请教细胞周期分析原理和分析结果解释

作者&投稿:塞波 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理~

实验原理:流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化,如G0/G1期的DNA含量为2C,而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定,可分析细胞周期各时相的百分比。

  细胞周期与细胞死亡方式之间的关系
  细胞周期是连续分裂的细胞从分裂间期到分裂末期所需的时间 细胞分化是细胞内遗传物质按一定顺序表达的结果(细胞形态.结构。功能发生稳定变化和差异的过程) 细胞癌变遗传物质改变,细胞膜表面糖蛋白变异,流通性强,容易在体内转移!
  细胞周期(cell cycle)是指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段.
  (一) 间期
  间期又分为三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期).
  1.G1期 此期长短因细胞而异.体内大部分细胞在完成上一次分裂后,分化并执行各自功能,此G1期的早期阶段特称G0期.在G1期的晚期阶段,细胞开始为下一次分裂合成DNA所需的前体物质、能量和酶类等.
  2.S 期 是细胞周期的关键时刻,DNA经过复制而含量增加一倍,使体细胞成为4倍体,每条染色质丝都转变为由着丝点相连接的两条染色质丝.与此同时,还合成组蛋白,进行中心粒复制.S期一般需几个小时.
  3.G2期 为分裂期做最后准备.中心粒已复制完毕,形成两个中心体,还合成RNA和微管蛋白等.G2期比较恒定,需用1~1.5小时.
  有丝分裂
  (二)分裂期
  M 期:细胞分裂期.
  细胞分裂期:前期,中期,后期,末期.
  细胞的有丝分裂(mitosis)需经前、中、后,末期,是一个连续变化过程,由一个母细胞分裂成为两个子细胞.一般需1~2小时.
  1.前期(prophase)染色质丝高度螺旋化,逐渐形成染色体(chromosome).染色体短而粗,强嗜碱性.两个中心体向相反方向移动,在细胞中形成两极;而后以中心粒随体为起始点开始合成微管,形成纺锤体.随着核仁相随染色质的螺旋化,核仁逐渐消失.核被膜开始瓦解为离散的囊泡状内质网.
  2.中期(metaphase)细胞变为球形,核仁与核被膜已完全消失.染色体均移到细胞的赤道平面,从纺锤体两极发出的微管附着于每一个染色体的着丝点上.从中期细胞可分离得到完整的染色体群,共46个,其中44个为常染色体,2个为性染色体.男性的染色体组型为44+XY,女性为44+XX.分离的染色体呈短粗棒状或发夹状,均由两个染色单体借狭窄的着丝点连接构成.
  3.后期(anaphase)由于纺锤体微管的活动,着丝点纵裂,每一染色体的两个染色单体分开,并向相反方向移动,接近各自的中心体,染色单体遂分为两组.与此同时,细胞波拉长,并由于赤道部细胞膜下方环行微丝束的活动,该部缩窄,细胞遂呈哑 铃形.
  4.末期(telophase)染色单体逐渐解螺旋,重新出现染色质丝与核仁;内质网囊泡组合为核被膜;组胞赤道部缩窄加深,最后完全分裂为两个2倍体的子细胞.
  G0期:暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,去执行一定生物学功能的细胞所处的时期.
  在体内根据细胞的分裂能力可把它们分为三类:①增殖细胞群,如造血干细胞,表皮与胃肠粘膜上皮的干细胞.这类细胞始终保持活跃的分裂能力,连续进入细胞周期循环;②不再增殖细胞群,如成熟的红细胞、神经细胞、心肌细胞等高度分化的细胞,它们丧失了分裂能力,又称终末细胞(end cell);③暂不增殖细胞群,如肝细胞、肾小管上皮细胞、甲状腺滤泡上皮细胞.它们是分化的,并执行特定功能的细胞,在通常情况下处于G0期,故又称G0期细胞.在某种刺激下,这些细胞重新进入细胞周期.如肝部分切除术后,剩余的肝细胞迅速分裂.

博凌科为生物科技-为你解答:1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间。可分为四个阶段(见图):① G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间;② S期(synthesis phase),指DNA复制的时期;③ G2期(gap2),指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间;④ M期又称D期(mitosis or division),细胞分裂开始到结束。2、从增殖的角度来看,可将高等动物的细胞分为三类:①连续分裂细胞,在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞,如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。②休眠细胞暂不分裂,但在适当的刺激下可重新进入细胞周期,称G0期细胞,如淋巴细胞、肝、肾细胞等。③不分裂细胞,指不可逆地脱离细胞周期,不再分裂的细胞,又称终端细胞,如神经、肌肉、多形核细胞等等。细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关,如:小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时,人类胃上皮细胞24小时,骨髓细胞18小时,培养的人了成纤维细 胞18小时,CHO细胞14小时,HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同,是造成细胞周期差异的主要原因。3、流式细胞结果图各参数的意义:前面讲过,常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量(横坐标)来分析的:G1期:细胞DNA复制还没有开始,也是DNA含量最少的,即流式检测结果图的第一个峰;S 期:细胞开始复制,到完成复制,是一个一倍DNA到二倍DNA的过程,在流式结果图中显示期跨度特别大(第二个不高但很宽的峰);G2期:DNA复制完成至分裂的一段时间,此时细胞内含二倍DNA,在流式结果图中的第二个峰;M期:细胞分裂过程,此时细胞内也是二倍DNA,用DNA含量的方法是无法与G2期分开,所以有第三峰明显升高时报告:G2/M期阻滞。上图是DOS系统下分析细胞周期的一个示意图。不同的机器分析结果参数表示略有不同,但主要看G1、G2、S三个期的数值即可。1、纵坐标Cell Number:即计数到的有效细胞数;2、横坐标DNA Content:即DNA量,为什么用DNA量来区别各周期我们等下再讲;3、G1、G2、S三期在上图已经用箭头标示;4、右侧数字含义:Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值为195.4;%G1=73.6即G1期细胞数占总数的73.6%;以此类推


细胞周期分析原理和分析结果解释
细胞周期分析原理和分析结果解释1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间。可分为四个阶段(见图):①G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间;②S期(synthesisphase),指DNA复制的时期;③G2期(gap2),指DNA复制完成到有丝分裂开始...

