蛋白质的纯化方法有那些呢?具体步骤是什么?
①浊点萃取法(CPE)： 浊点萃取法(cloud point extraction，CPE)是近年来出现的一种新兴的液—液萃取技术，它不使用挥发性有机溶剂，不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离。目前该法已成功地应用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化及环境样品的前处理中。
CPE 法除了利用增溶作用外，还利用了表面活性剂另一个重要性质——浊点现象。溶液静置一段时间(或离心)后会形成两个透明的液相：一为表面活性剂相(约占总体积的5％)；另一为水相(胶束浓度等于CMC)。外界条件(如温度)向相反方向变化，两相便消失，再次成为均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物质如膜蛋白，与表面活性剂的疏水基团结合，被萃取进表面活性剂相，亲水性物质留在水相，这种利用浊点现象使样品中疏水性物质与亲水性物质分离的萃取方法就是浊点萃取。图1显示了由温度变化引发的这种相分离现象。温度的改变，引起水化层的破坏，增强了表面活性剂的疏水性。
②置换色谱法：置换色谱(displacement chromatography)作为一种非线性色谱技术，是指样品输入色谱柱后，用一种与固定相作用力极强的置换剂(displacer)通人色谱柱，去替代结合在固定相表面的溶质分子。样品在置换剂的推动下沿色谱柱前进，使样品中各组分按作用力强弱的次序，形成一系列前后相邻的谱带，并在置换剂的推动下流出色谱柱。置换色谱的分离行为与样品组分和置换剂在实验条件下的吸附等湿线有直接的联系。置换色谱要求样品组分及置换剂的吸附等湿线应为Langmuir 型，而且置换剂相对于被分离的各组分应有最强的吸附能力，其吸附等温线位于所有组分的吸附等温线的上方。
③亲和层析法（aflinity chromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合。其基本原理：蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离（Separation），提纯（Purification）和鉴定（Characterization）是生物化学中的重要的一部分，至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。
④电泳法：各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。
蛋白质分离纯化常用方法有：
1、沉淀，
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：
a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定PH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。
b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开。
（一）材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：
1. 机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3. 反复冻融法
生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 超声波法
使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5. 酶法
如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
(二) 蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
（三）蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：
1. 等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。
（四）样品的进一步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么
超滤、离心和凝胶过滤等.透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法.透析是将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液进行分离.超滤是利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜,而蛋白质被截留在半透膜上的过程.这两种方法都可以将蛋白质大分子与以无机盐为主的小分子分开.它们经常和盐析、盐...
蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么
1.根据分子大小不同进行分离纯化 蛋白质是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子大小不同,因此可以利用一些较简单的方法使蛋白 质和小分子物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离.根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等.透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法.透析是将待分离的混合物...
蛋白质化学学习心得1000字
蛋白质在沉淀过程中, 结构和性质都没有发生变化, 在适当条件下, 可以重新溶解形成溶液, 所以这种沉淀又称为非变类型: 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法, 如等电点沉淀法、 盐析法和有机溶剂沉淀法等。 不可逆沉淀 定义: 在强烈沉淀条件下, 不仅破坏了 蛋白质胶体的溶液的稳定性, 而且也破坏了蛋白质的结...
...蛋白时常用蛋白质变性和复性方法来纯化蛋 白质,为什么
拌、震荡等。化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐（如 Hg2+、Ag+、Pb2+ 等）三氯乙酸，浓乙醇等。不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。蛋白质变性后许多性质都发生了改变，主要有以下几个方面：（一）生物活性丧失 蛋白质的生物活性是指蛋白质所具有的酶、激素、毒素、抗原与抗体...
测量蛋白质总量的方法有哪些
氏定氢法是经典的标准方法，但现已不多用。双缩限法常用于需要快速但并不需要十分精确的测用于白质纯化的头几个步骤的测定。 Lowry法多年来被选为蛋白质标准测定方法，此法基于ia-图试剂能定量地与Cu反应，C是由蛋白质的易氧化成分(如琉基、酚基)还原C而产生的。近开发的一个测定蛋白质的试剂，...
