请问:怎样分离提纯微生物?
你都没说是那种微生物,怎么详细法?
采样:尽量到植物茂盛,土壤比较肥沃的地方,取土
分离:多次用水浸泡采到的土,过滤,取续滤液
提纯:将续滤液涂布在相应的选择性培养基上,选取生长状态比较好的菌落进一步培养。
最好说详细点,你想要提纯什么样的菌种,不然想帮你都帮不上
微生物分离纯化中的纯化指的是获取单一菌落(或者“单菌落”)。
一般可以通过平板划线法或者稀释涂布平板法对微生物进行纯化。
(1) 倒平板 将肉膏蛋白胨琼脂培养基, 高氏Ⅰ号琼脂培养基;马丁氏琼脂培养基加热溶化,待冷至55~60℃, 高氏Ⅰ号琼脂培养基加入10%酚数滴,马丁氏琼脂培养基加入链霉素溶液。混匀后分别倒平板,每种培养基倒三皿;
(2) 制备土壤稀释溶液 称取土样10g,放入盛有90ml无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶,振动约20min,使土样与水分混合,将细胞分散.用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml无菌水的试管中,混合均匀,以此推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释的土壤溶液;
(3) 涂布 将上述每种培养基的三个平板地面分别用记号笔写上10-4,10-5,10-6三种稀释度,然后用无菌吸管分别由10-4,10-5,10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml对号放入已写好室温下静置5~10min,使菌液吸附进培养基;
(4) 培养 将高氏Ⅰ号琼脂培养基平板;马丁氏琼脂培养基平板倒置于28℃温室中培养3~5day,肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2~3day;
(5) 挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上,分别置28℃和37℃温室培养,大菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是为单一的微生物。若发现有杂菌,需要再一次进行分离、纯化,直到获得纯培养。
2.平板划线分离法
(1)倒平板 按稀释涂布平板倒平板,并用记号标明培养基名称,土样编号和实验日期;
(2) 划线 在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线.划线的方法很多,但无论采用那种方法,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使之形成单个菌落;
(3) 挑菌落 同稀释涂布平板法,一直到分离的微生物认为纯化为止。
做一个平板培养基 安无菌操作法 挑取少量的微生物 划线培养
首先确定这种微生物需要的营养物质是什么,配制相应的培养基,然后将菌液稀释,涂在培养基平板上,稀释度大概保证每一个细菌都在培养基上分离,经过一段时间的培养,单个细菌长出菌落,然后挑取菌落,显微镜镜检。
一般大学里的微生物实验书里面都有微生物提纯的操作,譬如从土壤里分离并且纯化微生物,可以分离出单一的菌体,完成这项操作需要基本的微生物实验技能。
去买本书先看看吧,《微生物实验》。
第一个回答其实就差不多,但是我想他答的并不具备普遍性,而只是教科书上关于“土壤中微生物的分离”的相关资料。
这不要紧,我来补充补充。首先你要分析你的原始样品的环境特性,确定培养基,比如海里的样品就要用含盐比较高的培养基例如DIFCO 2166,而盐碱土里采集的样品就应该把pH调到碱性。另外要注意原始样品到底是富营养还是寡营养,比如湖水就是寡营养环境,从这样的样品中分离微生物就应该选择营养物质浓度较低的培养基。再就是尽量模仿原始样品的温度,比如从低温环境下采集的样品就应该进行较低温度的培养,而从温泉之类的地方采集的样品就应该进行高温培养。诸如此类,不一而足,反正就是尽量模仿微生物在自然界的生存条件,这样才能在实验室培养出尽量丰富的微生物品种来。事实上到目前为止真正能在实验室培养出来的微生物品种只占环境中所有物种的1%不到,这是题外话了。
另外,步骤一般就是:选择合适的稀释度,先进行涂布分离,然后挑取你感兴趣的单菌落进行划线分离。
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廖齐羟甲: 选择性培养基,固体平板,单菌落画线、稀释倾注法 等等.反正获得了纯种为原则.不同微生物种类、不同代谢类型也选用不同的纯化方法.你若具体一点的话,可给你更为具体的建议.
