制备的感受态细胞涂板 什么都没长?质粒 连接都没有，而且转大瓶的活化时间比之前长了很多？请问这是
博凌科为-为你解答：你好，你这个问题没怎么说清楚，首先，你可以转个puc-19做对照，检测感受态效率。如果感受态没问题，你就该看看你的连接是否成功，最重要的是载体和片段的比例，以及连接时间。我觉得你是新手，转化的时候有一些注意事项，不知道你是否注意。像你说第二天看张白斑了，我觉得是amp失效后长的杂菌，不必去鉴定。
是4度吧。。放4度是抑制其生长。。若放在-20度，虽然经过转化后复苏，细胞是有些恢复了活性，但是毕竟还是很脆弱，-20度冷冻细胞，然后再解冻使用的话，很容易使细胞死亡的，加之如果本来细胞的转化效率就不是很高的话，可能再次涂板的结果是没有菌落长出。。。
一般，我们做实验，剩余对的菌液是不会再用的，一是不靠谱，二是若是涂的板没长单菌落的话，那么这个剩余的菌液也就没什么作用了：若是长出了，大可以抽提质粒，下次用时再转，或者摇菌后用甘油保种，下次用时可选择划线，也可以直接摇菌。。。
个人感觉那个剩余的菌液，不存也罢。。不知道你那边存起来时为了？？？
制备感受态细胞,在有氨苄的LB平板上长了很多菌,但是跑电泳却不见条带...
长的菌是一个一个菌落分的很开的吗？如果是的话，建议从头重复一次实验。可能是实验操作问题。如果菌落不分开，那就再做一次后面的涂板挑克隆就可以了。
感受态细胞涂平板 什么菌落都没有长出来 请教高手
博凌科为-为你解答：你好，你这个问题没怎么说清楚，首先，你可以转个puc-19做对照，检测感受态效率。如果感受态没问题，你就该看看你的连接是否成功，最重要的是载体和片段的比例，以及连接时间。我觉得你是新手，转化的时候有一些注意事项，不知道你是否注意。像你说第二天看张白斑了，我觉得是amp失效...
冻融法制备农杆菌感受态细胞,并且转化质粒相关问题。
实验结果不能肯定的说明结果是成功的，做实验的阴性对照也很重要，阴性对照必须做出阴性结果。如楼下的网友所说，可能是你的感受态菌被质粒污染了。现在我回答一下你的 追问吧：“未转化质粒的感受态细胞在同样的LB上涂板也长出单菌落”，那么这个长出的单菌落你有没有做菌落PCR的鉴定？如果你没有做...
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化实验: 在转化实验中,涂平板前需要在37...
两个目的：①热激后的大肠杆菌细胞比较脆弱，培养可以恢复细胞的活性；②进一步培养，提高菌液中大肠杆菌的浓度。
感受态细菌DH5a可以不加质粒直接涂板吗?步骤呢?
这个对照不太对，因为加质粒涂板一般那个平板是有抗生素的，而不加质粒涂板一般是需要不加抗生素的，没有对照的意义。一般是找一个以前做过的或者比较有代表性的质粒转化后作为对照，这样才能显示出感受态的好坏，否则不转质粒，“感受态细胞”这个词也无从说起。
用CaCl2制备感受态细胞怎么总是失败
1、 取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中，37℃，摇荡过夜；2、 取1ml过夜培养物接种于100mlLB培养液中，37℃振荡培养1-3小时，待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）即可；3、 将培养液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中，置冰上10分钟，使菌液冷却到0℃...
大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒的转化结果怎么分析?
涂LBA培养基，37·C。12h 转化子的筛选 天抗平板+感受态 抗Amp平板+感受态+质粒 抗Amp平板+感受态 长满 长满 未长 转化率 转换后的含抗生素的平板上长出的菌落即为转化，根据平板中的菌落数可以计算出转化子总数的转化频率，公式如下。转化指总数=菌落数x稀释倍数x转化反应原液总体积\/涂板菌液体积...
感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理_百度知 ...
5.收集菌体，条件同上。6.弃上清，在冰浴条件下加入0.1mol\/Lcacl2溶液。7.分装保存（40%甘油与感受态细胞1：1混合，使甘油的终浓度为20%）。转化 1 连接产物加入感受态中 2 冰上放置30分钟 3 42° 90秒 4 冰上2-5分钟 5 涂板~细胞转染（这里说的是脂质体转染，以六孔板为例，如果是电转...