亲和层析技术在生物科学中的应用及发展:荣捷生物层析
蛋白复合物的亲和纯化后进行蛋白质谱鉴定已作 为产生蛋白-蛋白间相互作用图谱和复合物在细 胞中位置图谱的有力工具。所有鉴定蛋白复合物 的亲和纯化方法都是利用给蛋白加标签进行的,在 遗传水平上或是在从细胞中提取蛋白的水平上。 蛋白亲和层析方法可能比酵母双杂交方法更优越, 因为它产生较少的假阳性结果并且是...
分段盐析的原理
球蛋白在个饱和硫酸铵溶液中即可析出，白蛋白则需在饱和硫酸钹溶液中才能沉淀，此法是蚩白质分离纯化过程中的常用方法。蛋白质的分子很大，其颗粒在胶体颗粒范围（直径1~100nm）内，所以不能透过半透膜。选 孔径合宜的卞透股，由于小分子物质能够透过，而蚩白质颗粒不能透过，因此可使蛋白质和小分于...
蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点
近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。等电聚焦 等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。等电聚焦凝胶电泳依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质...
核糖体由什么物质组成,含磷么
回答：核糖体是最小的细胞器,光镜下见不到的结构。在1953年由Ribinson和Broun用电镜观察植物细胞时发现胞质中存在一种颗粒物质。1955年Palade在动物细胞中也看到同样的颗粒,进一步研究了这些颗粒的化学成份和结构。1958年Roberts根据化学成份命名为核糖核蛋白体,简称核糖体Ribosome。又称核蛋白体。 核糖体除...
这是什么鱼
看着还是挺好看的 啊
舟致硝酸：[答案] 蛋白质分离纯化常用方法有: 1、沉淀, 2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等. 3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法....
东河区13842025242： 蛋白质分离纯化主要方法? - ？
舟致硝酸：[答案] 蛋白质分离纯化常用方法有:1、沉淀,2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等.3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化...
东河区13842025242： 蛋白质分离纯化常用的方法? - ？
舟致硝酸：[答案] 1、沉淀2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等. 3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法.4、层析: ...
东河区13842025242： 求蛋白分离纯化步骤 - ？
舟致硝酸：[答案] 蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤: (一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性.所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎.常用的破碎组织细...
东河区13842025242： 蛋白质分离纯化方法有哪些 - ？
舟致硝酸： 原发布者:小怪咕咕 二、分离纯化蛋白质的一般程序 分离纯化蛋白质的一般程序可分为以下几个步骤:(一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性.所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎.常用的破碎组织细胞的方法有: 1.机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎.常用设备
东河区13842025242： 蛋白质提纯的方法? - ？
舟致硝酸： 1.透析和超滤 2.等电点沉淀 3.盐析 4.有机溶剂沉淀 5.电泳 6.亲和色谱
东河区13842025242： 分离和提纯蛋白质的方法 - ？
舟致硝酸： 1. 前处理把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来,保持原来的天然状态,并不丢 失生物活性.常用的方法:匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等.超声波来破碎法:当声波达到一定频率时,使液体产生空穴效应使细胞...
东河区13842025242： 有哪些沉淀方法可以纯化蛋白质?多写几种 - ？
舟致硝酸：[答案] 1、等电点沉淀法.蛋白在其等电点位置溶解度最低,因而易于沉淀出来. 2、盐析法.根据蛋白在不同浓度的盐溶液中溶解度不同,进行蛋白分离纯化. 3、有机溶剂沉淀法.如乙醇、丙酮能使大多数球状蛋白在水溶液中的溶解度降低,使得蛋白从溶液中...
东河区13842025242： 提纯蛋白的步骤 - ？
舟致硝酸： 分离纯化蛋白质的原理与方法──凝胶色谱法(分子筛效应)凝胶是一些由多糖类化合物构成的多孔球体,当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质直径小于凝胶网孔,由于静电吸附和扩散作用容易进入凝胶内部的...
东河区13842025242： 蛋白质的分离纯化技术有哪些?尽量全面一点, - ？
舟致硝酸：[答案] 蛋白质的分离纯化方法很多,主要有: (一)根据蛋白质溶解度不同的分离方法 1、蛋白质的盐析 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度...