青神县19625661522: 如何纯化微生物 - ?
廖齐羟甲: 你可以采取以下两种方法: 1.若是你不知道你所要纯化的微生物的特征,最简单的不知道它的菌落特征和形态大小,那现根据你要分离菌的特性,找适合的初筛培养基,找到你要纯化的菌.如纤维素菌,你在培养基中加纤维素粉或CMC-Na作碳源,这样就可以帅选出分解纤维素的菌.然后再用下面的方法继续纯化. 2.若你知道目标菌的形态,可以直接挑混合菌划平板,直到长出当个菌落,并且在镜下没有杂菌即可;或者挑菌稀释涂布得到当个菌落也行. 若有不明白可以问我!
青神县19625661522: 微生物分离方法 - ?
廖齐羟甲: 微生物分离法是获得微生物纯培养物的一种分离方法.通过这个方法可实现一种微生物的培养,或获得一个细胞的后代.其具体方法有: 1、稀释倒平皿法.将待分离的材料作一系列稀释,取不同稀释度适量涂布于固体培养基平板上或与已熔化...
青神县19625661522: 微生物的分离与纯化的常用方法有哪些 - ?
廖齐羟甲:[答案] 分离:稀释倒平皿法平板划线法单细胞挑取法利用选择培养基分离法纯化:1.若是你不知道你所要纯化的微生物的特征,最简单的不知道它的菌落特征和形态大小,那现根据你要分离菌的特性,找适合的初筛培养基,找到你要纯化的...
青神县19625661522: 实验室分离纯化微生物常用什么方法? - ?
廖齐羟甲:[答案] 选择性培养基,固体平板,单菌落画线、稀释倾注法 等等.反正获得了纯种为原则.不同微生物种类、不同代谢类型也选用不同的纯化方法.你若具体一点的话,可给你更为具体的建议.
青神县19625661522: 如何从自然界中分离纯化自己想要的目的微生物 - ?
廖齐羟甲: 这个过程叫做“筛选”. 首先确定你所要筛选的目的微生物,并设计好“筛子”.以纤维素酶产生菌的筛选为例. 先找可能存在此类微生物的环境,如森林里的枯枝烂叶和腐质土.采好样品,拿回实验室,首先进行扩大培养.就是把样品中所...
青神县19625661522: 如何有效地从自然界中提取微生物? - ?
廖齐羟甲: 根据微生物的特性 适当选择正确的选择培养基 培养微生物 根据菌落的形态 就可以分离想要的微生物 比如说 分离尿素分解菌 就可以用尿素做唯一氮源的选择培养基进行培养
青神县19625661522: 实验室微生物菌种纯化方法 - ?
廖齐羟甲: 菌种纯化方法一般有:涂布平板分离法,倾注平板分离法,平板划线分离法,组织分离法.1.涂布平板分离法是样品经过适当稀释后,用无菌玻璃涂棒取稀释液均匀地涂布在培养皿的琼脂平板表面,培养后挑取单菌落;2.平板划线分离法是用接...
青神县19625661522: 微生物的培养,分离,纯化 - ?
廖齐羟甲: 1选择适合于待分离微生物的生长条件,如营养,酸碱度,温度和氧等要求或加入某种抑制造成只剩于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从而淘汰一些不需要的微生物2微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体
青神县19625661522: 如何从污水(或土壤)中提取微生物 - ?
廖齐羟甲:[答案] 把污水加蒸馏水分别稀释10,100,1000倍,然后加入培养基中培养,如果培养出来菌落重合,菌非常多,无法分离,就加大稀释倍数,直至获得清晰可分离的菌落,有时甚至是非常小的菌落,要用倒置显微镜操作.而培养基则根据要分离的...