问题的应该是转染试剂和细胞状态。
不知道你用的什么转染试剂，PEI因为带正电荷，通常来说比较容易进细胞，但是毒性较大。通用的转染试剂是Lipofectamin2000,但是针对不同的细胞，转染试剂也不一样。
至于细胞，看贴壁还是悬浮，通常说来，贴壁容易转。如果是悬浮的，建议你离心后再转染。
1电转细胞的准备
1.1贴壁细胞
（1）电转前1-2天，将细胞转移至75cm2细胞培养瓶培养，至转化前使细胞汇合度约50-70%。此时细胞数约为2-10x106，而每次电转需约1-10x105个细胞。
（2）12ml PBS缓慢冲洗细胞。
（3）吸出PBS，用0.4ml胰蛋白酶消化细胞。
（4）加入10ml含血清的培养基，中和胰酶。
（5）400x离心5-7min收集细胞。
（6）用PBS、Hepes、无血清培养基等重悬细胞，使之密度为1-5x106cell/ml。
1.2悬浮细胞
基本等同1.1。
2电转化
（1）设置电转程序，或选择预设程序。
（2）将线性化的重组质粒加入电转杯，所需质粒量根据细胞不同而定，一般起始浓度为10-50ug/ml
（3）向电击杯中加入细胞，颠转电击杯使之混匀。细胞浓度和体积的使用建议请参照表一。
（4）将电击杯放入电击槽中，脉冲电击一次。
（5）脉冲后，将细胞转移至已含0.5ml培养基的孔中
（6）轻轻晃动孔板，使细胞均匀分布，培养箱培养。
（7）电转24-48小时后，基因瞬时表达。
表一
电击杯
(cm) 细胞浓度
(cells/ml) 细胞体积
(µl) 电击后生长条件
0.2 1x106 100 48孔板 0.5 ml 生长培养基
0.2 5x106 400 6孔板2 ml生长培养基
0.4 2.5x106 200 6孔板 2 ml生长培养基
3电转化的试机和方案
（1）含10%胎牛血清的培养基
（2）Opti-MEM培养基（英潍公司）
（3）胰酶-EDTA：0..5%胰酶；0.53 mM EDTA
（4）PBS：137 mM NaCl；2.7 mM KCl；9.5 mM 磷酸盐；Ph7.3
（5）HEPES 缓冲液：10 mM Hepes；pH 7.3；40 mM NaCl
（6）磷酸盐缓冲蔗糖：272 mM Sucrose；10 mM sodium phosphate,；pH
（7）HEPES 缓冲缓冲蔗糖：272 mM Sucrose；10 mM Hepes；pH 7.3
电转化效率根据质粒量提高而提高，约20%——70%。
请懂克隆知识的人进!
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中叔变普沁： 你买来之后你自己要培养,满满的一瓶先分瓶吧,大概培养到细胞的对数生长期,或者汇合度大概在60%-70%左右的时候可以进行保种.保种之后最好复苏一管用来检验.你脂质体转染如果用的是lipofectimin2000的话,步骤网上一大把.我用过lipofectimin2000和vigrous的,步骤都可以再网上查到的.你转染后也要分为瞬时转染和稳定转染的.稳定转染需要用抗性进行筛选,希望转染的质粒和基因组进行重组结合.瞬时转染的话,大概在48小时的样子,效果会比较好,不过这个不同的细胞是不一样的,需要你自己摸索下了.
荣成市18831141047： 大家好,我的质粒是6000多bp的,比较大,我想用它做基因转染,实验室有经验的都说太大了,不好转. - ？
中叔变普沁： 楼上这么鄙视的好心人~ 你是插入片段6K还是质粒大小6K 不过无所谓 都不算大 可以直接脂质体转染 病毒侵染是为了将质粒整合到细胞的基因组中 保证长期稳定表达 不会随着细胞分裂丢失 如果你不需要这种稳定表达 就直接转染好了 ps 病毒侵染哪有那么贵 你们实验室是没有建立这个系统么
荣成市18831141047： 细胞系的建立哪位了解 - ？
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荣成市18831141047： 社团创立方法 - 在大学里怎样才能建社团我是大一新生,看到大学里有好多社团,可是都 ？
中叔变普沁： 首先,具备合理性.找几个志同道合的朋友集思广益,明确了社团的意义、组织结构、人员构成、活动方案等细节后,以书面形式整理出来; 其次,具备合法性.要有权威人物的支持,比如学生工作负责人、班主任、团委书记、指导员等,根据学校有关规定报批. 最后,具备普遍性.成立之初,首要任务是建章立制,定下规矩,即使是创始人也要坚持遵守;要想让社团长盛不衰,就需要广纳人才,招募社员不能来者不拒,要有甄选程序;最重要的还是加强宣传工作,具体形式可以是海报、传单、广播、现场演讲等,效果最好的是举办别开生面的“招新会”. 实际上,“特色”是一个社团的生命力所在,抓准抓好自己的“特色”才能办好社团.
荣成市18831141047： 我今年22岁,该怎么规划自己以后的人生,有哪位成功人士能指导一下我 - ？
中叔变普沁： 做点自己想做的,根据自己经济生活条件,自身能力爱好来妥善安排,,不要怕失败,要不断尝试,更加完善自己,充实自己
荣成市18831141047： SEOER高人请进,想请seo高人帮忙做个SEO学习计划 - ？
中叔变普沁： 1:空间和域名知识2:关键词的选择、密度、分布,以及中文分词技术3:对搜索引擎友好的网页设计制作(1)目录结构和URL(2)导航结构(3)框架结构(4)图像优化(5)表...
荣成市18831141047： 怎样在私企跟男的同事相处,不说话觉得闷,说话又容易把握不好分寸 - ？
中叔变普沁： 你首先要把自己的心态调整过来,要明白自己和他们交流的目的,不要让别人感觉你刻意躲着他们,也不要让他们感觉你刻意的和他们搞好关系,总之尽量自然的和他们交流最好
荣成市18831141047： 就节目点子求教各位单位打算组织文艺晚会,敝人才疏学浅,求教各位想 ？
中叔变普沁： 活动: 1、联欢会:工作很烦琐很碎人员分工要做好,包括采购所需物品、会场布置... 将杯子放好,再展开报纸给观众. 4.跳动的火柴 偶然遇见一伙朋友,您可以告诉他...
荣成市18831141047： 我是大专生,刚大一,想要学习英语过四六级,但是刚开始不知道从何做起,希望给点建议 - ？
中叔变普沁： 其实学好英语不难,关键是肯下功夫,但其实也可以学习娱乐兼得.我觉得你可能英语基础还不是很好,可以买本2级或者3级的新概念自学,坚持读背,多看听一些难度适当的课外读物,还有就是在娱乐中学习.下载些中英双语字幕的电影,把里面的对话内容搞懂,学习新单词,跟读,找到英语的语感.
荣成市18831141047： 问北京的朋友们,这两天打算去木兰围场,去过的朋友给点建议? - ？
中叔变普沁： 我刚从木兰围场回来,晚上很冷,带个厚点的长袖上衣和长裤.白天主要看天气预报了,如果晴天是很晒的,注意防晒,防晒伞和防晒霜要准备好.蚊虫很多,而且都很毒,所以请务必带上最强力的防蚊水和扇子(不停的扇风也可以防蚊虫).开车去的话要注意看路标和路况,路上可以方便的地方不是很多,注意饮水问题.最好带着手电筒,手机和数码相机的电池电量要足,因为可能会有无法充电的情况发生(我就赶上了,幸亏带了3快手机电池).
