24孔板培养细胞的问题，很困扰，请高手指点！

6孔版，24孔板，96孔板培养细胞加培养液多少~

6孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml。
12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml。
24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml。
96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。
为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。

扩展资料：
注意事项
（1）第一次开始培养某种细胞时，一定要对该细胞的名称进行检索，可以得到关于该细胞的详细信息，包括需要使用的培养基、血清、添加剂、通常的消化时间、传代时间等。对于特定的细胞（如原代培养的细胞），需要查阅相关文献来获得更准确的培养方法。
（2）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：
1、确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。
2、确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。
3、确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。
4、确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。
5、尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。
6、操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。
7、实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。
参考资料来源：百度百科-细胞培养

博凌科为解答：是中央长不满，还是中央有和边缘相同密度的细胞，但是大部分都是死细胞？如果是前者，也许不是技术问题，而是物理问题了。我是选择孔内铺盖玻片，在玻片上种植。每次换液都用PBS洗，必要的步骤吗？另外，也有可能和细胞种类有关或者和培养液有关？我想你的培养液可能加的太少了。由于表面张力的作用，培养板的边缘液体会向上走，造成培养液面呈现一个凹面（就像量筒的液体凹面一样），中央的细胞正好在凹面的最低处，培养液少，细胞的营养不够，甚至干涸掉，空气中的氧气也 会造成损伤，即使有增值过来的细胞也会死掉。估计你的培养液里可能有贵重的银子（因子）啊，想少用点吧，结果就 ：）另外，检查一下培养箱底部的水是否少了，如果少了，箱内的空气湿度不够，会造成培养液挥发加快，这样即使刚加的液体不少，过一段时间，由于蒸发，液 体量会减少，造成中央干涸。并且这样会改变了培养液的成分浓度，造成渗透压过高。个人经验认为这是物理问题:24孔板小，细胞接种进去后是很难摇均匀的，结果导致细胞重贴壁后呈现四周密中间稀的状况.至于中间较多死细胞，如果是悬浮状的话，也一样是物理问题。接种后比较粗暴的碰撞，似乎对摇均匀细胞有一定效果.在为多孔板培养的细胞换液时一定要注意，不要把培养基吸得太干，如果完全吸取，很容易造成细胞干涸，这样的话细胞会很快死亡。我有一段时间总是遇到 这个问题，一个板子中总有一两个孔出现细胞大量死亡，后来发现是上面的原因。现在我做的时候如果必须把液体吸干，我会一个一个空来吸取，最多一次不超过3 孔，然后马上加入液体，同时在作转染时，我会在吸液和加液时将风机关掉，这样基本上会避免细胞死亡。同时你所说的细胞周围密而中间稀疏，大约有如下原因：1.培养液加得太少。主要是由于液体张力的问题。2.细胞接种后震荡太厉害了。由于离心力作用导致细胞分布到周围。

博凌科为解答：吹细胞时注意不要把枪头打空，不要吸进空气，一般就不会有泡沫了，少量泡沫也不会影响很大。中间细胞多可能是由于你摇匀细胞时，板子是圆周运动的，这样细胞就会聚集到中间。最好用十字运动摇匀，注意用力均匀。

吹打时不要吸入空气就可以！
铺板时先铺一层培养液缓冲可防止细胞不匀，铺板后可以垂直或平行晃细胞板！
细胞慢慢死有可能是支原体污染！

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合川区15668597254： 24孔板培养细胞的问题,很困扰,请高手指点!？
呈味灭菌： 博凌科为解答:吹细胞时注意不要把枪头打空,不要吸进空气,一般就不会有泡沫了,少量泡沫也不会影响很大.中间细胞多可能是由于你摇匀细胞时,板子是圆周运动的,这样细胞就会聚集到中间.最好用十字运动摇匀,注意用力均匀.

合川区15668597254： 我是新手,24孔板培养细胞Gimesa染色观察集落形成,细胞挨着孔的周边成片长,有些中间的细胞没染上色咋办 - ？
呈味灭菌： 那至少说明你的细胞开始接种时没有摇均匀,不过24孔板确实很难摇匀.此外,染色得多操作几次,根据经验可以慢...