FlowJo分析细胞周期,教程详解!
细胞周期是一个细胞从有丝分裂起始到结束的关键过程,包括G0\/G1期、S期、G2期和M期。FlowJo作为一种常用的工具,能通过核酸染料PI标记和流式细胞仪分析,帮助我们详细观察细胞周期分布。其核心原理是PI染料与DNA结合的比例与其含量成正比,从而区分细胞各时期的丰度。以下是使用FlowJo进行细胞周期分析的步...

请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理
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探究细胞周期实验的要点
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细胞周期调控原理内容简介
《细胞周期调控原理》是一本对细胞分裂机制进行深入解析的指导书。全书系统地整合了相关知识,着重探讨了细胞周期的关键问题及其分子机制的进化。书中的每章节都有多个小节,内容涉及细胞周期概述、模式生物、调控系统、染色体复制、有丝分裂、胞质分裂、减数分裂、调控细胞增殖与生长,以及DNA损伤反应与肿瘤的...

【剖析】:细胞增殖、周期方法
MTT法是一种更为直观、操作简单的细胞计数方法。通过外源性MTT被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原,产生可溶性蓝紫色结晶物,死细胞则无法完成这一过程。用DMSO溶解结晶物后,通过酶联检测仪测定其光密度值,反映活细胞数量。流式细胞术提供了细胞周期分析的新平台。该方法基于化学定量染色,染料着色数量与...

流式细胞仪测定细胞周期各时相的原理和基本步骤(不用说具体使用的量...
培养一段时间后(一般小于一个细胞周期),固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同,使用不同的方法。EdU,改变缓冲液的pH值,就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别,需要对细胞膜和核膜进行通透处理。再加入PI对DNA染色。在二维坐标图上,横坐标设为线性PI荧光强度,纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度(log...

细胞周期同步化的方法与原理
而细胞的其他变化不受此影响,比如核膜核仁已完成解体消失,染色质已高度螺旋化成为染色体等等,这都是中期的重要特点]。处于间期的细胞,受药物的影响相对较弱,常可以继续运转到M期。将分裂中期细胞悬浮于新鲜培养液中继续培养,它们可以继续分裂并沿细胞周期同步运转,从而获得G1期不同阶段的细胞。

细胞周期实验加药多久后收集细胞
1-2天。1、用药后1-2天收集细胞做细胞周期的FCM检测,一个孔的细胞便足够了,所以加药后1-2天便可以收集细胞。2、细胞周期测定实验原理:体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。

什么是细胞周期
细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。生命是从一代向下一代传递的连续过程,因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成,或是细胞的自身死亡。通常将子细胞形成...

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陆常牛黄: 博凌科为生物科技-为你解答:1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间.可分为四个阶段(见图):① G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间;② S期(...

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陆常牛黄: 博凌科为解答:PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 和RNA 结 合,采用RNA 抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测 到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少.由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常 正常...

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陆常牛黄: PI单染检测细胞周期 原理: 碘化丙啶(Propidium ,简称PI)是一种双链DNA的荧光染料.碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比.细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行...

费县17257363574: 细胞周期数据分析求助 -
陆常牛黄: 细胞周期至少有两种做法,最常见的如下图分析:这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期.红色的gate就是G1期,绿色的就是S期,橙色的就是G2/M期.BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析 如果单用PI等DNA染料染色,需要专业软件来分析计算了.比如这个图,是DNA染料单染,其中粉色部分是G1期,黄色部分是S期,绿色部分是G2/M期.中间的分布一般是通过FlowJo这样的软件计算自动生成的.

费县17257363574: 细胞周期的名词解释? -
陆常牛黄: 细胞周期的定义生命是从一代向下一代传递的连续过程,因此是一个不断更新、不断从头开始的过程.细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成,或是细胞的自身死亡.通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期.在这一过程中,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞.

费县17257363574: 什么是细胞周期?各个时期的特点是什么? -
陆常牛黄: 详见高中生物必修一细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段.(细胞分裂(cell division)是指活细胞增殖其数量由一个细胞分裂为两个细胞的过程.分裂前的细胞称母...

费县17257363574: 什么是细胞周期,可分为哪四个阶段 -
陆常牛黄: 细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段. 其中的分裂期又分为前中后末四个阶段.

费县17257363574: 细胞周期概念?
陆常牛黄: 从一次细胞分裂开始到下一次细胞分裂开始之间所经过的时间叫做细胞周期或者叫做细胞分裂周期.

费县17257363574: 5. 细胞周期 名词解释 -
陆常牛黄: 正常进行分裂的细胞,一次细胞分裂结束到下一次细分裂开始所经历的时间

费县17257363574: 细胞周期,求解释各个选项 -
陆常牛黄: G1期主要进行DNA复制的准备,S期主要进行DNA的复制,G2期为M期做准备(合成微管微丝蛋白),M期就是分裂了.A/s期长没什么用,有丝分裂我们观察的主要是染色体,此时还没有染色体 B/S期只要进行DNA复制,要的不是氨基酸,而该是脱氧核苷酸 C/抑素作用于G2期,应该针对的微管微丝的合成,而非DNA D/只能是他了,ABC都是错的.解释的话,没法解释,可能当然是有可能的.

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