酵母感受态细胞的制备需要注意什么
酵母细胞的转化 (1)取50μl感受态细胞，再加入待转质粒各2μl，混匀；(2)加入500μl 转化用溶液（PEG\/LiAc,二甲亚砜），弹击管壁混匀；(3)30℃水浴1hr,隔15min弹击管壁混匀；(4)加入1毫升YPD培养液，30℃摇床培养1小时 (5)3500g离心5 min ，留沉淀，弃上清；沉淀用150μl TE重悬，涂...
怎样知道感受态细胞是否污染
很简单：用感受态（不要转化）单独涂平板，看看是否有菌落生长。如果，有菌落生长，就是污染杂菌了。否则，没有污染。
贸秆山庄： 抗生素平板么?感受态制作失败菌死光了/转化失败没有质粒转入/抗生素类别搞错了
泸州市19819495000： 感受态细胞效价检测没有出来菌落,是怎么回事? - ？
贸秆山庄： 你直接把菌涂平板(基本培养基,不加抗生素)试试,如果能长出来的话,说明你的感受态没做成,或没转进去.
泸州市19819495000： ?用高效价的感受态细胞挑单克隆,严格按照hanahan法制备感受态细胞.测效价完全长不出菌落的原因? - ？
贸秆山庄：[答案] hanahan的方法没有问题 一般是两个原因(排除你板子和试剂的原因,当然你也要确认一下) 1.hanahan的方法对OD值的要求特别高(差几分钟就差一个数量级),如果这个方面出了问题,感受态的效率会呈指数下降. 2.因为测效价的质粒浓度非常...
泸州市19819495000： 转化大肠杆菌CMR抗性板上一个也不长怎么回事 - ？
贸秆山庄： (1)感受态细胞效率不高,或者根本不是感受态--》制备新的感受态(2)抗生素不正确(3)细胞长的太慢,(延长时间观察)(4)目的基因太毒,细胞被毒死了
泸州市19819495000： ?用高效价的感受态细胞挑单克隆,严格按照hanahan法制备感受态细胞.测效价完全长不出菌落的原因? - ？
贸秆山庄： hanahan的方法没有问题 一般是两个原因(排除你板子和试剂的原因,当然你也要确认一下)1.hanahan的方法对OD值的要求特别高(差几分钟就差一个数量级),如果这个方面出了问题,感受态的效率会呈指数下降.2.因为测效价的质粒浓度非常低,一般为10pg/ul,这个浓度的质粒反复冻融一两次后,基本上里面的质粒就已经降解了,需要重新稀释.
泸州市19819495000： 转化失败原因 - ？
贸秆山庄： 质粒转化一般是没啥问题的.但是结果你杯具了.我总结几个原因: 1.楼上兄弟说热击,标准时间是60-90s,你注意下你是不是热击超时; 2.感受态细胞的问题,感受态是否保存时间过长效率降低;同时,感受态最高的转化效率在解冻的短时间内.你要注意你是否没有在解冻的短时间内加入需转化质粒; 3.质粒抗性原因,要搞清楚你的质粒是什么抗性,是amp还是kana?涂错了板子你就彻底杯具了; 4.有的感受态不是很猛,你转化进去的质粒不能很快使细菌表现出抗性.你迅速涂板子,你就杯具了.有时候要用无抗的LB培养基复苏一下细菌,一般30-60min.差不多了.全手打的,一分不给....
泸州市19819495000： cacl2法制感受态细胞:最近用此法制备感受态细胞,但是转化后的效率很低,几天看看平白机会一个没有长.？
贸秆山庄： 首先要掌握好培养时间,细胞对数生长期的时候再做,一般OD600为0.5左右.其次,在制备的时候要注意一定要整个过程都在冰上,保持低温很重要,特别是离心过程,冷冻离心机要先预冷后再用. 实在不行试试冰浴水洗法吧,操作简单而且电击转化效率很高的.
泸州市19819495000： 感受态细胞复苏时加了氨苄 - ？
贸秆山庄： 转化本身就是要将质粒转进大肠,刚刚进入感受态细胞,还没有完全融合,就被你的抗生素给扼杀了!摇菌一小时目的一个是要扩大培养,另一个就是活化. 参考网址on http://doc.bio1000.com/show-3440.html
泸州市19819495000： 农杆菌感受态的制备关键在哪?为什么我做的,转化后涂板会长一堆堆,转化率应该不会有那么高? - ？
贸秆山庄：[答案] 你做的是电转还是液氮转的,电转的话主要是要洗干净培养基等那些东西.液氮的话我没怎么做过.不过所有的都要到菌状态好,可以在做之前先划几次板,挑好的菌来接种,活化一下菌.
泸州市19819495000： 根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌. - ？
贸秆山庄： 你直接拿没有切的质粒去转化涂板 看有没有长 如果长了就是连接的问题 如果没长就是感受态的问题