合川区15668597254： 细胞培养24孔板中其中一个空污染怎么处理 - ？
呈味灭菌： 6孔板中致病菌粘附细胞培养会污染细胞培养箱 细胞培养最关键的还是操作,如果操作规范的话,污染几率是很小的,如果在培养的时候总是有黑色点状物质,可以考虑是不是细胞碎片或者血清里的蛋白质沉淀.细胞污染可能原因: 1.天气太热,实验者在培养和接种或者换液时出汗(有空调稍好,但是手也出汗). 2.培养间里可能暗藏污染原. 3.注意培养箱(这点最重要),仔细检查培养箱里的隔板的下面,有可能有霉菌斑.(我以前遇到过) 4.培养基污染多数是配置过程中造成的,仔细检查配置过程用到的器具.

合川区15668597254： 请问24孔细胞培养板如何收取细胞? - ？
呈味灭菌： 您好:1. 收细胞的方法直接取决于你下游的检测手段.如果马上测糖原,胰酶消化不应有影响.您甚至可以考虑直接在孔中裂解细胞.2. 如果需要做其他操作,甚至继续传代培养,那就要做实验验证一下,优化一下消化液组成,浓度,消化时间...

合川区15668597254： 细胞消化接种到24孔板之后,老是每孔的中间部分长不满 - ？
呈味灭菌： 铺板时没铺匀 铺板后可以平行晃培养板 中央有死细胞 是不是你每次都是对着中间加试剂,将细胞冲死了,要沿壁加液! 其它的不懂了

合川区15668597254： 为什么我的细胞培养的时间一长,就会出现污染?? - ？
呈味灭菌： 楼主的细胞是被虫子污染.你平时应该经常有观察,总是在半个月就出虫?是虫,不是污染的细胞?板使用之前先照紫外光看看,照2小时应该能杀虫卵.整个实验室是否彻底消毒过,如果别人也是这样的情况,就消毒一下.另外培养箱要彻底消毒.还有注意放置的位置.培养箱里也会出现交叉污染.不知道你是不是和别人共用培养箱,如果有别的比较强悍的细胞也放在培养箱里,你要把自己的细胞放在那些细胞的上层,最强悍的细胞就放到一楼,最弱的细胞放顶楼.另外,建议去订一批新的板.

合川区15668597254： 细胞培养板(24孔板)能不能放入液氮中?会不会裂开?放置时间5min. - ？
呈味灭菌： 应该不可以...那种塑料材质最多能耐-20度吧,不过你可以拿一个空的或者用过的去试一下,5min有可能能撑住.别把有用的带着细胞的直接放进去了...或者盛一点出来放在泡沫塑料盒里把板平放进去,可能会好一点 希望能够帮到你~有问题一起讨论解决哦~

合川区15668597254： 如何用载玻片让培养的细胞爬片 - ？
呈味灭菌： 细胞爬片都是用盖玻片的,一般用24孔板,每孔放一片,(把载玻片预先切好,泡酸过夜,自来水冲洗20遍,去离子水3遍,双蒸水3遍,高压消毒)用眼科镊夹取,小心操作,还是可以的.如果细胞不好贴壁可以涂点多聚赖氨酸. 用载波片做爬片也是可以的, 把载波片泡酸,自来水冲洗后,高压消毒,载波片放平皿里,先滴上0.1%明胶或胶原,1小时后再接种细胞.

合川区15668597254： 24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?？
呈味灭菌： 博凌科为解答:也遇到过类似的情况,如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的,会在风机下风干的,很快的,这样你在加到后面的孔时,部分细胞已经干了,所以你先加的很好,后面的就有问题.解决办 法就是,你不要一起吸净所有孔的液体,6个孔为一个单位,吸弃孔里的液体,在加DNA-Lipofectamine complex,就可以了.

合川区15668597254： 24板长满了细胞浓度大概为多少?我之前用培养瓶养骨髓瘤,细胞浓度大概为4.5乘以10的6次方,我现要将其转到24孔板中培养一天,一天后细胞最好长到... - ？
呈味灭菌：[答案] 24板长满了细胞大约有3X10(5)个细胞.如果你一天后要长到70%(2.1x10(5)),建议你放1.2-1.4X10(5)个细胞.因为细胞刚放进去的前几个小时需要粘在生长表面及适应新的生长条件,不会达到24小时翻一倍的速度. 这个只是粗略估计,先试试.